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文档简介

1、生长抑素类似物奥曲肽对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响黄子健陈颖梅雪婷何丽娟喻玫【摘要】目的研究生长抑素类似物奥曲肽对卵巢癌细胞SK-V-3增殖和凋亡的作用。方法将奥曲肽浓度分别为1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1作用于卵巢癌细胞,用TT法检测细胞活性,同时通过碘化丙啶PI染色,采用流式细胞仪检测细胞凋亡比率。结果奥曲肽对SK-V-3细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点,并能诱导SK-V-3细胞凋亡。结论奥曲肽对SK-V-3细胞增殖具有重要调控作用,生长抑素类似物可促进卵巢癌细胞凋亡。【关键词】生长抑素类似物卵巢癌细胞奥曲肽细胞凋亡【Abstrat】Abjetive:Te

2、xplretheeffetfsatstatintretidenprliferatinandapptsisfvariananerell.ethds:SK-V-3ellseretreatedithtretide1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1respetively.TheeffetsftretidenprlifieratinfSK-V-3ellsereassessedbyTTassay.ellapptsisalsasdetetedbyflytetry.Results:tretideinhibitedtheprliferatinfSK-V-3ellsindse-depe

3、ndentanners,andinduedellapptsis.nlusins:SatstatinreeptrplaysaniprtantrleinregulatingprliferatinfSK-V-3ells,andsatstatinanindueellapptsis.【Keyrds】SatstatinanalguevariananerelltretideApptsis化疗已成为治疗卵巢癌的主要方法,目前国内、外所使用的药物包括铂类、紫杉醇和其他二线化疗药物,尽管这些药物对治疗有一定的疗效,但紫杉醇价格极其昂贵,其他药物很容易耐药,因此寻找效果好、副作用小的化疗药物变得非常重要。奥曲肽是一

4、种生长抑素类似物,近年来有研究人员将其用于消化道类癌症的治疗,对初发、复发病例均有一定疗效。本研究以卵巢癌细胞株SK-V-3为研究对象,观察奥曲肽对卵巢癌细胞生长的抑制作用并对其相关机制进展讨论,为临床应用提供实验参考。1材料与方法1.1试剂善宁醋酸奥曲肽注射液,0.1g/1l/支,进口药品注册证号:H20220555,诺华制药消费,批号:50076;四甲基偶氮唑盐TT,购自siga公司;碘化丙啶PI,购自上海华舜生物工程。1.2细胞株及培养人卵巢癌细胞株SK-V-3购自中国科学院肿瘤研究所。于37、5%2饱和湿度培养,培养基为含10%胎牛血清HylneLabratrEisIn.提供,优等,批

5、号:A15818的DEInvitrgen.提供,批号:1290007,0.25%胰蛋白酶上海华美生物公司消化传代。1.3TT法检测细胞活性将浓度为5104个/l卵巢癌细胞SK-V-3,接种于96孔平底培养板中,每孔100l,培养24h后,再分别设空白对照组和不同浓度药物组1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1,每组设3个复孔。置37,体积分数为52培养24h,于完毕前4小时参加TT20l/孔,4h后弃上清液,参加二甲基亚砜DS100l/孔,振荡10in左右,置酶标仪测定D值,波长为450n。按以下公式计算细胞抑制率,评价药物对卵巢癌细胞增殖的抑制作用。细胞抑制率%=正常

6、对照组平均D值-实验组平均D值/正常对照组平均D值100%1.4PI染色法检测细胞凋亡搜集经1.563、3.125、6.25、12.5、25、50gL-1奥曲肽处理24h的SK-V-3细胞,经0.25%胰蛋白酶消化5in,1500rp离心3in,搜集细胞于1.5lEP管中,用PBS洗3次后3500rp离心5in;再用200lPBS重悬细胞,边涡漩振荡边滴加70%预冷4乙醇,共加1l,振荡均匀后于4过夜。3500rp离心5in,弃固定液。每个样品用500lPBS重悬细胞,3500rp离心5in,洗涤2次。弃上清液,用200lPBS重悬细胞,吹打均匀,每个样品加800lPI染液,4染色30in。最

