高效液相色谱法 (8)PPT

1、关于高效液相色谱法 (8)第一张，PPT共三十四页，创作于2022年6月2一、 概述高效液相色谱法与经典液相色谱法经典液相柱色谱装置高效液相色谱仪经典液相色谱HPLC固定相粒径流动相驱动方式流动相流速150-200 m重力或低压泵很慢3-10 m高压泵快(1-10mL/min)例：分离20种氨基酸柱长：170 cm柱径：0.9 cmF：30 mL/ht分离: 20 h经典柱色谱HPLCt分离：1 h第二张，PPT共三十四页，创作于2022年6月3二、 基本理论1、色谱柱柱效的基本关系式2、分离度第三张，PPT共三十四页，创作于2022年6月43、 速率方程溶质在液相流动相中的扩散系数，约为气相

2、中扩散系数的万分之一第四张，PPT共三十四页，创作于2022年6月5流动相流速对板高的影响小颗粒填料，填充均匀； 选择较低的流动相流速； 选择粘度小的溶剂作流动相，改善传质。 修正的速率方程：提高柱效途径第五张，PPT共三十四页，创作于2022年6月6三、 高效液相色谱分离方法1、吸附色谱法 分离原理Kad值越大，保留时间越长。 第六张，PPT共三十四页，创作于2022年6月7固定相硅胶强极性氧化铝弱极性活性炭非极性分子筛强极性高分子多孔微球(GDX)固体吸附剂第七张，PPT共三十四页，创作于2022年6月82、 离子交换色谱法阳离子交换树脂阳离子交换阴离子交换分离原理第八张，PPT共三十四页

3、，创作于2022年6月9 固定相阳离子：SO3H(强)CO2H(弱)阴离子：N+R3(强)NH2 (弱)基质合成树脂纤维素硅胶离子交换剂第九张，PPT共三十四页，创作于2022年6月10 流动相水相缓冲液+有机改性剂调节选择性的主要参数盐种类及浓度pH值各种阴离子的在阴离子交换剂上的滞留次序：用柠檬酸离子洗脱比用氟离子洗脱快第十张，PPT共三十四页，创作于2022年6月11 应用：离子及可离解的化合物如氨基酸、核酸、蛋白质等第十一张，PPT共三十四页，创作于2022年6月123、 化学键合相色谱采用化学键合相的液相色谱固定相非常稳定，在使用中不易流失。由于可将各种极性的官能团键合到载体表面，因

4、此它适用于种类繁多样品的分离。特点第十二张，PPT共三十四页，创作于2022年6月13键合固定相制备ODS(C18)键合相硅胶十八烷基氯硅烷非极性硅烷化反应使用pH范围： 2-8第十三张，PPT共三十四页，创作于2022年6月14键合固定相类型疏水基团烷烃（C8和C18）、苯基等极性基团丙氨基氰乙基醚和醇等离子交换基团胺基、季铵盐磺酸、羧酸第十四张，PPT共三十四页，创作于2022年6月15键合相色谱法分类反相键合相色谱:常用固定相：C18分离对象:非极性中等极性化合物常用流动相甲醇-水乙睛-水反相键合相色谱疏溶剂分离机制固定相极性 流动相极性离子性键合相色谱将各种离子交换基团化学键合到硅胶基

5、质表面上，就形成了离子性键合相色谱的固定相。其分离原理与离子交换色谱类同。 第十六张，PPT共三十四页，创作于2022年6月17例：甲苯和苯酚的分离。流动相：甲醇-水出峰顺序：苯酚，甲苯出峰顺序：甲苯，苯酚十八烷基键合相二醇基键合相第十七张，PPT共三十四页，创作于2022年6月18保留时间：例：以ODS键合色谱柱、甲醇-水为流动相分离以下两种苯甲酸，试判断出峰次序。没食子酸3,4-二羟基苯甲酸固定相: 非极性; 流动相: 极性组分极性: 3,4-二羟基苯甲酸没食子酸第十八张，PPT共三十四页，创作于2022年6月194、 尺寸排阻(凝胶)色谱法排阻色谱分离示意图相对分子质量差别大于10的化合

6、物才可以分离分离原理第十九张，PPT共三十四页，创作于2022年6月20四、 高效液相色谱仪第二十张，PPT共三十四页，创作于2022年6月21高压泵流动相溶剂废液色谱柱进样口检测器第二十一张，PPT共三十四页，创作于2022年6月221、 高压输液系统高压泵要求输出压力高平稳、脉冲小流量稳定可调耐腐蚀第二十二张，PPT共三十四页，创作于2022年6月23梯度洗脱装置 低压梯度 高压梯度 通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改变分离因子值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。梯度洗脱第二十三张，PPT共三十四页，创作于2022年6月24等度洗脱与梯度洗脱第二十四张，PPT共三十四页，创作于2

7、022年6月25贮液瓶及流动相1) 对样品有一定的溶解度，以防在柱头产生沉淀。2) 适用于所选择的检测器。3) 化学惰性好，以免破坏固定相。4) 低粘度，增加样品的扩散系数，提高柱效。5) 纯度高。溶剂不纯会增加检测器噪声，产生伪峰。对流动相溶剂的一般要求第二十五张，PPT共三十四页，创作于2022年6月262、 进样系统 准备状态 进样状态六通阀进样 装置自动进样器 第二十六张，PPT共三十四页，创作于2022年6月273、 色谱柱内径：16 mm，柱长：530 cm；柱填料粒径：15 m 分离柱第二十七张，PPT共三十四页，创作于2022年6月284、 检测系统紫外吸收检测器(a) 可变波

8、长紫外检测器(b) 二极管阵列检测器氘灯光栅流通池测量光电二极管参比光电二极管二极管阵列检测器第二十八张，PPT共三十四页，创作于2022年6月29两种检测器的色谱图(a)：可变波长紫外检测器；(b)：二极管阵列检测器(b)(a)第二十九张，PPT共三十四页，创作于2022年6月30紫外检测器灵敏度高，精密度及线性范围较好 ，可用于梯度洗脱。 流动相选择有限制。一些常用溶剂的紫外截止波长溶剂CS2氯仿四氢呋喃苯乙睛甲醇水紫外截止波长（nm）380245212210190205187第三十张，PPT共三十四页，创作于2022年6月31荧光检测器灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。 第三十一张，PPT共三十四页，创作于2022年6月32示差折光检测器利用组分与流动相的折射率