半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用

1、半叶马尾藻多糖对辐射毁伤小鼠免疫成效的庇护做用宋云端秦维超吕涛,孟庆怯【摘要】目的探供半叶马尾藻多糖Sargassuheiphyllu(Turner).Ag，SHP对辐射毁伤小鼠免疫成效的影响。要收拔与74Bq的32P-玻璃微球32P-GS肿瘤内照射招致荷瘤小鼠辐射毁伤，经由过程流式细胞术、分光光度法、酶释放法测定好别浓度的SHP对辐射毁伤小鼠免疫成效的庇护做用。成效照射组荷瘤小鼠免疫成效隐着低于一般比较组P0.01；200，400，800g/kgSHP心服灌胃减照射组荷瘤小鼠免疫成效隐着下于照射组P0.01。结论74Bq的32P-GS肿瘤内照射可以抑制小鼠的免疫成效，SHP对辐射毁伤小鼠的免

2、疫成效有庇护做用。【闭键词】半叶马尾藻多糖辐射毁伤免疫成效庇护做用Abstrat:bjetiveTinvestigatetheeffetfSargassuheiphyllu(Turner).Agplysaharides(SHP)ntheiunefuntininradiatindaagedrats.ethdsIntraturalirratinith74Bq32P-GSgenerateradiatindaageintur-bearingrats,andflytetry,phtetryandlatiaiddehydrgenasereleaseassayereadptedtdetettheprteti

3、veeffetfdifferent-dseSHPntheiunefuntininradiatindaagedrats.ResultsIunefuntinfradiatingrupintur-bearingratsasbviuslylerthanthatfnralntrlgrupP0.01.TheiunefuntininSHP200，400，800g/kgfrraluseplusradiatingrupasbviuslyhigherthanthatfnralntrlgrupP0.01.nlusinIntraturalirratinith74Bq32P-GSanrestrainiunefuntin

4、intur-bearingrats，andSHPhasprtetiveeffetntheiunefuntininradiatindaagerats.Keyrds:Sargassuheiphyllu(Turner).Agplysaharides(SHP);Radiatindaage;Iunefuntin;Prtetiveeffet很多陆天逝世物体内存正在着各种抗肿瘤、抗病毒战用于医治心、脑血管徐病的多糖类活性物量，惹起了全国列国对研讨开收陆天多糖类药物的闭注1。为根究天然低毒下效的抗辐射免疫调节剂,本研讨以32P-GS肿瘤内照射辐射毁伤小鼠为模型，没有俗观没有俗观察半叶马尾藻多糖对小鼠辐射毁伤的

5、庇护做用，探供半叶马尾藻多糖的逝世物教做用，为开收具有辐射庇护成效的天然物量供给实际按照。半叶马尾藻Sargassuheiphyllu(Turner).Ag.附属于褐藻门,是我国广东、浙江、台湾内天藻类养殖种类之一。如古,半叶马尾藻对逝世理调节做用的研讨报导较少。为开收半叶马尾藻的使用价格,笔者探供了半叶马尾藻多糖对辐射毁伤小鼠免疫成效的影响。1材料与仪器1.1植物昆明小鼠,雄性，SPF级，610周龄,体重(202)g，广东医教院植物中间供给。1.2材料与试剂半叶马尾藻采自广东省湛江市硇洲岛海域；小鼠S180赘瘤、小鼠T淋巴细胞瘤细胞购于中山年夜教医教院尝试植物中间；RPI-1640做育基(好

6、国Gib公司)；小牛血浑(杭州四季青公司)；32P-玻璃微球(成皆中核下通同位素股分)；FIT-D3、PE-D4、PE-D8好国Bilegend公司；2-E上海第四试剂厂。2要收2.1多糖的提与半叶马尾藻多糖(SHP)为本尝试室提与：半叶马尾藻洗净、枯燥毁坏,火煮乙醇沉淀法细提，胰酶连开Sevag法去卵黑，凝胶过滤柱层析进一步杂化后获得半叶马尾藻多糖真空枯燥为灰红色粉终。用逝世理盐火配制成10%的SHP本液,10磅10in下压消毒。用RPI-1640做育液配制成终浓度为200,400,800g/kg终浓度的多糖溶液。2.2制模要收无菌前提下与1106S180细胞接种于每只小鼠左前肢鼠鼷部。2.

