实验细胞工程试验报告

1、参观我校海藻生物技，了解植物细胞工的基构、常用仪器设备及其用途参观我校海藻生物技，了解植物细胞工的基构、常用仪器设备及其用途等相关内容在进行植物组织与细胞培养工作之前，首先应对工作中需要哪基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或建、改。的大小取决于工作的目的和规模，在设计室时，应按组织与细胞培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起工细胞培养是在严格无菌的条件下进行的要做到无菌的条需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制的培养条1用于进行培养器皿、培养基的配制、培养物质的准备以及供应物品的保存等。准备室应通风、采光良好。室内应有下列和各种用具（1）基本实验水槽和盛物准备台

2、铃及消防设柜等（2）基本即冰箱（普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱）、天平（电平、托盘天平、便携式天平）、电即冰箱（普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱）、天平（电平、托盘天平、便携式天平）、电热鼓风干燥箱、高压蒸汽灭菌锅纯化装置、pH 计、电热磁力搅拌器、微波炉、电炉、超声（3）培养即各种规格的试管、培养皿、三角烧瓶等（4）玻璃器皿即带盖螺口试剂瓶、烧杯、容量瓶、量筒、刻度移液管等（5）接种器械即镊子、剪刀、解剖刀、接种针等（6）杂物品类即医用小推车、水盆桶、白瓷盘、棉线、棉塞、无口膜等接种室即无菌操作室，应设置的最里面，防止空引起污染，它的组成部分，它直接关系到整个实验工作成败，一般面积在 3-5

3、m2 为宜，室内需安装紫外灯。除设置无菌室外通常主要存放无菌操作台等设备提供无菌的操作空间他设备为无过滤装置、取材和继代培养中切割组织的器械，包括手术刀柄、刀片组织剪、镊子等无菌操作室内密闭不透风，温湿度浓度较高，易滋菌，故有可能损的身体健康，应装置过滤空气的恒温恒湿节器。设计无菌操作室时应注意以下几点：a.为防止室内温度增节器。设计无菌操作室时应注意以下几点：a.为防止室内温度增高，要选择阳无菌操作室在条件限制的情况下可用无菌操作台来替代，无菌台种类很多，有平行气流和垂直气流，有整机和组合式，有单人和操作之分，其工作原理是利用鼓风机，使经高效过滤的空气徐徐通过面形成无菌的正气压，使外周有菌的

4、空气不易流入洁净台，达到操作无菌的目的。因此，在使用时，周围不能有较大的气流，最好洁净台置在清洁无尘的房间，防止灰尘堵塞滤器，延长使用时间培养室是防止微生物的污染和有害物的影响，是接种后的材料培养、生长的场所，其设计以充分利用空间和节省能源为原则最重要的因子是温度根据培养物的最适生长温度设置培养室的温度具备热冷空调以调节温度。由于植物不同种类要求不同温度，最好不种类有不同的培养室（或培养箱）。室内湿度也要求恒定，相对湿度保持在 70%-80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天的摇床或转床等；而动物细胞培养需要 CO2 培养箱4该室用于对培养物的观察分析与培养物的计数

5、等。主要设备生物显微镜、倒置生物显微镜及显微照相设备等。小型仪器设备有球计数器过滤灭磁力加热搅拌器低速台式离心机等简述我校海藻生物技的组成简述细胞工常用仪器设备简述我校海藻生物技的组成简述细胞工常用仪器设备的原理和用途一、实验目通过实验，掌握植物组织培常用玻璃器、干燥包扎技术；了解干热灭菌和湿热灭菌的原理及异同，并掌握有关的操技术，为相关实验做好准备工二、实验器培养皿、三角烧瓶、试管三、玻璃器皿的实验用具的清洁和灭菌是组织培养成功的关键所在，是物免受污染的前提。为了保证培养物不受污染，第一关就是要实验用具的清洁和灭菌是组织培养成功的关键所在，是物免受污染的前提。为了保证培养物不受污染，第一关就

6、是要对各种皿进和，为保持灭菌后的无菌状态，需要对培养皿、吸管进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉花塞，做这些工作同样有一套科的方法和需要熟练的技巧，了解无菌操作相关仪器的结构、主要用途性能是十分必要的，有利于保障以后各实验的顺利进玻璃器皿是细胞工程实验中使用最多的一类物品，其洗涤注意和方法如下任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，所以不能用有腐皿一般新的玻璃器皿用 2%的盐酸溶液浸泡数小时，再用水冲洗干净用过的器皿应立即洗涤，可用去污粉、洗衣粉，放置太会增加洗涤难度；难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起例油的器皿不要与无油的器皿放在一起洗强酸、强碱、琼脂等腐蚀或阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤内

