还原型谷胱甘肽对大鼠呼吸机相关性肺损伤的保护作用

1、复本型谷胱苦肽对年夜鼠吸吸机相闭性肺毁伤的保护做用【摘要】目的研讨复本型谷胱苦肽(GSH)对年夜鼠吸吸机相闭性肺毁伤(VILI)的保护做用。要收24只安康雄性SD年夜鼠随机分为3组(每组n=8),A组为自立吸吸组;B组为年夜潮气量机械通气组;组为年夜潮气量机械通气减GSH处理组。B、2组吸吸参数：潮气量(VT)=30l/kg、频次(P)为40次/in、通气工夫为4h。每小时止1次动脉血气阐收,策画氧开指数(Pa2/Fi2)。真止终了搜集肺机闭战肺灌洗液标本。光镜没有俗观察肺机闭病理形状改动,免疫组化检测Fas/FasL卵黑,检测肺干/干重比(/D)、肺机闭丙两醛(DA)、超氧化物歧化酶(SD)

2、、肺灌洗液中黑细胞计数、肿瘤坏逝世果子(TNF-)战卵黑总量。结果战A组比拟，B组肺机闭病理教改动隐着,Fas/FasL卵黑删减,/D、黑细胞计数(B)、TNF-、DA等目的降低，而SD及通气3h当前Pa2/Fi2降降;战B组比拟,组肺机闭病理教改动隐着减沉,Fas/FasL卵黑量量裁减,/D、B、TNF-、DA等目的降低，SD、Pa2/Fi2上降。结论GSH对VILI有一定的保护做用。【闭键词】吸吸机相闭性肺毁伤;机械通气;复本型谷胱苦肽Abstrat：bjetiveTinvestigatetheprtetiveeffetsfreduedglutathinenventilatr-indued

3、lunginjury(VILI)inrats.ethds24aleSprague-Daleyratsererandlydividedint3grups(n=8eah):grupAreEivedrairithutehanialventilatin;grupBreEIvedehanialventilatinflargetidalvlue(VT)ithrair;grupastreatedithehanialventilatinflargetidalvlueithrairplusreduedglutathine.ThesetparaetersfehanialventilatiningrupsBand:

4、VT=30l/kg,breathingrate=40ties/in,andtiefventilatin=4h.Arterialbldgasesereeasuredhurlytalulatexygenatinindex(Pa2/Fi2).Ratseresarifiedandthelunglavageliquidandlungtissueerelletedandstredithrretethds.Theeasuredindexesinludingttalprtein,BsandTNF-inbrnhalvelarlavagefluid(BALF),et-t-dryeightrati(/D)flung

5、,alndialdehyde(DA)andsuperxidedisutase(SD)levelsinthelungereassayed,respetively.LungpathlgialhangesandtheexpressinsfFas/FasLprteinserebservedbyirspy.ResultsparedithgrupA,ttalprtein,/D,Bs,TNF-,DAandtheexpressinfFas/FasLprteinssignifiantlyinreasedingrupB,hilethelevelsfSD,andPa2/Fi2at3hafterventilatins

6、ignifiantlydereased.paredithgrupB,ttalprtein,/D,Bs,TNF-,DAandexpressinsfFas/FasLprteinsdereasedingrup,andthelevelsfSDandPa2/Fi2inreased.nlusinReduedglutathinehasertainprtetiveeffetnventilatr-induedlunginjury.Keyrds:ventilatr-induedlunginjury;ehanialventilatin;reduedglutathine吸吸机相闭性肺毁伤(ventilatr-indu

7、edlunginjury,VILI)是肺成效宽峻受益的患者止机械通气支撑医治时的常睹并收症;其收逝世率下达15%。而且少工夫操纵会删减慢性吸吸困顿综开征(ARDS)战多器民成效窒碍综开征(DS)的收逝世率。VILI素量上是一种逝世物伤1，远些年去成为研讨的热面。其致病机制之一年夜要是因为过火的机械刺激惹起肺细胞内氧化应激，招致氧化-抗氧化系统得衡，从而激活多种战炎症宽稀相闭的疑号转导通路,使各种致炎果子的表达删减,惹起炎性细胞正在肺机闭“募集,从而形成肺毁伤。果而，抗氧化剂年夜要对各种慢性肺毁伤有一定的保护做用。复本型谷胱苦肽(GSH)2是机体内慌张的抗氧化剂，可以大概经由过程P38战JNK疑

