内障丸对抗精子抗体阳性大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响

1、内障丸对抗精子抗体阳性大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响【摘要】目的讨论内障丸对抗精子抗体阳性大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响。方法将istar雌性成年大鼠随机分为6组。中药低剂量组内障丸、中药高剂量组内障丸、中药对照组六味地黄丸、西药对照组醋酸泼尼松片、模型组、空白组。从第1次免疫后1周开场给药，连续3周。之后检测内障丸对妊娠第3天大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响。结果内障丸可明显进步大鼠交配后第3天子宫一氧化氮合酶表达，进步大鼠的窝产仔鼠数。结论内障丸能改善子宫内环境，有利于受精卵着床。【关键词】内障丸抗精子抗体一氧化氮合酶Keyrds：NeiZhangpills;Antisperantibdy;

2、iNS抗精子抗体AsAb阳性不孕约占不孕患者的20%30%，具有较高的发病率。AsAb可以通过不同的环节影响生殖过程导致不孕和流产。本实验通过观察内障丸对AsAb阳性大鼠受孕后子宫一氧化氮合酶iNS的影响，讨论内障丸对子宫iNS的作用机制。为中药治疗AsAb阳性流产及不孕提供理论根据。1材料与方法1.1材料内障丸，6g/袋，黑龙江中医药附属第一医院制剂室提供，批号：031016。六味地黄丸，0.2g/丸，每丸相当于原药材3g，吉林济邦药业产品。醋酸泼尼松片5g/片，上海信谊药业产品。硫酸庆大霉素8万u/只，批号031026，上海第一生化药业公司产品。鼠抗人精子抗体酶免试剂盒由北京华美生物技术公

3、司提供，实验所需其它化学试剂耗材均由哈尔滨市医药公司化学试剂批发站提供。1.2方法用提取的膜抗原伴等体积弗氏完全佐剂，将二者充分研磨混匀，并参加硫酸庆大霉素10U/只。对除空白组外所有大鼠进展双侧腹股沟处多点皮下注射，每只大鼠注射原量为0.4l，2周后用精子膜抗原加等体积不完全佐剂，对除空白组外所有大鼠进展双侧腹股沟处多点皮下注射，进展加强免疫每只大鼠注射抗原剂量同上次。1周后，用精子膜抗原再次双侧腹股沟处皮下多点注射。空白组大鼠于相应时间于一样位置多点注射等体积生理盐水。将所有雌性大鼠随机分为6组，每组12只。中药低剂量组内障丸9.72gkg-1d-1，中药高剂量组内障丸19.44gkg-1

4、d-1，中药对照组六味地黄丸0.8gkg-1d-1，西药对照组醋酸泼尼松片1.35gkg-1d-1，模型组、空白组等剂量蒸馏水，从第1次免疫后1周开场给药，连续3周。每组随机取6只大鼠，于受孕第3天，处死大鼠。取子宫4%多聚甲醛过夜，梯度酒精脱水，二甲苯透明，正丁醇过夜，石腊包埋。免疫组织化学方法检测.计量资料组间比拟方差分析，组间两两比拟采用t检验，t检验，均采用SPSS11.5统计软件包处理。2结果2.1药物对交配后3d大鼠子宫iNS表达情况的影响测量采用半定量方法进展，细胞浆被染成棕黄色定为阳性结果，根据每张切片阳性反响颗粒占细胞总数比例定为：阴性-：未见阳性颗粒。弱阳性+：阳性颗粒少于

5、1/3。阳性+：阳性颗粒小于2/3且大于1/3。强阳性+：阳性颗粒大于2/3。为进展定量统计描绘，分别对结果评分为-：1分；+：2分；+：3分；+：4分。每张切片计数3个视野，结果见表1。表1药物对交配后3d大鼠子宫iNS表达情况的影响(略)由表1可见，模型组大鼠iNS表达低于空白组P0.01，高于醋酸泼尼松组P0.05，内障丸可以进步子宫iNS的表达，经统计学处理无差异P0.05，六味地黄丸组iNS的表达明显低于空白组P0.05。2.2药物对大鼠窝产仔鼠数的影响结果见表2。表2药物对大鼠窝产仔鼠数的影响(略)由表2可见，模型组大鼠窝产仔鼠数明显低于空白组，药物组大鼠产仔鼠数有不同程度的进步，

6、内障丸低剂量组大鼠显著高于模型组P0.01，六味地黄丸组窝产仔鼠数与模型组比无明显差异P0.05，内障丸高剂量组窝产仔鼠数与醋酸泼尼松组比无明显差异P0.05，与空白组比无差异P0.05。3讨论采用内障丸治疗AsAb阳性不孕及流产，实验结果说明内障丸可以进步大鼠子宫iNS表达，并进步大鼠的窝产仔鼠数，提示内障丸对AsAb阳性不孕及流产有一定的预防和治疗作用。祖国医学认为“肾为先天之本，元气之根，肾主藏精，精能化气，肾精所化之气，即为肾气。肾精的盛衰，不仅关系到能否受孕，而且始终影响整个孕期。假设肾气亏损，便不能固摄胎元而致流产。故肾虚是本病的主要原因，也是治疗时需要解决的首要问题。内障丸是我院

