细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察实验原理及步骤

1、实验二：细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察【课前预习】1土豆凝集素的本质及其使红细胞凝集的原理？2在等渗溶液中细胞一定能维持正常形态吗？3预测红细胞在各种溶液中的溶血速度？【目的要求】1了解细胞糖被的特点和功能，了解植物凝集素的作用2了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度【基本原理】细胞膜表面的有分支状糖外被，细胞间的联系、细胞的生长和分化、免疫反应、肿瘤的发生等都和细胞表面的分支状糖分子有关。凝集素（lectin）是一类含糖并能与糖分子专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞表面间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以

2、抑制细胞的凝集。细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构。可选择性地让某些物质进出细胞，各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，动物细胞会失水而收缩；在低渗环境中，动物细胞会吸水膨胀直至破裂。本实验将红细胞分别放于各种等渗溶液中，由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同，使得不同溶质透入细胞的速度相差很大，有些溶质甚至不能透入细胞。当溶质分子进入细胞后可引起渗透压升高，水分子随即进入细胞，使细胞膨胀，当膨胀到一定程度时，红细胞膜会发生破裂，血红素溢出，此时，原来不透明的红细胞悬液突然变成红色

3、透明的血红蛋白溶液，这种现象称为红细胞溶血。由于各种溶质进入细胞的速度不同，所以不同的溶质诱导红细胞溶血的时间不同，相反可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。【实验用品】1材料：土豆块茎，鸡（采血）2器材和仪器：显微镜、载片、盖片、天平、滴管、小烧杯、移液管、离心管、试管和试管架3试剂：0.85生理盐水、2鸡红细胞、PBS 缓冲液、Alsever 溶液、0.17M 氯化钠、0.17M 氯化铵、0.17M醋酸胺、0.17M 硝酸钠、0.12M 草酸铵、0.12M 硫酸钠、0.32M 葡萄糖、0.32M 甘油、0.32M 乙醇、0.32M丙酮【方法步骤】1制备土豆凝集素液和红细胞悬

4、浮液，制备无血清的鸡红细胞悬液，使凝集素液和红细胞悬液混合，静置后，在光镜（低倍）下观察凝集素使红细胞凝集的现象。（以PBS 缓冲液加2血细胞作对照实验）土豆凝集素的制备：称取土豆去皮块茎2g , 加10 mL PBS缓冲液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素） , 载玻片上滴一滴土豆凝集素,再滴一滴2红细胞液,充分混匀静置20 min , 低倍显微镜下观察血球凝集现象。2观察10%的鸡红细胞悬液，可见该悬液为一种不透明的红色液体3观察溶血现象 取一支试管，再加入4ml 蒸馏水，加入0.4ml 鸡红细胞悬液，混匀后注意观察溶液颜色的变化，可见溶液由不透明的红色变成透明的红色液体（可将

5、试管贴靠在书上，隔着试管看书中的字，如发现溶血则文字可被看清）。4观察鸡红细胞对不同物质的通透性（1）取一支试管，和0.17M 的Nacl 溶液4ml，加入0.4ml 鸡红细胞悬液，轻轻摇匀，用上述方法观察是否出现溶血现象，如出现溶血，记下发生溶血所需要的时间（从加入4ml 溶液算起）（2）按上述方法分别加入下列9种溶液是否导致红细胞溶血并记录实验结果。 0.17M 氯化铵 0.17M 硝酸钠 0.17M 硫酸钠 0.17M 醋酸胺 0.17M 草酸铵 0.17M 葡萄糖 0.17M 甘油 0.17M 乙醇 0.17M 丙酮【实验结果】1土豆凝集素能使鸡红细胞凝集，PBS 对照液中红细胞分散均匀 对照组：未凝血 实验组：凝血2细胞膜渗透性实验结果比较和分析试管编号 所加试剂和浓度 是否溶血 时 间 结果分析 1 2 3