药用油脂类辅料的质量标准控制要点课件

1、油脂类辅料的质量标准控制要点上海市食品药品检验所生化药品生物制品室陈 钢2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL2油脂类辅料的质量标准控制要点一、如何制订油脂类辅料质量标准二、中国药典2010版对油脂类产品的质量控制要求三、国外药典对油脂类产品的质量控制要求四、其他质量控制要求2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL3如何制订油脂类辅料质量标准在油脂类辅料的质量标准研究过程中如何寻找切入点？应采用什么方法？要达到什么目的？标准中要订多少项目才算够？2022/9/1

2、7SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL4油脂类辅料的质量标准研究原则 总则辅料背景的了解：包括理化性质、用途、不良反应、生产工艺等；辅料质量的状况：对现有的国内外标准、药典标准进行收集、比对；分析手段的掌握：对先进分析技术的理解和掌握；多快好省：检测样品多、检测速度快、检测质量好、检测成本省。 （QuEChERS）5（1）单纯脂质是由脂肪酸和甘油形成的酯（也称三酰甘油），如大豆油，以及由长链脂肪酸和长链醇或固醇组成的酯，如蜡。1、油脂的分类（2）复合脂质除含脂肪酸和醇外，尚有其他非脂分子的成分，如磷脂（非脂成分为磷酸和含氮碱）及糖脂（非脂成分

3、是糖）。（3）衍生脂质由单纯脂质和复合脂质衍生而来或与之关系密切，如固醇类（甾类）和萜等。磷脂酰乙醇胺以环戊烷多氢菲为基本结构，并含有醇基。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL7（2）种类 脂肪酸的一条长的烃链不含双键（和三键）的为饱和脂肪酸，含一个或多个双键的为不饱和脂肪酸。只含单个双键的脂肪酸称为单不饱和脂肪酸；含两个或两个以上双键的称为多不饱和脂肪酸。不饱和脂肪酸中含一个或多个非共轭的反式双键的称为反式脂肪酸。不同脂肪酸之间的主要区别在于烃链的长度（碳原子数目）、双键数目和位置。3、油脂的生产工艺2022/9/17SH

4、ANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL8油脂类辅料的质量标准控制要点一、如何制订油脂类辅料质量标准二、中国药典2010版对油脂类产品的质量控制要求三、国外药典对油脂类产品的质量控制要求四、其他质量控制要求2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL10脂质的物理测定（2）折光率折光率是有机化合物最重要的物理常数之一，它能精确而方便地测定出来，作为液体物质纯度的标准，它比沸点更为可靠。利用折光率，可鉴定未知化合物。如果一个化合物是纯的，那么就可以根据所测得的折光率排除考虑中的其它化合物，而

5、识别出这个未知物来。另外，折光率也用于确定液体混合物的组成。这也是液体脂质需要测定折光率的原因之一。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL11脂质的物理测定（3）熔点熔点是物质的一个物理性质，即在一定压力下，纯物质的固态和液态呈平衡时的温度。物质的熔点并不是固定不变的，有两个因素对熔点影响很大。一是压强，另一个就是物质中的杂质，我们平时所说的物质的熔点，通常是指纯净的物质。天然油脂由于都是多种三酰甘油的混合物，因此没有明确的熔点，只有一个大概范围。三酰甘油的熔点与其脂肪酸的组成有关，一般随组分中不饱和脂肪酸（双键数目）和低相对

6、分子质量脂肪酸的比例增高而降低。Melting Points and Solubility in Water of Fatty Acids Solubility in WaterChain LengthMelting Point熔点与双键的关系F. A.M. P. ()16:116016:06318:01618:1-518:2-1118:37520:0-5020:42022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL15脂质的物理测定（4）脂肪酸凝点凝点是反映化合物纯度的物理常数。由于目前有更好的化学方法测定脂质中的脂肪酸比例和分布，故此测

7、定目前不常用。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL17脂质的化学测定（2）皂化值三酰甘油在碱溶液中水解，产物之一是脂肪酸的盐（如钠、钾盐），俗称皂；油脂的碱水解作用称皂化作用。皂化值系指中和并皂化1.0g供试品中游离脂肪酸和酯类所需氢氧化钾的mg数。皂化值的高低表示油脂中脂肪酸分子量的大小（即脂肪酸碳原子的多少）。皂化值愈高，说明脂肪酸分子量愈小，亲水性较强，失去油脂的特性；皂化值愈低，则脂肪酸分子量愈大或含有较多的不皂化物，油脂接近固体，难以注射和吸收，所以注射用油需规定一定的皂化值范围，使油中的脂肪酸在C16C18的范围