7、自制中成药，方中由海马、鹿茸、熟地黄、枸杞子、山萸肉、人参等组成2。全方既补肾阴亦补肾阳，使阳生阴长，阴阳平衡，正如?景岳全书妇人规?指出：“善治阳者，必于阴中求阳，那么阳得阴助而生化无穷；善治阴者，必于阳中求阴，那么阴得阳升而源泉不断。从而使肾中精气旺盛，阴阳平衡，冲任调和以成胎孕。催化内源性N生物合成的酶是一氧化氮合酶(NS),iNS是诱导型NS。N/NS系统参与女性生殖生理活动,如子宫内膜周期性变化的调节、细胞凋亡、卵泡发育3、卵巢性激素的分泌4、胚胎着床、维持妊娠5与分娩以及平滑肌的增殖分化等。其中以iNS在子宫内膜的表达较显著,功能也较重要6。N参与雌激素启动胚胎着床的信号通路7；N

8、合成阻滞可能导致胎盘血管形成障碍,从而引发胎盘浅表着床8。N在胎盘组织中可通过P9的活性参与胎盘构造和功能调节9。本研究说明模型组大鼠在妊娠第3天时子宫内iNS表达比正常对照组明显减少，偶见阳性细胞，而正常对照组大鼠的子宫中那么有大量iNS分布，妊娠第3天正处于大鼠胚胎植入前，此时子宫正在为迎接胚胎做着积极的准备，子宫中iNS的表达对此具有重要意义。iNS表达减少会引起N的产量降低，从而可能影响大鼠胚胎的发育和着床，导致妊娠失败，这可能是AsAb阳性大鼠生育才能下降的原因之一。中药内障丸可以明显进步子宫内iNS的表达，醋酸泼尼松组iNS表达也较少，甚至找不到阳性细胞。这可能因为地塞米松可以通过

9、抑制iNSRNA的转录实现对iNS的抑制作用3，10，糖皮质激素4还可以阻止细胞因子诱导细胞内iNS的合成。所以本研究中醋酸泼尼松可能有抑制iNS的作用，导致iNS较少，从而对大鼠的生殖功能产生不利影响。围着床期，子宫内环境出现适应性变化，使胚泡的发育与子宫内膜组织的分化同步，以利于着床。我们研究发现，模型组大鼠的iNS表达低于正常组，说明AsAb阳性大鼠胚胎着床期，子宫内免疫环境紊乱，不利于孕卵着床，所以，模型组大鼠胚胎数较少，内障丸高剂量组大鼠子宫iNS的表达情况与正常组相近，有利于孕卵着床，窝产仔鼠数也较理想。本实验通过测定AsAb阳性大鼠子宫iNS的表达及内障丸对其的影响，讨论iNS与

10、AsAb阳性不孕及流产的关系，提示内障丸可以进步妊娠子宫iNS表达，进而改善子宫内环境，从而到达进步生育才能、防止流产的治疗目的。【参考文献】1赖安妮，宋济范，刘仙菊,等.中药胎宝抑制抗精子抗体的实验研究J.中国中西医结合杂志，1997，176：360.2陈惠铮，王素霞，王秀霞.中药治疗49例抗精子免疫性不孕症J.中医药信息，2000，172：封3.3hatterjeeS，GangulaPRR，DngYL,etal.IunytheiallalizatinfnitrixidesynthaseIIIinreprdutivergansffeateratsduringtheestrusyleJ.His

11、theJ，1996，28：715.4DunnaR，HillJ，LasnD,etal.variasnhrneseretryrespnsetgnadtrpinsandnitrixidefllinghrninitrixidedefiienyintheratJ.BilReprd，1999，60：959.5SladekS，agnessRR，nradKP.NitrixideandpregnanyJ.AJphysilgy，1997，272：R441.6alshLS,llendrffA,ershnJL.EstrgeninreasesinduiblenitrixidesynthasegeneexpressinJ

12、.AJbstetGynel,2022,188(5):1208.7rdingerRJ，JaksnFL，rrillA.Iplantatin，deiduafratinandlivebirthsinastelldefiientie/vJ.BilReprd，1999，682：479.8王假设光，尤昭玲，刘小丽.黄芪丹参复方提取物对一氧化氮合成阻滞孕鼠胎盘血管内皮细胞及滋养细胞血管内皮生长因子RNA表达影响J.中国中西医结合杂志，2022，256：516.9Pustvrh,JaerbauA,SinnerD,etal.ebrane-typeatrixerallprtEinase-9ativityinplaentaltissuefrpa