兔瘟组织灭活苗的制作详解演示文稿

1、兔瘟组织灭活苗的制作详解演示文稿第一页，共二十三页。优选兔瘟组织灭活苗的制作第二页，共二十三页。 微生物(Microorganism) 形体微小、结构简单，须借助于光学显微镜或电子显微镜进行观察。 病毒(包括噬菌体)； 细菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、螺旋体等； 真菌：包括酵母菌（单细胞）、霉菌（多细胞）； 单细胞的藻类以及原生动物等。非细胞型微生物单细胞原核微生物真核微生物第三页，共二十三页。 细菌(bacteria)的细胞形态 1、球菌 单独存在时为圆球形，几个细菌联在一起时其接触面稍为扁平。按其分裂方向和分裂后排列状态，可以分为：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄

2、球菌。2、杆菌 细胞呈杆状或圆柱状，各种杆菌的长度与直径比例差异很大，有的粗短，有的细长，短杆菌近似球状，长杆菌近似丝状。一般来说，同一种杆菌其粗细比较稳定，而长度则经常因培养时间、培养条件不同而有较大变化。有的杆菌很直，有的稍弯，有的两端截平如炭疽芽孢杆菌，有的略尖，有的半圆。 第四页，共二十三页。 （三）革兰氏染色 革兰氏染色法于1884年由丹麦医生Gram创立，是延用至今的经典染色法。 经革兰氏染色后可以把全部细菌分为G+和G-两大类。 染色机制：与细菌细胞壁的结构和组成有很大关系。 G+细菌：肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而

3、不被脱色，复染后不着色，保持结晶紫的颜色； G-细菌：肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成红色。 第五页，共二十三页。细胞壁革兰氏阳性菌 (G+)革兰氏阴性菌 (G-)厚度与强度厚、致密、坚韧薄、疏松肽聚糖数量、含量多层、含量高、占细胞干重4090%单层、含量低、占细胞干重510%脂类含量少、占细胞干重1-4%多、占细胞干重11-22%磷壁酸（垣酸）+-脂多糖、磷脂、脂蛋白-+肽聚糖脂蛋白磷壁酸外膜第六页，共二十三页。染色操作步骤涂片固定滴生理

4、盐水挑取菌苔一环涂片热固定干燥取菌液一环涂片干燥第七页，共二十三页。革兰氏染色法1. 涂片、干燥及固定2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒，后立即用流水冲洗。5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果图。第八页，共二十三页。细水冲洗结晶紫初染2min碘液媒染1min95%酒精脱色 20s蕃红复染 12min细水冲洗细水冲洗第九页，共二十三页。 革兰氏染色成败关键： 酒精脱色

5、，脱色不够将G-转变为G+，脱色过度将G+变成G-； 涂片要均匀、薄； 菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。第十页，共二十三页。油镜操作规程1. 先用低倍镜和高倍镜观察涂片，待看到目的物后，将其移到视野中央。2. 在涂片上滴一滴香柏油，转动换转器使油镜针对通光孔。3. 使油镜与香柏油接触，这时油镜头几乎与载玻片相接触，切记不能使用粗调，以免压碎载玻片。4. 用细调旋钮慢慢提升镜头高度，直至物像清晰。切勿拧反方向。5. 观察完毕后，使镜筒远离载物台。取下载玻片。用擦镜纸擦去镜头上的香柏油：先用干

6、的擦镜纸擦12次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后再用干擦镜纸擦1次。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细心，动作要轻 。 第十一页，共二十三页。五、结果： 绘模式种、自选种镜检油镜视野图（比例、形状准确，注放大倍数，染色特性）G+ (金黄色葡萄球菌)G-（枯草芽孢杆菌）G-（大肠杆菌）第十二页，共二十三页。Gram Stain of Staphylococcus aureusGram Stain of Escherichia coliA Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative B

7、acteria.第十三页，共二十三页。 兔病毒性出血症的诊断及其组织灭活苗的制造王海荣第十四页，共二十三页。 兔的病毒性出血症（rabbit viral hemorrhagic diseaze）是兔的一种急性败血性传染病，RHDV抗原性强，组织灭活苗效果极佳，安全可靠，目前广泛使用的是肝组织甲醛灭活苗，联苗兔瘟、巴氏杆菌二联苗也已使用。第十五页，共二十三页。 组织灭活苗可分加佐剂和不加佐剂两种。含佐剂苗所产生的抗体水平较高于无佐剂苗，但产生免疫力的时间迟于无佐剂苗，而且生产程序较为复杂，成本也高。 当发生免瘟时，作为紧急接种，选用无佐剂苗更为理想，因产生免疫力较快，可提早控制疫情，即使平时预防

8、接种，无佐剂苗也极为有效。第十六页，共二十三页。一 材料 （1）种毒 强毒株组织毒1:10悬液感染成兔肌注1ml，4872小时引起发病死亡。（2）制苗动物 3月龄以上未感染本病和未接种本病疫苗的健康免。 组织捣碎机等第十七页，共二十三页。二、操作方法1、攻毒取种毒2-5g制成1:10组织悬液，每毫升各加青链霉素1000IU单位,在4处理46小时，取上清液皮下或肌肉注射兔子，1ml/只，实验免接毒后的观察。第十八页，共二十三页。（1）抗生素可先配制成高浓度的原液， -20保存。（2）抗生素的最高使用浓度。 青霉素钾1万单位/ml 链霉毒钾：20mg/ml即 1mg=1000Iu 2万Iu/ml。

9、 抗生素的配置： 1先配浓溶液20万/ml，25万/ml第十九页，共二十三页。2、RHD的临床诊断及实验室诊断临床上，RHD以神经症状为主，在免疫压力可表现出非典型变化。剖检以呼吸系统的严重出血和内脏实质器官的淤血肿大为特征。人工感染后的发病高峰时间 接种后3672小时。第二十页，共二十三页。RHDV可凝集人的O型红细胞，温度对血凝无显著影响，PH4.4-7.2时血凝稳定，血凝具有特异性，能被高免血清所抑制。 第二十一页，共二十三页。 10%肝悬液4000rpm，10-15分钟离心后取上清，1%人O型红细胞做HA，放置20-30分钟出结果，血凝现象的观察时间不超过45分钟。 HA1160即为阳性 阳性病料无论是自然死亡还是人工感染致死，其血凝价一般不低于25。 健康兔只有2