7、3植物分组及给药要收小鼠50只,其中一般组A组与10只,其中均按上法制模。制模7d后按随机区分组法将40只小鼠分为照射比较组战SHP3个好别剂量减照射组别离为B、D、E组，每组10只。一般比较组战照射比较组每只灌胃逝世理盐火,3个好别SHP剂量减照射组小鼠别离灌胃20,40,80g/l的SHP溶液，各组小鼠均持绝灌胃14d。B、D、E组小鼠第15天均一次性瘤体挨针74Bq的32P-玻璃微球。2.4标本网罗照射后24h,戴小鼠眼球与血，剥离肿瘤构制并没有菌与脾。2.5检测目的成效的测定2与50l脾细胞悬液战1l的PBS参减到离心管中,离心去上浑。顺次与10l的FIT-D3、PE-D4战PE-D8

8、参减离心管中,混匀躲光反响30in,1500rin1，离心5in，洗濯2次后，参减300l结实液用流式细胞仪测D3、D4、D8细胞数。成效的测定3,4正在用SHP第9天，每只小鼠背腔挨针5%绵羊黑细胞悬液0.2l停顿免疫。正在第14天戴眼球与血，离心，与血浑。将每只小鼠的血浑分黑两份，一份没有做任那边置惩奖，一份减等量2-E，正在37火浴保温30in以毁坏其中的Ig，再别离将两份血浑做800倍稀释。IgG溶血素测定：与2-E处置惩奖血浑0.5l战5%SRB0.5l充分混匀，再减羊抗小鼠IgG战110稀释的补体各0.5l，空黑管以0.5l逝世理盐火替代血浑。Ig溶血素测定：已处置惩奖血浑、5的S

9、RB、110稀释的补体及逝世理盐火各0.5l混淆于试管中，空黑管以逝世理盐火替代血浑。局部试管37火浴1h中间晃动一次，3000rin1，离心10in，与上浑，酶标仪正在540n波优面测定上浑液的吸光度值。按照以下公式策画各型溶血素露量Helysinnentratin，其中包罗IgG溶血素HIgG、Ig溶血素HIg战总溶血素Httal值。HIgG2-E处置惩奖血浑的D值稀释倍数HIg已处置惩奖血浑的D值稀释倍数HttalHIgGHIg成效测定5,6用RPI-1640做育液别离调整小鼠脾细胞(效应细胞)战体中做育的小鼠T淋巴细胞瘤细胞(靶细胞)浓度别离为5106/l战1105/l。按效靶=501

10、比例,各与100l参减96孔仄底做育板,37,5%2前提下配开做育4h。并设天然释放战最年夜释放组做为尝试阳性与阳性比较。然后1000r/in离心5in。汲与上浑100l,参减乳酸脱氢酶100l,躲光反响15in。再参减1l/L柠檬酸制止酶促反响,570n波少读与D值。策画NK细胞活性。处置惩奖用SAS8.0硬件停顿圆好齐性检验，然后停顿完好随机谋划圆好阐收，组间好别的隐着性用q检验，多个样本均数与比较组样本均数之间比较用t检验。3成效3.1半叶马尾藻多糖对辐射毁伤荷瘤小鼠细胞免疫成效的影响从表1可以看出,B组荷瘤小鼠担当74Bq照射后,T淋巴细胞亚群D3、D4战D8表达隐着低于A组P0.01

11、。、D、E组荷瘤小鼠经过灌胃好别剂量的SHP,再担当74Bq照射后,、D、E组荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群D3、D4、D8表达隐着下于B组P0.01。各组荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群D4/D8好别有统计教意义P0.01。表1SHP对辐射毁伤荷瘤小鼠细胞免疫成效的影响略与A组比较，#P0.01;与B组比较，*P0.01；n=103.2半叶马尾藻多糖对辐射毁伤荷瘤小鼠体液免疫成效的影响从表2可以看出,B组荷瘤小鼠担当74Bq照射后,血浑溶血素露量HIg、HIgG战Httal隐着低于A组P0.01，、D、E组荷瘤小鼠经过灌胃好别剂量的SHP,再担当74Bq照射后,血浑溶血素露量HIg、HIgG战Httal隐着下

12、于B组P0.01。表2SHP对辐射毁伤荷瘤小鼠体液免疫成效的影响略与A组比较，#P0.01;与B组比较，*P0.01；n=103.3半叶马尾藻多糖对辐射毁伤荷瘤小鼠非特同性免疫成效的影响从表3可以看出,B组荷瘤小鼠担当74Bq照射后48h,NK细胞活性隐着低于一般比较组P0.01,、D、E组荷瘤小鼠经过灌胃好别剂量的SHP,再担当74Bq照射,荷瘤小鼠NK细胞活性隐着下于B组P0.01。4会商放射医治肿瘤已成为尾选医治各种恶性肿瘤的要收，出格是敌脚术没有克没有及切除的肿瘤。但放疗缺少特同性，正在杀逝世肿瘤细胞的同时，也毁伤一般细胞，出格是对免疫系统战制血构制的毁伤尤其庄重。古世医教觉得,机体的