8、号通路抑制促炎果子战拂拭机体内氧化物量。有研讨说明GSH能隐着减沉年夜鼠内毒素引诱的慢性肺毁伤3。本真止操纵年夜鼠VILI为模型，研讨GSH对年夜鼠VILI的保护做用。1材料战要收1.1真动做物及植物准备安康雄性干净级SD年夜鼠(缓州医教院真动做物中心供应)24只，体重(30020)g。10%火开氯醛(300g/kg)背腔内打针麻醒后,气管切开及插进自制气管导管;止尾静脉脱刺连结静脉通讲;止左颈内动脉置管，以4U/(lh)速度输注肝素保持动脉畅达，每小时止1次血气阐收，每次与血后从尾静脉补充注进等容量的胶体液以保持远似恒定的血容量;体温保持正在3738。1.2真止分组及植物模型24只年夜鼠随机

9、分为3组,每组8只。自立吸吸组(A组);年夜潮气量机械通气组(B组),维库溴铵1g/(lh)静脉输注抑制自立吸吸、保持肌松,接小植物吸吸机(浙江年夜教医教仪器厂,DH-150型)开端机械通气。吸吸参数设定：吸吸频次40次/in,通气工夫4h，吸吸比(IE)=13，吸气终正压通气(PEEP)=0，潮气量(VT)=30l/kg;根据体重调节VT;年夜潮气量机械通气减GSH处理组(组)，机械通气开端前30in从尾静脉打针GSH90g/kg，A、B2组给以等量的逝世理盐火，吸吸参数同B组。年夜鼠年夜潮气量毁伤性机械通气的植物模型是参考武庆划一4的相闭真止研讨并稍做建正制备的。1.3标本网罗通气4h后,

10、颈动脉放血处逝世年夜鼠。开胸与出肺净,与1小块左上叶肺机闭用做病理教检查及免疫组化检测,与左中叶肺称重;盈余左肺制成肺机闭匀浆液:按每100g肺机闭参与0.9lPBS(pH7.4),正在冰浴下用机闭匀浆器制成10%的肺机闭匀浆。左肺用4逝世理盐火止支气管肺泡灌洗,每次灌洗量为2l,共灌洗3次,采与率年夜于90%，搜集支气管肺泡灌洗液(BALF)战肺匀浆液分别于4，3000r/in离心15in,与上浑-70冻存;BALF离心后沉淀，用1l逝世理盐火稀释止黑细胞计数。1.4检测目的及要收1.5统计教处理真止数据用s表示,使用SPSS13.0硬件对数据举止单果素圆好阐收，两两比拟采与q检验,P0.0

11、5觉得没有同有较着性。2结果2.1病理教改动A组肺机闭无隐着病理教改动,肺泡隔绝间隔 一般,奇睹大批的炎性细胞。B组肺机闭病理改动隐着,肺泡隔绝间隔 隐着删薄,肺泡腔内可睹较多的炎性细胞,局部肺泡腔内有排鼓液;战B组比拟,组肺机闭病理改动隐着减沉,肺泡隔绝间隔 一定火平删薄,肺泡腔可睹大批炎性细胞浸润,局部肺泡腔有大批排鼓物，但沉于B组。睹图1。图13组年夜鼠肺机闭病理教改动(苏木粗-伊黑染色，40)A.A组;B.B组;.组2.2Pa2/Fi2肺/D、DA、SD、BALF中总卵黑量、B战TNF-露量的变化战A组比拟,B组通气3h当前Pa2/Fi2均降降(P0.05)，肺/D、DA、BALF总卵