7、后,用400目尼龙网将细胞悬液过滤至流式细胞管中,上机检测,用ELLQUEST软件分析实验结果。1.5统计学分析实验数据以xs表示,结果经irrsftExel2000进展统计学处理,并进展TTEST分析,t值法比拟组间差异的显著性。2结果2.1奥曲肽对SK-V-3细胞增殖的抑制效应TT实验结果显示,奥曲肽对SK-V-3细胞增殖的抑制作用具有剂量相关的特点,当奥曲肽浓度12.5gL-1时,对SK-V-3细胞增殖的抑制效应明显。2.2奥曲肽对SK-V-3细胞形态投射电镜观察结果镜下可见SK-V-3细胞的核更大,细胞呈现椭圆形,核仁多个且明晰,核内染色质均匀,线粒体多呈现长条形,内峭排列规那么明晰。

8、奥曲肽50g/L处理24h后,可见大量有膜空泡,核内容物变淡,但胞膜及核膜完好;奥曲肽25g/L处理细胞24h后,溶酶体增多,细胞肿胀,线粒体溶解,胞质内出现大量有膜空泡,核基质密度下降。2.3奥曲肽诱导SK-V-3细胞凋亡流式细胞术检测结果流式细胞术结果显示,以1.563、3.125、6.25、12.5、25、50g?L-1奥曲肽处理SK-V-3细胞24h后,各组凋亡细胞所占比例显著高于对照组,说明奥曲肽可诱导SK-V-3细胞凋亡。而且奥曲肽促进SK-V-3细胞凋亡作用明显具有剂量相关的特点,随剂量的升高,各组凋亡细胞所占比例也逐渐升高,与TT结果相一致。3讨论生长抑素satstatin,S

9、ST是一种环状多肽类激素,具有强大的生物学活性,在多种内分泌和外分泌激素分泌过程中发挥重要作用。其生物学活性是通过靶细胞膜上的生长抑素受体satstatinreeptr,SSTR介导的,其中以其亚型2SSTR2的作用最为重要1,2。目前已经发如今多种肿瘤细胞中有SSTR2的表达3,体内外研究均发现生长抑素类似物satstatinanalgue,SSA可通过SSTR抑制肿瘤细胞增殖,并发生细胞凋亡。本实验通过TT法检测了生长抑素类似物奥曲肽对人卵巢癌细胞SK-V-3的增殖抑制率,结果发现奥曲肽对人卵巢癌细胞的增殖具有抑制作用,并且抑制率具有明显的浓度依赖性。同时,流式细胞仪检测结果显示奥曲肽对S

10、K-V-3细胞有诱导凋亡的作用,经相关分析显示药物浓度与凋亡比率呈正相关。奥曲肽对SSTR2具有很强的亲和力,已被用作垂体腺瘤、肝癌等癌症的治疗药物,并且获得显著疗效,临床观察肿瘤明显缩小,其作用机理可能与其通过SSTR诱导的肿瘤细胞凋亡有关。这与本次实验结果一致,通过本研究的初步观察,提示生长抑素类似物通过促进卵巢癌细胞凋亡而对人卵巢癌细胞的增殖产生抑制作用。进一步研究生长抑素类似物对卵巢癌增殖与凋亡的调控作用及机制,可为治疗卵巢癌提供新的途径与思路。参考文献1BrazeauP,Vale,BurgusR,etal.Hypthalaiplypeptidethatinhibitstheseretinfiunreativepituitarygrthhrne.Siene,1973,179:77-79.2andarinL,StennerD,Blanhard,etal.Seletiveeffetsfsatstatin-14,-25and-28ninvitrinsulinandgluagnseretin.Nature,1981,291:76-77.3REisineT,BellGI.leularbilgyfsatstatinreeptrs.EndrRev,1995,16:427-442.4ReubiJ,LandltA.Highdensityfsatstatinreeptrsinpitu

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