8、。中国药典采用的方法与国外药典基本一致。如果为了防腐，脂肪油事先充有二氧化碳的话，在称量之前，应将供试品置于浅盘中，在真空干燥器里放置24小时。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL18脂质的化学测定（3）羟值系指与1.0g物质中的羟基含量等值的氢氧化钾的毫克数，是对脂肪中羟基数目的定量。羟值的测试都是酸酐反应（酰化反应）做基础的，以被消耗的酸酐量测试出羟基含量。酰化反应在各国药典中的方式有略微差异。由于酰化反应时游离脂肪酸羧基中的羟基未参与反应，故根据定义应将酸值加上。另外，也有用乙酰值来表示油脂的羟基化程度。2022/9/

9、17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL19脂质的化学测定（4）碘值表示100g供试品在规定的条件下消耗的碘的g 数。油脂分子中的不饱和脂肪酸也和游离不饱和脂肪酸一样，能与卤素起加成反应。卤化反应中吸收卤素的量反映不饱和键的多少。USP提供了两种方法，除正文中另有规定外，采用方法一测定，中国药典采用的与方法一相同。（注意：若超过一半的溴化碘试剂被供试品消耗，减少供试品取样量，重新测定。）牦牛奶脂肪碘价与季节变化2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL21脂质的化学测定（5）过氧

10、化值系指每1000g供试品中的过氧化物量，以活性氧的毫摩尔数表示。过氧化值表示油脂和脂肪酸等被氧化程度的一种指标。用于说明样品是否已被氧化而变质。油脂氧化后生成过氧化物等，其氧化能力较强，能将碘化钾氧化成游离碘。可用硫代硫酸钠来滴定。由于油脂氧化酸败会产生一些小分子物质（如自由基），其在体内会产生不良影响，所以过氧化值太高的油不宜食用，更不用说用来制药了。（注：取样后需迅速进行测定，以防供试品被氧化。）2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL22油脂类辅料的质量标准控制要点一、如何制订油脂类辅料质量标准二、中国药典2010版对油

11、脂类产品的质量控制要求三、国外药典对油脂类产品的质量控制要求四、其他质量控制要求2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL24USP, Ph. Eur.2、不皂化物 系指油脂中能溶于有机溶剂中但不能被碱性氢氧化物皂化的物质，以及能溶于有机溶剂的皂化产物。这些物质是高级脂肪醇、甾醇和碳氢化合物等，能溶于乙醚等有机溶剂。具体测定方法参照USP。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL25USP, Ph. Eur.3、脂肪酸组成 大多数天然油脂都是简单甘油三酯和混合甘油三

12、酯的复杂混合物。但从油脂的脂肪酸组成来看，还是有一定的规律的（见表2）。可以从脂肪酸的组成和比例来区分不同的油脂。主要采用气相色谱法，具体测定方法参照USP。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL27USP, Ph. Eur.5、甲氧基苯胺值是指在每100ml溶剂和试剂混合液（按药典规定的方法配制）中溶解的1g供试品得到的溶液在1-cm的小池中测定吸光度的100倍值。油脂中不饱和甘油三酯在氧的存在下，生成过氧化物后，在适宜的条件下，可继续分解成醛和酮等物质。醛和酮类物质与甲氧基苯胺反应生成醇胺，醇胺脱水生成醛亚胺，可用紫外法测

13、定。通过测定甲氧基苯胺值可反映油中醛和酮类物质的量。具体的测定方法可参照USP。（注：尽快操作，防止暴露于光线）。经查USP（33版），制订甲氧基苯胺值的品种共有5个，均为含鱼油或-3脂肪酸（如DHA和EPA）的产品，限值从15至30不等。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL28USP, Ph. Eur.6、总氧化值（TOTOX） 是过氧化值和甲氧基苯胺值的总和，可以很好地反映油脂的氧化情况。总氧化值以下式计算：2PV + AV式中PV为过氧化值，AV为甲氧基苯胺值。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE F

14、OR FOOD AND DRUG CONTROL29USP, Ph. Eur.7、微量金属元素由于油脂来源于生物体，特别是鱼油来自海洋，重金属的污染应特别注意，故需要对微量金属元素进行测定。样品经微波消解后用原子吸收分光光度法进行测定，石墨炉原子化器用于测定镉、铜、铁、铅、镍、锌；自动氢化物发生原子化器用于测定砷和汞。具体方法可参见USP。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL30USP, Ph. Eur.8、甾醇组成 甾醇又称固醇，是类固醇的一种。甾醇类化合物广泛分布于生物界。用脂肪溶剂提取动植物组织中的脂类，其中常有多少不

