玉米赤霉烯酮毒素标准检测规程

1、生效日期：2015年12月30日发放号:北京华aW主18技JE関眼公司+HuaanMagnechBin-TechGgLtd-*版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号: 文件编号：HAMK-OI-2015玉米赤霉烯酮标准操作规程1、目的为了规范亲和柱净化样本中玉米赤霉烯酮的操作流程，特制订本操作规程。2、范围本标准适用于粮食、饲料、食品中玉米赤霉烯酮的检测。3、检出限和定量限项目岛津安捷伦样本检出限（Pg/kg）样本定量限（Pg/kg）样本检出限（Pg/kg）样本定量限（pg/kg）ZEN2.968.9675.9253.24、职责部门名称部门职责质量管理部1、负责本制度的实施。2、

2、负责本制度的监督执行。5、程序5.1原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到高效液相色谱仪中用于检测。5.2溶液配制521提取液：80%乙腈用量筒移取800mL乙腈，加入超纯水定容至至1L。522稀释液：0.01MPBST溶液称取8gNaCl、0.2gKC1、0.2gKH2PO4和1.16gNa2HPO4.12H2O，加入800mL超纯水溶解，加入2mLTween-20,定容至1L。5.2.3玉米赤霉烯酮标准工作液：用

3、色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到1000ng/ml、500ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml。HuaanMagnechSo-TechGgLtd-*II：京华aW主狷技JK育眼公司”文件编号：HAMK-OI-2015版本号：1.05.3样品前处理20g0.01g样品（固体样品需粉碎，并过2mm分样筛）加入100mL提取液（80%乙腈-水溶液）混匀；高速均质（N10,000r/min）1min，或摇床（200r/min300r/min）剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤，收集滤液；取10mL滤液加入40mL稀释液稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液;取25

4、mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：15.4净化取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；（3mL的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与注射器固定后使用）将柱子与气控操作架上的注射器连接固定，取适量处理后的溶液上样；去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以12滴/秒速度流出；待液体排干后，用10mL去离子水洗涤2次，流速23滴/秒；待液体排干后，上样1mL甲醇，流速1滴/秒，收集洗脱液并定容至1mL；洗脱液用0.22pm微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。*每次上样前都要将上次液体完全排干。*谷物样本也适用于GB/T5009.209-20085.5液相测定

5、5.5.1液相色谱条件C18柱：250mm（长）x4.6mm（直径），填料粒径5pm；流动相：60%乙腈流速：1.0mL/min；柱温：40C；进样体积：20pL荧光检测器：激发波长：274nm发射波长：440nm5.5.2色谱定量分别取相同体积样液和标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试II：京华aW主狷技it讒IB公司+HuaanMagnechSn-TechCo.,Ltd.文件编号：HAMK-OI-2015版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号:II：京华安豈科主ngiK有眼公司+HuaanMagnechESn-TechCoLtd.文件编号：HAMK-OI-20

6、15版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号： 样的响应值（峰高或峰面积），以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线,将未知样本中玉米赤霉烯酮的峰面积带入标准曲线，得到试样中玉米赤霉烯酮的浓度,标准品色谱图参考下图：数据文件名EN-500ppb.lcd样品笹EN-500ppb25201510IIIIIIIIIIIIIIII0.01.2.3.4.05.06.07.08.09.010.011.012.0min附图：ZEN-500ppb标准品液相图谱5.6注意事项使用前，免疫亲和柱需回至室温（2225C）。一亲和柱28C储存，不得冻存。不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。柱容量：2000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积，重新检测。pH：亲和柱的上样溶液pH需在68之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节pH。玉米赤霉烯酮可致癌，应戴手套操作。使用过的容器及标准品溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。上机检测时的溶剂与流动相保持一致，可以消除溶剂效应的影响。6、相关文件免疫亲和柱检验标准免疫亲和柱检验操