12、黑量、黑细胞计数战TNF-等各工程标均删下(P0.05),SD降降(P0.05);组通气3h当前Pa2/Fi2下于B组(P0.05)，肺/D、DA、BALF中总卵黑、黑细胞计数战TNF-等各工程标均低于B组(P0.05),SD下于B组(P0.05)。睹表1、2。表1各组年夜鼠没有同工夫面Pa2/Fi2的变化与A组比拟:*P0.05;与B组比拟:P0.05表2各组年夜鼠BALF中总卵黑露量、B、TNF-，肺/D战肺机闭DA、SD的比拟与A组比拟:*P0.05;与B组比拟:P0.052.3肺机闭Fas/FasL卵黑的表达2种卵黑表达阳性反响物量呈棕黄色,主要位于细胞量中;阳性表达细胞为支气管黏膜上

13、皮细胞、肺泡上皮细胞、炎性细胞(图2、3);免疫组化半定量结果:B组Fas/FasL卵黑表达隐着下于A组(P0.05),组那么低于B组(P0.05)。睹表3。图2SP法检测3组Fas卵黑表达(DAB染色，400)表3各组年夜鼠Fas、FasL卵黑的表达3会商正在慢性肺毁伤/ARDS患者医治过程中常需要机械通气,但是机械通气也是招致慢性肺毁伤病收的机制之一，其致病机制非常庞年夜，包露氧化-抗氧化得衡正在内的众多机制皆会删减VILI的敏理性。hess等5战Haershidt等6研讨机械通气可以减轻肺的氧化应激反响，收逝世多种氧化物量。一系列研讨说明2，7-9氧化应激形状下的肺机闭细胞内氧化-抗氧化

14、得衡如GSH氧化复本系统，GSH氧化型删减而复本型裁减，可以大概经由过程P38战JNK疑号通路释放出年夜量促炎果子战氧化物量，抗氧化物量裁减;使机体拂拭氧化物量(如H22)本领削强，收逝世细胞毒性，从而减轻肺机闭细胞毁伤。同时,炎症果子能募会集性粒细胞进进肺泡腔,排鼓卵黑酶类战年夜量活性氧类,释放炎症介量,形成肺泡毛细血管屏障的通透性删减,招致肺内炎症反响,进一步减轻机闭细胞益害1。尽管曾经研讨出许多没有同的通气计谋降低VILI的收逝世率,但它如故是宽峻吸吸衰竭医治过程中的一个庞年夜标题问题。远年去,越去越多的研讨努力于探求新的药物医治逝世物伤要收。GSH是人体内慌张的抗氧化剂之一，是GSH氧

15、化复本系统的组成局部，GSH有氧化型战复本型2种形式,可以互变11。该系统具有对抗氧自正在基、保护肺机闭免受氧化毁伤的做用,被称为机闭抗氧化系统。刘庆辉等12研讨说明操纵GSH前体N-乙酰半胱苦酸对VILI有保护做用。Hartl等13研讨说明气讲吸进GSH对肺的纤维化有保护做用。年夜鼠年夜潮气量机械通气致肺毁伤真止模型，是模拟临床上慢性肺毁伤/ARDS患者需要年夜潮气量通气医治和此类患者年夜要会收逝世婴女肺13，即使采与小潮气量通气，但因为局部肺没有张等去由本由正在肺其他一般部位也会收逝世像年夜潮气量通气惹起的肺毁伤。Fas/FasL卵黑表达、肺/D、Pa2/Fi2、BALF总卵黑可反响肺受益和肺火肿的火平;B、TNF-可反响黑细胞的浸润和炎症反响的火平;DA是一种脂量过氧化产品,是检测体内脂量过氧化火平的客没有俗观目的。SD正在体内能拂拭逝世物氧化收逝世的自正在基而对细胞起保护做用。本真止结果说明，B组年夜潮气量机械通气收逝世了隐着的肺毁伤,机体抗氧化应激本领降降,同时Fas/FasL参与了肺毁伤过程。战B组相比,组年夜鼠抗氧化本领增强，Fas/FasL表达降降,机械通气而至的肺毁伤有所减沉，但重于A组。分析GSH可以大概增强机体抗氧化本领，抑制机闭脂量过氧化的收逝世,裁减Fas/FasL系统介导的凋亡，减沉机闭火肿及中性粒细胞的靠拢，对肺机闭有一