直肠癌远侧端浸润的PETCT显像与分子病理学研究

1、直肠癌远侧端浸润的PET/CT显像与分子病理学研究【摘要】目的：讨论直肠癌远侧端浸润PET/T成像及其分子病理学改变,为直肠癌保肛手术提供评估价值.方法:对45例中低位直肠腺癌下缘进展标记；PET/T检查并结合免疫组织化学方法对直肠癌的远侧端黏膜p53及D34表达进展了研究.结果:直肠癌远侧端PET阳性段长度为412，平均为7.0；PET阳性段与阴性段p53与微血管密度有显著性的差异，PET阳性段p53与D34均为高表达；直肠远侧端PET阳性段长度与肿瘤的大孝病理类型以及肿瘤分期无关.结论:肿瘤的PET/T显像不但与肿瘤组织有关，而且还与肿瘤的癌旁组织有关，直肠癌远侧端PET/T显像将为直肠癌

2、的临床手术提供根据并对评估保肛手术具有一定的指导意义.【关键词】直肠肿瘤全直肠系膜切除术p53D34微血管密度体层摄影术免疫组织化学0引言外科手术仍是治疗直肠癌最有效的手段1，由于直肠癌是否存在远侧端浸润以及远侧端浸润的标准如何界定等问题仍有分歧，因此直肠癌平安远侧切缘一直存在争议.直肠癌的病理学检查是直肠癌诊断、分期及预后判断的金标准，然而，术前病理检查对肿瘤的生物学特性如肿瘤的远侧端浸润程度、肿瘤的淋巴结转移等的理解以及对手术方式评估意义却不大，相反影像学的检查更具有价值2.为了确定直肠癌远侧端壁内浸润状况及直观反响直肠癌的远侧端浸润情况，本试验将结合PET/T成像技术与分子生物学检测方法

3、，对直肠癌远侧端浸润的影像学及分子病理学进展研究，旨在为中低位直肠癌能否保肛提供更为准确的术前评估.1材料和方法1.2方法1.2.3标本制作及取材开腹按全直肠系膜切除术(ttalesretalexisin,TE)手术原那么4进展直肠癌TE保肛手术,切除标本解剖直肠系膜,观察肿瘤在肠壁及直肠系膜内的浸润情况.查出淋巴结送病理,于肿瘤的对侧纵行切开直肠管壁,轻轻牵拉标本两切端，使肿瘤下缘两标记线的间隔 与PET/T上检测的间隔 一致自然位置.用大头钉固定后，再次测量肿瘤大小及肿瘤下缘与标记线之间间隔 .肿瘤下缘组织以PET/T检查SUV为2.5处为界,取相等长度的宽为0.5两段组织,标记为PET阳

4、性段与PET阴性段.各组织分别进展p53及D34免疫组织化学染色.1.2.4病理及免疫组织化学检查D34,p53均为鼠抗人单克隆抗体，为aixin.Bi公司产品即用型，免疫组化试剂盒用aixin.Bi公司EliVisinTplus广普试剂盒.免疫组织化学染色方法采用PAP法进展染色，p53及D34表达的阴性对照染色均采用PBS代替第一层抗血清，其余步骤均一致.1.2.5微血管密度(irvesseldensity，VD检测5用D34标记微血管内皮细胞，呈棕黄色，在肿瘤组织中分布于肿瘤及间质组织中，在直肠癌旁组织中分布于黏膜的固有层内，微血管的形态不规那么，有的新生血管已呈管腔构造，有的只见内皮细

5、胞呈线状或点状分布.先在低倍视野内40，100找至肿瘤组织内微血管密度最高的区域，然后在高倍视野内200光镜，观察每张切片10个黏膜固有层区D34表达并计数，取其均植作为每例标本的VD值.血管内皮细胞被染成棕色，不管有无管腔，凡看至单个孤立内皮细胞或多个内皮细胞严密排列均计数为1个血管，分辨不清或染色模糊的细胞不计入计数结果.1.2.6p53检测6p53蛋白呈棕色颗粒状或团块状分布在黏膜上皮细胞核，200倍光镜观察每张切片10个黏膜固有层区p53阳性表达，半定量评分.免疫组化阳性半定量评分标准为：阳性产物显色强度：阴性0分，弱1分，中等2分，强3分；阳性产物分布范围：占黏膜固有层总面积25%1

6、分，26%50%2分，5175%3分，75%4分.显色强度和分布范围的评分相乘，所得分数为该例标本的阳性积分.统计学处理：应用SPSS13.0软件包进展统计分析，计量数据以xs表示.组间比拟用方差分析，PET阳性与阴性段比拟用配对t检验，P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1直肠肿瘤下缘PET阳性显像的位置直肠肿瘤下缘SUV值为2.5的位置距肿瘤下缘为412，平均(7.02.0)(图1.图1PET/T扫描可显示直肠癌远侧端的癌旁组织略2.2直肠癌远侧端PET阳性段与阴性段p53及D34的表达PET阳性段与阴性段p53与VD有统计学差异，即PET阳性段p53与D34均为高表达，而阴性段为低表

7、达表1.表1PET阳性段与阴性段p53表达及微血管密度比拟略bP0.01vs阴性段.2.3直肠肿瘤远侧端PET阳性长度与肿瘤生物学之间关系肿瘤的大小之间、不同的病理类型之间以及不同肿瘤分期之间，PET阳性段长度(SUV2.5)无统计学差异(P0.05).即直肠远侧端PET阳性长度与肿瘤的大孝病理类型以及肿瘤分期无关表2.表2直肠癌不同肿瘤生物学特性之间PET阳性长度的比拟略3讨论虽然腔内B超、T以及R在评价肿瘤的大孝浸润范围、以及淋巴结转移方面有各自的优势7，但PET及PET/T技术具有敏感性高的特点，目前主要应用于直肠癌的术前分期和术后的随访，而对术前肿瘤的分期方面那么明显高于T和RI，对于

8、直肠癌术后部分复发的诊断也优于T和传统的影像诊断8.然而，PET/T显像用于癌旁组织的显像，目前国内外尚未见到报道.研究说明，结直肠癌早期即存在高血管化和高的血流灌注量，部分缺氧既可以改变产生对葡萄糖的过度利用，也可以促肿瘤的微血管形成，因此VD的改变可反响出葡萄糖的利用9-10.由于直肠癌远侧组织存在VD的变化.因此PET显像很可能可以部分反响出微血管变化，本课题通过分析肿瘤的PET显像与直肠标记物间的关系，发现肿瘤显像的阳性段的远端平面超越肿瘤下缘的标记平面，因此我们推测PET显像的阳性范围除了与肿瘤组织有关外还可能与癌旁组织的显像有关.PET/T扫描显示的直肠腺癌远侧端的PET阳性平均长度为0.7，此长度与国外报道11直肠癌远切端切除长度为1的标准相仿.野生型p53基因突变型可通过抑制肿瘤促血管形成因子的表达，而起到抗肿瘤血管形成的作用，而突变型p53基因可能通过蛋白激酶促进VEGF的表达，同时其突变也加强了VEGF的转录，促进肿瘤血管生成12.VD被认为是反映肿瘤血管生成的金标准13.本文结合检测p53与D34表达可更准确地评估直肠癌远侧癌边黏膜的分子生物学的异常，结果显示：直肠腺癌的远侧端PET阳性段黏膜与PET阴性段黏膜分子病理学表达上存在显著性差异