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文档简介

1、血清蛋白质的醋酸纤维素薄膜电泳 实验目的1掌握电泳的基本原理，了解电泳仪和电泳槽的功能。2熟悉电泳的基本过程与操作方法。 电泳实验原理 优点: 快速、准确、重现性好。 应用: 1. 分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等； 2. 分析某种物质的纯度及分子量。 对生物大分子而言：电场力: F = QE阻力: F = 6r当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动: F = FQE = 6r 迁移率: 即/E，表示单位电场强度时粒子运动的速度。 该值在一定条件下决定于粒子本身的性质，即其所带电荷、大小和形状.6rQE=影响电泳速度的因素样品本身：带电量、分子大小、形状电场强度：电压缓冲液：成分、pH、离子强

2、度(0.02-0.2 M)支持介质：电渗作用、吸附作用温度负极正极 表面带负电荷带正电荷的水层携带粒子向负极移动 如果样品应移向负极，则泳动速度加快； 如果样品应移向正极，则泳动速度减慢。 显微电泳等电聚焦电泳等速电泳密度梯度电泳电泳自由电泳(无支持体)区带电泳(有支持体)滤纸电泳(常压及高压)薄层电泳(薄膜及薄板)凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺) 分类水平电泳槽 垂直板电泳槽圆盘电泳槽 双向电泳 醋酸纤维薄膜电泳 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为支持物。1. 样品吸附极少，无拖尾现象，条带清晰。2. 快速省时。3. 灵敏度高，样品用量少。4. 制成透明干膜用于定量扫描分析与长

3、期保存。5. 操作简单、快速、价廉.醋酸纤维素是纤维素的醋酸酯，将其溶于丙酮等有机溶液中，可涂布成均一细密的微孔薄膜。待有机溶剂挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120m，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。 染色方法 氨基黑10B 考马斯亮蓝R250 银染色法 考马斯亮蓝R250 考马斯亮蓝G250 人血浆蛋白质的等电点及迁移率 蛋白质名称等电点泳动度/(cm2V-1S-1)分子量白蛋白4.88-5.910-569,0001-球蛋白5.065.110-5200,0002-球蛋白5.064.110-5300,000-球蛋白5.12 -2.810-59,0

4、00-150,000-球蛋白6.85-7.50-1.010-5156,000-300,000病名白蛋白1球蛋白2球蛋白球蛋白球蛋白肾病弥温性肝损害肝硬化-桥原发性肝癌AFP多发性骨髓瘤慢性炎症妊娠无丙种球蛋白血症双白蛋白血症双峰实验器材和试剂实验器材 电泳槽、电泳仪、染缸、滤纸、醋酸纤维素薄膜、点样器试剂1. 血清2. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液 (pH 8.6、I = 0.06) 3. 染色液: 氨基黑10B 0.25g，甲醇50 mL + 冰醋酸10 mL + 水40 mL溶解 (可重复使用)4. 漂洗液：甲醇45 mL + 冰醋酸5 mL + 蒸馏水50 mL实验步骤1. 点样面为不光滑面，勿用手触摸；2. 点样量适中，垂直居中点样；3. 点样端靠近电泳仪负极；4. 膜条

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