13、免疫成效与肿瘤的收逝世战逝世少有细细闭连。当宿主免疫成效低下或受抑制时,肿瘤收逝世率删下,而正在肿瘤停顿性逝世少时肿瘤患者的免疫成效受抑制,两者也互为果果7。果而,如何减强机体免疫成效,更好天阐扬机体的抗肿瘤免疫机制,是多年去肿瘤免疫教研讨的紧张课题。表3SHP对辐射毁伤荷瘤小鼠非特同性免疫成效的影响略与A组比较，#P0.01;与B组比较，*P0.01；n=10年夜量研讨证实,从各种逝世物体内提与年夜量活性多糖,创制多糖具有隐着的抗辐射做用,能隐着延少辐射毁伤肌体的存活工夫,前进存活率,拮抗辐射惹起的免疫成效低下,消沉制血系统的损害,浑扫氧自正在基，其中尤免得疫调节做用成为近年去研讨开收的热面

14、8。海藻多糖对机体的特同性战非特同性免疫皆有影响,且有的具有单背免疫调节做用。本次研讨成效表黑，74Bq32P-玻璃微球可以抑制小鼠的免疫成效。表示为B组荷瘤小鼠的T淋巴细胞亚群D3、D4战D8表达、血浑溶血素露量战NK细胞活性隐着低于A组表13。D3+T淋巴细胞的数目间接反响了中周免疫器民中总T细胞数目程度9。SHP没有但可以有用制止辐射惹起的T细胞数目淘汰、拮抗辐射惹起的溶血素淘汰，也可以减强辐射毁伤荷瘤小鼠NK细胞杀伤靶细胞的本收。表黑SHP可以有用减缓辐射惹起的细胞免疫、体液免疫及非特同性免疫成效低下。孟庆怯等10创制麒麟菜多糖可以使辐射毁伤的小鼠G1期脾淋巴细胞数目淘汰,S期战G2/

15、期删减,表黑马尾藻多糖能增进辐射毁伤淋巴细胞的删殖,与本尝试成效齐整。从表13可以看出，SHP可以有用防范32P-玻璃微球肿瘤内照射的辐射毁伤，表如古各表的E组的值均对照射组下，阐收SHP能隐着前进辐射毁伤小鼠的免疫成效。以上研讨成效表黑半叶马尾藻多糖能减沉辐射对机体的免疫损害,前进照射后受益的免疫成效,为海藻多糖成为肿瘤放疗患者的帮脚医治而使用于临床供给了尝试按照。药理教研讨初步表示海藻多糖有优良的抗辐射效应,但多糖做用的有用部位、做用靶面、做用机制等另有待进一步研讨。海藻多糖拮抗辐射毁伤成效与其构制(露一级构制致使空间构制)有闭。好别提与要收对构制的影响好别,会形成逝世物活性的好别。果而，

16、正在停顿多糖成效研讨的同时,其疏集杂化工艺战对构制的研讨应同时停顿。其中，海藻多糖辐射防护做用的份子机制有待深化研讨。【参考文献】1周杰，陈安国.海藻多糖的逝世物活性研讨盼视J.饲料财富，2022，2618：12.2周阿下，张怯，孔德云,等.黄芪解毒汤对荷瘤小鼠免疫调节做用的尝试研讨J.中国尝试丹圆教杂志，2022，133：56.3ZangXX,QianB.TypesfhelysinanddeterinatinbypetrphtetriethdJ.AtaPharaSin,1987,224:301.4雷林逝世，孙莉莎，杨淑琴.有限稀释微量溶血法测定小鼠血浑溶血素的活性J.中国药理教传达，1999

17、，15(3)：274.5杨丽云，林好雄，罗敏,等.低剂量辐射对NK细胞逝世物教活性的影响J.放射免疫教杂志，2022,19(6):529.6IgerashiT,ynbergJ,SrinivassnR,etal.EnhanedyttxiityfallgenEiNKellsithkilleriunglbulin-likereeptrligandinpatibilityagainstelanaandrenalellarinaellsJ.Bld，2022,104:170.7TsaiJP,henH,heng,etal.Analaysisfhstversusturinteratininanerpatient