土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖

1、课题2土壤中分解尿素细菌分离和计数课题2 微生物培养与应用土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第1页一、课题背景1、尿素利用尿素是一个主要农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素原因土壤中细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+ CO2NH3+H2O土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第2页3、常见分解尿素微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，一些真菌和放线菌也能分解尿素。4、课题目从土壤中分离出能够分解尿素细菌统计每克土壤样品中终究含有多少这么细菌一.研究思绪.筛选菌株.

2、统计菌落数目.设置对照土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第3页 1、实例：启示：寻找目标菌种时要依据它对生存环境要求，到对应环境中去寻找。原因：因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。DNA多聚酶链式反应是一个在体外将少许DNA大量复制技术，此项技术要求使用耐高温（930C）DNA聚合酶。.筛选菌株土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第4页要分离一个微生物，必须依据该微生物特点，包含营养、生理、生长条件等；配置适当培养基方法：抑制大多数微生物生长造成有利于该菌生长环境，结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再经过稀释涂布平板法等方法对它进行纯

3、化培养分离。2、试验室中微生物筛选原理：人为提供有利于目标菌株生长条件(包含营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其它微生物生长。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第5页15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素细菌分离与计数所需培养基：从物理性质看此培养基属于哪类？从功效上属于哪类培养基？固体培养基在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素选择培养基土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第6页培养基氮源为尿素，只有能合成脲酶微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶微

4、生物因为不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素微生物。4、培养基选择分解尿素微生物原理选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长培养基。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第7页1、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物数量。.统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌计数；需要相对高细菌浓度；个体小细菌在显微镜下难以观察；缺点土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第8页2.间接计数法（活菌计数法）（1）惯用方法：每克样品中菌落数(CV)M其中，C

5、代表某一稀释度下平板上生长平均菌落数，V代表涂布平板时所用稀释液体积(ml)，M代表稀释倍数。 当样品稀释度足够高时，培养基表 面生长一个菌落，起源于样品稀释 液中一个活菌，经过统计平板上 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。（2）原理：稀释涂布平板法。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第9页注意事项为了确保结果准确，普通选择菌落数在30300平板上进行计数。为使结果靠近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。统计菌落往往比活菌实际数目低。涂布平板法所选择稀释度很主要，普通以三个稀释度中第二个稀释度所出现平均菌落数在50个左右为最好。土壤

6、中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第10页设置对照主要目标是排除试验组中非测试原因对试验结果影响，提升试验结果可信度。.设置对照：设置对照方法：空白对照：不给对照组任何处理原因。条件对照：给对照组施以部分试验原因，但不是所要研究 处理原因。本身对照：对照组和试验组都在同一研究对象上进行。相互对照：不单设对照组，而是几个试验组相互对照。A同学结果与其它同学不一样，可能解释有两种。一是因为土样不一样；二是因为培养基污染或操作失误。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第11页小结：经过这个事例能够看出，试验结果要有说服力，对照设置是必不可少。方案一：由其它同学用与A同学相同土样进行

7、试验 方案二：将A同学配制培养基在不加土样情况下进行培养，作为空白对照，以证实培养基是否受到污染。结果预测：假如结果与A同学一致，则证实A无误；假如结果不一样，则证实A同学存在操作失误或培养基配制有问题。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第12页二.试验详细操作 .土壤取样 从肥沃、湿润土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好信封中。取土样用小铁铲和盛土样信封在使用前都要灭菌。.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源选择培养基。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第13页应在火焰旁称取土壤10g。在稀释土壤溶液过程中，每一步都要在火焰旁进行分离不一样微生

8、物采取不一样稀释度原因：不一样微生物在土壤中含量不一样目标：确保取得菌落数在30300之间、适于计数平板三样品稀释土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第14页为何分离不一样微生物要采取不一样稀释度？测定土壤中细菌总量和测定土壤中能分解尿素细菌数量，选取稀释范围相同吗？原因：土壤中各类微生物数量（单位：株/kg）是不一样。比如在干旱土壤中上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。结论：为取得不一样类型微生物，就需要按不一样稀释度进行分离，同时还应该有针对性地提供选择培养条件。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第15页.取样

9、涂布试验时要对培养皿作好标识。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。假如得到了2个或2个以上菌落数目在30300平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落计数，假如同一稀释倍数三个重复菌落数相差较大，表明试验不准确，需要重新试验。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第16页.微生物培养与观察在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时统计作为结果，以预防因培养时间不足而造成遗漏菌落数目。 培养不一样微生物往往需要不一样培养温度。细菌：3037培养12d放线菌：2528培养57d霉菌：2528温度下培养34d。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第17

10、页微生物培养与观察土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第18页三.结果分析与评价1.经过对照试验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其它氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素微生物。2.提醒：选择每个平板上长有30300个菌落稀释倍计算每克样品菌数最适当。同一稀释倍数三个重复菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不准确。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第19页四、操作提醒 无菌操作 做好标识 规划时间 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第20页五.课外延伸 在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，假如PH升高，指示

11、剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。测定饮水中大肠杆菌数量方法是将一定体积水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落展现黑色，经过记述得出水样中大肠杆菌数量。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第21页大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上经典特征 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第22页本课题知识小结:土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第23页六、例题解析 例1对细菌群体生长规律测定正确表述是A在液体培养基上进行 B最少接种一个细菌 C接种一个细菌 D及时补充消耗营养物质 解析：细菌群体生长规律测

12、定是人们在一定条件下进行。这些条件是：一种细菌、恒定容积培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌生长规律。测定时只能用一个细菌子细胞群体改变规律表示微生物生长；恒定容积是给微生物提供一定生存环境；液体培养基才能经过样品推测细菌总数。若接种各种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一个微生物生长规律。在接种时，要确保一定接种量。答案：A土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第24页例2在微生物群体生长规律测定中，种内斗争最显著最激烈时期是A调整期 B对数期 C稳定时 D衰亡期解析：种内斗争是一个生态原因。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源争夺。在生活空间充裕，

13、营养充分时候，种内斗争程度是比较低。伴随微生物个体数目标增加，每个个体生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定时种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物数目已经开始降低，pH已经极度不适于微生物生存，次级代谢产物积累到很高程度，这时微生物生存斗争主要是与无机环境斗争。答案：C土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第25页1.对细菌群体生长规律测定正确表述是（ ） A.在液体培养基上进行 B.最少接种一个细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗营养物质 2.使用选择培养基目标是（ ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使

14、需要微生物大量繁殖 D.表现某微生物特定性状与其它微生物加以区分3.能合成脲酶微生物所需要碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素实践训练A CD土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第26页4.以下说法不正确是（ ） A.科学家从7080度热泉中分离到耐高温TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度5个平板菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数预计值 C.设置对照试验主要目标是排除试验组中非测试原因对试验结果影响，提升试验结果可信度 D.同其它生物环境相比，土壤中微生物数量最大，种类最多。5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（） A.较多氮源物质 B.较多碳源物质 C.青霉素类药品 D.高浓度食盐BC土壤中分解尿素的细菌的分离和计数市公开课一等奖第27页例3（江苏）抗生素作为治疗细菌感染药品，其高效性和巨大经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素发觉和应用含