15、等的、不能为碱所皂化的物质，它们均以环戊烷多氢菲为基本结构，并含有醇基，故称为甾醇类化合物。胆固醇是高等动物细胞的重要组分。它与长链脂肪酸形成的胆固醇酯是血浆脂蛋白及细胞膜的重要组分。植物细胞膜则含有其它甾醇如豆甾醇及谷甾醇。真菌和酵母则含有菌甾醇。甾醇是油脂中的一类杂质，有些成分多了对人体有害，如胆固醇等。油脂中甾醇的组成和分布是不同的，因此也可以作为鉴别。不同油脂的甾醇组成和分布图：葵花籽油的甾醇测定气相色谱图：无胆固醇（1），7-菜油甾醇（7）、7-豆甾醇（14）和7-燕麦甾醇（15）含量高。-谷甾醇图：橄榄油的甾醇测定气相色谱图：含胆固醇，不含7-菜油甾醇（7），7-豆甾醇（14）和7

16、-燕麦甾醇（15）含量低。甾醇的测定（1）甾醇组分的分离，先将样品中的不皂化物提取出来，再用薄层色谱法或液相色谱法（Ph. Eur. 7.0）分离出甾醇馏分；（2）甾醇的测定，采用气相色谱法进行。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL32甾醇的测定甾醇组分的分离2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL33图：供试品的甾醇分离液相色谱图收集从20分钟至32分钟的洗脱液橄榄油提取不皂化物后，采用Kromasil 60-5 SIL硅胶柱（2504.6mm），以异丙醇-

17、正己烷（1：99）为流动相，经高效液相色谱分离，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，采用Agilent 1260 FC-AS馏分收集器。甾醇的测定甾醇的测定收集液甲酯化后，照气相色谱法（中国药典2010年版二部附录V E）测定，采用5%苯基-95%甲基聚硅氧烷毛细管柱（如DB-5，30m0.25mm0.25m）或7%氰丙基-7%苯基-86%甲基聚硅氧烷毛细管柱（如HP-1701），起始柱温260，保持50分钟，再以每分钟5的速率升温至290，保持5分钟，载气为氦气，分流比为25：1，进样口温度为290，检测器温度为290。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR

18、 FOOD AND DRUG CONTROL34图：葵花籽油的甾醇测定气相色谱图（峰名称详见表）-谷甾醇2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL35油脂类辅料的质量标准控制要点一、如何制订油脂类辅料质量标准二、中国药典2010版对油脂类产品的质量控制要求三、国外药典对油脂类产品的质量控制要求四、其他质量控制要求2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL36其他质量控制要求1、反式脂肪酸测定 反式脂肪酸（TFA）是不饱和脂肪酸中的一种异构化的脂肪酸，双键上两个碳原子结

19、合的两个氢原子分别在碳链的两侧，其空间构象成线性，与饱和脂肪酸相似。大豆油精制/氢化油氢化工艺流程研究表明，油脂经过氢化处理、或不当的脱色脱臭工艺，温度超过250度，时间超过2小时，会产生一种异构化的有害脂肪酸： 反式脂肪酸！反式脂肪酸（TFA）概述及危害妇女2型糖尿病TFA促使大脑动脉硬化干扰婴幼儿生长发育心血管疾病饱和脂肪酸反式脂肪酸顺式脂肪酸气相色谱对顺反脂肪酸的分离研究目前，用100m的毛细管气相色谱柱对也不能对所有顺反脂肪酸进行完全有效分离。C18:1系列顺反脂肪酸本身会有一小部分重叠；其次，C18:3系列不仅反式脂肪酸异构体之间不能完全分离，而且常会与保留时间接近的其它碳原子数的脂

20、肪酸（如C20、C20:1）发生重叠。主要分离目标： 气相对顺反脂肪酸的分离（163恒温）气相对39种常见顺反脂肪酸的分离红色为反式峰反式脂肪酸主要的C18区域C18:1 transC18:1 cisC18:2 transC18:2 cisC18:3 trans银离子薄层气相色谱对顺反脂肪酸的分离研究（1）薄层板的预处理用15%的AgNO3乙腈溶液（新鲜配制）浸Merck G60 高效板20分钟，取出，在暗处挥干，于110活化1小时后，冷却，立即使用；（2）点样展开显色在小瓶中取50L已甲酯化的FAPAS氢化油，于自动点样器上点长为8cm的条带；点完样后，用展开剂己烷-乙醚（90：10）展开；