7、，必须倒在废缸内等待无污染处理如果器皿沾焦油及树脂类的一些物质用浓硫酸或 40 （载玻片或盖玻片可先在 2%盐酸溶液中浸1 小时，然后在水中冲洗23 凡遇有传染性材料的器皿，洗涤前应经高压灭菌后。8. 洗涤后的玻璃器皿要求玻璃能被水均匀湿润而无条纹和水珠四、培养皿、干燥、包扎和灭用过的培养皿先浸泡在8. 洗涤后的玻璃器皿要求玻璃能被水均匀湿润而无条纹和水珠四、培养皿、干燥、包扎和灭用过的培养皿先浸泡在洗洁精溶液中 24 h 左右，再进用海绵蘸洗洁精对培养皿的反复刷洗，直到培养皿能被均匀湿润而无水珠挂在壁上自来水冲洗培养皿 洗涤的培养皿倒置时，水顺着器壁流下，且不挂水珠，表明已洁干净蒸馏水冲洗

8、3 次，洗去自来水中的杂质，倒扣在瓷盘上晾晾干后将培养皿倒扣、转移到烘箱中烘干（100，1 h），烘干后关闭玻璃器皿的包扎：为保持器皿灭菌后的无菌状态，需在灭菌前行包扎. 层b. 刻度吸管：洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头塞入脱脂棉花，以防在使用时造成污染。每支吸管用一条 试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞（料试管塞），棉试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞（料试管塞），棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱缝隙，松紧适宜。棉塞的长度不小于管口直径的 2 倍，约 五、高压蒸汽灭关好排水阀门，倒入蒸馏水至标度。注意水量一定要加足，否干烧

9、容事故将需要灭菌的器皿装入灭菌锅中，加盖密封。如果是盛有液体容器，则盖子不能完全封闭，以防灭菌时体积增大发生爆裂使用需要旋螺旋密封的灭菌锅时，先将每个螺旋旋转到一定程（不要太紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目通电加温，打开排气阀门，排尽锅内的空气。当阀门冲出的全是蒸汽时可关闭排气阀门，如果过早关闭阀门，冷空气排气不底，也达不到彻底灭菌的目的: 30 分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加温。降温：自然降温或打开阀门排汽降温。稍微打开一点排气阀门锅内蒸汽缓慢排出，然后逐渐开大阀门使气压慢慢下降，注意使排气过否则会使锅内的器皿因压力和温度变化过大使排

10、气过否则会使锅内的器皿因压力和温度变化过大而破或者容器中的液体会冲出容器7. 当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降到零时，即可打开锅盖待锅内温度下降到 60左右时取出灭菌物品8. 将包扎好的、灭菌过的玻璃器皿摆入电热烘箱中，相互间要留一定的空隙，以便空气流通，直至完全烘干9. 将灭菌好的器皿置于柜中，并尽快使用六、实：1. 玻璃器皿和灭菌的重要性及注意事项2. 高压蒸汽灭菌前为什么要排出灭菌锅内的冷空气3. 湿热灭菌和干热灭菌的区别一、实验目通过坛紫菜叶状体切段再生实验，掌握植物组织培养的基本流观察切段再生情况并分析坛紫菜叶状体的极性二、实验材料及坛紫菜叶状体、单面刀片棉花、镊子毛笔垫板海水、显

11、微镜、载玻片、培养皿、吸水纸、直尺等三、实验步二、实验材料及坛紫菜叶状体、单面刀片棉花、镊子毛笔垫板海水、显微镜、载玻片、培养皿、吸水纸、直尺等三、实验步 测量叶状体的长度和宽度；将切段玻片上，观察边缘刺、细胞结构（星状色素体）叶状体表面附着污染物等将切段置灭菌培养皿中，1.020棉重复上一步骤 2-3 次，直至镜检无污染为止。每次重复时将切段将切段置垫板上，用取孔器取一个圆盘，并在圆盘靠近状体稍部处切一小口，然后全部转移到培养皿中培养，加 2/3 体1 个切段和一块圆盘，培养皿下盖外侧注明组别、名字和日期）； 培养第三周时总结实验结果四、实. 2. 根据实验结果分析坛紫菜叶状体的极性一、实验

12、目通过坛紫菜叶状体单离细胞的分离与培养，掌握分离和培养植一、实验目通过坛紫菜叶状体单离细胞的分离与培养，掌握分离和培养植细胞的基本方法与技术，观察坛紫菜单细胞的再生方式并分析其意义二、实验器玻璃棒、10mL9cm的培养皿、低速离心机、光照培三、实验步酶液的配制：1mL，CaCl2（2*104ppm）1mL，葡萄糖（2.0M）1叶状体无杂藻处理：用毛笔反复刷洗叶状体表面，直至无污染存在（详见实验三将叶状体放在 1.0M 的葡萄糖溶液中洗三遍，以除去叶状体表面的盐分叶状体用吸水纸吸干，放垫板片切碎（碎片大小 0.5g5mL叶状体酶解：将三角瓶置 29 培养箱内 细胞解离后，迅速用细胞漏斗将组织块和酶液分离，并加适量 最后一次离心得 最后一次离心得到的细胞沉淀的培养皿中，细胞密度不超过104 个/mL，培养液加至培养皿的1/3 体积，放置于培养第三天后打开培养箱的光照，光强设置为 1000 lux，光周期为 12 12D1.0262/3每周更换 1/2 培养液并观察细胞的再生情况第三周总结实验结果，并将皿中再生体用毛笔刷下后转移到充瓶中充气第四周更换 1/2 培养液并挑出生长快、形状好的再生