流式细胞术鉴定超微量免疫细胞样本

1、使用CD115来鉴定和分析小鼠血中单核细胞12月2日1血中的单核细胞白血球细胞 (leucocyte)：粒细胞和非粒细胞粒细胞（多形核白细胞）: 中性粒细胞，嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞 非粒细胞 （单核白细胞）：淋巴细胞，单核细胞和巨噬细胞背景介绍GKoenderman L et al. J Leukoc Biol 2000;68:58-642背景介绍纵向小鼠模型（非致死）: 重要性：可用于预测疾病风险的增加，纵向评估病情的进展 需求：观察小鼠模型个体在外界刺激或者药物反应中的长期变化 困难：每次可采集的小鼠血液样本体积非常小小鼠单核细胞标记(占血液中细胞总数3%)CD11b: 表达在多种细胞

2、表面 （髓样细胞，NK细胞， 活化的T细胞，B细胞 ）CD14: 表面表达量低或检测不到常用3-由此,需要建立有效的实验方案建立小鼠纵向模型，需要一种流式细胞仪， 可检测超微量血液样品 同时又需保证重复性，数据准确更加可行的单核细胞标记，用于FACS:CD115- 细胞表面标记本身具有稳定性, 在检测微量血液样品体积时，测试结果具有一致性提出的问题及实验的设计VS4小鼠血样的采集 CD-1 雄性小鼠,大隐静脉取血（每次采样0.5%体重，非致死方式）材料与方法实验 1: 比较常用的小鼠单核细胞表面标记 (Guava easyCyte Mini)实验 2: 鉴定不同单核细胞表面标记的稳定性A: 维

3、持的时间长度B: 不同的激光强度(Guava EasyCyte Mini20mW; Guava easyCyte 6HT-2L40mW)C: 不同的抗凝剂实验 3: 确定可用于检测的最小血样体积(40ul、20ul、10ul、5ul)5结果 1比较小鼠单核细胞的表面标记 （CD115 vs CD11b，CD14）95% CD115阳性细胞: 共表达CD11b+85% CD115阳性细胞: 共表达CD14+ 如以CD115选取细胞群CD11b及CD14阳性率 差异小650% CD11b阳性细胞:共表达 CD11570% CD14阳性细胞: 共表达 CD115如以CD14与CD11b选取细胞群CD

4、115阳性率 差异大结果 1比较小鼠单核细胞的表面标记 （CD11b，CD14 vs CD115）795% CD115+: CD11b+85% CD115+: CD14使用CD115+ 设门选取细胞群观察 CD11b与CD14CD115所选取的细胞群亦表现在CD11b及CD14阳性区域结果 1比较小鼠单核细胞的表面标记 （CD115 与 CD11b，CD14）8鉴定单核细胞表面标记CD115的稳定性-A:维持的时间长度 0hr 2hr 4hrCD115:33% 降低CD11b:6.5% 降低结果 29easyCyte Mini: 20mWeasyCyte 6HT-2L:40mW更强的激光强度，

5、更高的 gMFI但信号的降低程度一致 (33%)结果 2鉴定单核细胞表面标记CD115的稳定性-B:不同的激光强度10EDTA 4-8度（RT）更加稳定结果 2鉴定单核细胞表面标记CD115的稳定性-B:不同的抗凝剂11确定可用于检测的最小血样体积单核细胞总量: CD115+经典单核细胞: CD115+ Gr-1high 非经典单核细胞: CD115+ Gr-1low800060003500200040,20,10ul:差异性 10% 5ul:每次取样，单核细胞分亚型检测时差异大因此,10ul 不推荐！用于分析单核细胞的亚型结果 312结论细胞表面标记：选择CD115抗体鉴定本身虽具有不稳定性，但相比传统的表面标记选取单核细胞群更加准确(时间控制, EDTA+冰上, 强的激光强度) 实验对象：小鼠纵向（非致死）模型确保了非致死取血的可能性据此建立小鼠模型可检测个体变化(=0.5% 的小鼠体重：可两周取一次, =0.05% 的小鼠体重：每天取) 检测平台：高性能超