DB1301-T122-2008牛乳和奶粉中氯霉素酶联免疫检测技术规程

1、DB1301石家庄市地方标准DB1301/T1222008牛乳和奶粉中氯霉素酶联免疫检测技术规程2008-05-10 实施2008-05-10 2008-05-10 实施石家庄市质量技术监督局发布DB1301/T122DB1301/T122200811前 言.本标准由石家庄市畜牧水产局提出。 本标准起草单位：石家庄市畜产品质量监测中心。本标准主要起草人，左晓磊、焦银彩、张蕾、孙莉、张彩云DB1301/T122DB1301/T122200844牛乳和奶粉中氯霉素酶联免疫检测技术规程1范围本标准规定了牛乳和奶粉中氣霉素残留检测的测定原理、仪器设备、试剂和溶液、抽样、样品制备、 检测步骤和结果计算。

2、本标准适用于牛乳和奶粉中氯霉素残留的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBZT 6682-1992分析实验室用水规则和试验方法中华人民共和国官方取样程序3测定原理氯霉素酶联免疫检测的基础是间接竞争ELISA方法，微孔条上包被偶联抗原，样本中残留物氯霉 素和微孔条上包被的偶联抗原竞争抗氣霉素抗体，加入酶标二抗，用酶基质显色，样本吸光度值与其所 .含残留物

3、氯霉素的含量呈反比。4仪器设备4.1仪器设备4.1.1微孔板酶标仪：配备450nm滤光片。4.1.2洗板机。4.1.3微量可调移液器及配套吸头：单道20皿、50匹、100心八道50300心4.1.4振荡器4.1.5 离心机：N3000g4.1.6氮吹仪。7摇床。4.1.8冰箱。4.1.9分析夭平：感量0.0也。4.1.10涡旋仪。.4. 2氯琴素检测试剂盒4.2.1酶标板（微孔板条及板条架）04.2.2氣霉素系列标准溶液。4.2.3抗体浓缩液。4.2.4浓缩复溶液。4.2.5浓缩洗涤液。6酶标二抗。4.2.7底物/发色剂。4.2.8反应终止液。5试剂和溶液5.1水为去高子水，符合GB/T668

4、21992规定的二级水。5.2试剂5.2.1亚硝基铁氤化钠溶液(0.36M) : 10.7gNazFe (CN) 5 NQ 2IW溶于100ml去离子水；5.2.2硫酸锌溶液(1M) : 28.8gZnS0 7筋溶于IpOml去离子水；5.2.3乙酸乙酯。5.3溶液5.3.1稀释复溶液：用去离子水(5.1)稀释厂商提供的浓缩复溶液(4.2.4) o5.3.2酶标抗体：用稀释复溶液(5.3.1)稀释厂商提供的抗体浓缩液(4.2.3) o5.3.3稀释洗涤液：用去离子水(5.1)稀释厂商提供的浓缩洗涤液(4.2.5)。5.4注意事项以上所有试剂，除特别注明，均有试剂盒厂商提供。不同品牌的试剂盒其提

5、供材料可能略有差别。6抽样依据中华人民共和国官方取样程序取适量牛乳或奶粉样品，备用。7样品制备7.1牛乳样品处理方法一7.1.1取牛乳样品l(TC3000g以上离心1 Omin,吸陰上层脂肪；7.1.2取5mL除脂乳样至离心管牝 加入150皿亚箱基铁気化钠溶液(5.2.1),出现沉淀，振荡后加入150pL硫酸锌溶液(5.2.2)混合；15P3000g以上离心lOmin,移取上层液；7.1.4用稀释复溶液(531)等体积稀释上层液；7.1.5取50匹用于分析。稀释倍数，2倍。7.2牛乳样品处理方法二7.2.1取牛乳样品WC3000g以上离心lOmim吸除上层脂肪；7,2.2加入250匹亚硝基铁気

6、化钠溶液(5.2.1)和250皿硫酸锌溶液(5.2.2)彻底混合，4 12C3000g 以上离心 10min；7.2.3转移出2.2mL上层液(相当于2ml乳样)至一个新高心管中，加入4mL乙酸乙酯(523) 振荡10min；室温(2025P) 3000g 以上离心 10min；7.2.5转移出2mL乙酸乙酯上层液体(相当于ImL乳样)，60X?氮气流下完全干燥；7.2.6用0.5mL稀释复溶液(5.3.1)溶解干燥的残留物；7.2.7取50吐用于分析。稀释倍数：0.5倍。7.3奶粉样品的处理7.3.1称取2.000.05g奶粉至离心管中，加入10mL去离子水，振荡溶解；7.3.2加ImL亚硝

7、基铁氤化钠溶液(5.2.1)和ImL硫酸锌溶液(5.2.2)彻底混合，412C3000g 以上高心10min；7.3.3转移出3.6mL上层液(相当于0.6g奶粉)至一个新离心管中，加入6mL乙酸乙酯(5.2.3) 振荡lOmin；室温(2025X? ) 3000g 以上离心 lOmin；7. 3.5转移出4mL乙酸乙酯上层液体(相当于0.4g奶粉)，60C氮气流下完全干燥；7.3.6用04mL稀释后的复溶液溶辭干燥的残留物；7.3.7取50匹用于分析。稀释倍数：1倍。DB1301/T122DB1301/T1222008117.4注童事项不同品牌的试剂盒其制样步骤可能略有差别，具体制样步骤可根

8、据试剂盒使用说明书略作调整。8检测步骤8.1测定8.1.1使用前，将所有试剂回复至室温（2（TC25X?） 8.1.2取出实验需要数量的微孔板条，标准品和样品均需做平行实验，并记录。8.1.3标准孔加入50皿氯霉素标准溶液（4.2.2）,样品孔加入50匹处理好的样品。8.1.4加入50匹酶标抗体（5.3.2）至每个微孔中，振荡混匀。8.1.5用封口膜封好，室温（20C25P）暗处孵育lh,避光放置。8.1.6洗板，用洗板机洗板或手工洗板。甩出孔中液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内 没有残余液体；加稀释洗涤液250ul （5.3.3）于微孔中，再次甩出微孔内液体，并在吸水纸上拍打, 重复操

9、作四次。8.1.7每个微孔中加入酶标二抗（4.2.6） 100pL,振蠢混匀；8.1.8用封口膜封好，室温（20P25C）暗处孵育30min,避光放置。8.1.9洗板，操作同8.1.6。8.1.10每个微孔中加入100皿底物/发色剂（4.2.7）,振荡混匀，室温（20C25C）暗处孵育 30min8.1.11每个微孔中加入50皿反应终止液（4.2.8）,振荡混匀。8.1.12酶标仪450nm处测定吸光度值，lOmin内完成读数。8.2注意事项不同品牌的试剂盒其检测步骤可能略有差别，具体检测步骤可根据试剂盒使用说明书略作调整。9结果计算以空白（浓度为0的标准溶液）吸光度值为100%计算，并且以百分比的形式折算出各