21、用0.025%二氯荧光素乙醇溶液（新制）显色，110烘干；最后用紫外观察仪在366nm灯下检视；（3）提取将板上有荧光吸收的各部分分别挖下，用5mL乙醚提取4次（振荡，离心，取上清），合并，蒸干，用100L正庚烷复溶，用于气相分析银离子薄层气相色谱对顺反脂肪酸的分离研究薄层板显色结果 0 5 4 3 2 1 0 点样点1 饱和脂肪酸甲酯2 单不饱和反式脂肪酸甲酯3 单不饱和顺式脂肪酸甲酯4 双不饱和顺、反式脂肪酸甲酯5 多不饱和顺式脂肪酸甲酯及其它银离子薄层气相质谱联用对顺反脂肪酸的分离研究气相色谱条件：初始柱温163恒温87min，以30/min升温至240，维持13min；载气 He；分流

22、比 501；进样口温度 250；进样量 1l。质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，质量扫描范围29450 u，四极杆温度150 ，离子源温度200 ，电子倍增器电压1800 V，GCMS接口温度250。 成份条带1（饱和）2（单反）3（单顺）4（一顺一反+双顺）5（三顺）脂肪酸甲酯C12C14C16C17C18C20C22C24C18:1(t)系列：C18:1(t6)、C18:1(t9)C18:1(t11)等C16:1(c)C18:1(c)系列：C18:1(c6)、C18:1(c9)、C18:1(c11)等C20:1C22:1C24:1C18:2(ct/tc)C18:2(cc)C22:2C

23、18:3(ccc)气质对各条带具体脂肪酸成份分析反式多烯酸单烯酸一个反式双键反式单烯酸双烯酸一个或两个反式双键反式双烯酸多烯酸一个或多个反式双键双键数量增加双键位置异构trans-C12:1trans-C14:1trans-C16:1trans-C18:1trans-C18:2trans-C20:2trans-C22:2trans-C18:3trans-C20:4trans-C22:5小结脂肪酸系列C6C24由于碳原子数及不饱和键的个数、位置异构，数目众多氢化油中以反式C18:1为主，并以其中C18:1(t9)，即反式油酸为主脂肪乳剂中的反式脂肪酸主要是由于使用了处理不当的精制大豆油，含有少量

24、的C18:2或C18:3系列单反式和双反式的脂肪酸意义国际上规定作为食品配料的油脂中反式脂肪酸的含量不能过2%，并建议反式脂肪酸的摄入量不超过2g/day。由此可见，我们也应该参照其限定，对药用辅料中存在的反式脂肪酸含量加以控制，使其不危害人体健康2010版药典辅料品种大豆油、氢化油中有脂肪酸组成检查，但未涉及反式脂肪酸，此前也尚未有人作药品中反式脂肪酸的相关研究，故有助于相关药品生产企业对此问题引起一定重视48其他质量控制要求2、溶血磷脂质 由甘油磷脂经蛇毒和胰脏的磷脂酶A的作用，除去了1或2位脂肪酸的一酰基甘油磷脂质。 2位上结合了脂肪酸的溶血磷脂在碱性中很不稳定，脂肪酸容易转移到1位上去

25、。天然油脂中仅少量存在。由于该物质对红血细胞具有强烈的溶血活性，所以称为溶血磷脂质。一般供注射剂用的辅料（如卵磷脂）均应控制溶血磷脂质，限度为：溶血磷脂酰胆碱不得过3.5%，溶血磷脂酰乙醇胺不得过0.5%。含此类辅料的注射液每1ml中溶血磷脂酰胆碱不得过1.4mg测定方法双向TLC采用薄层色谱法，吸取供试品溶液50l，点于硅胶G薄层板 ，先以三氯甲烷-甲醇-水-浓氨溶液（70：30：3：2）为展开剂，展开约18厘米后，取出，在氮气流下吹2小时直到氨气味消失，再以三氯甲烷-甲醇-水（65：35：5）为展开剂，将薄层板转动90进行双向展开，约18厘米后，取出，在氮气流下晾干，于碘蒸汽中熏蒸直到斑点

26、显现。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL49图：批号107335双向展开薄层色谱图测定方法液相色谱法高效液相色谱法，采用蒸发光散射检测器，以lgY=algX+b（Y为相应值，X为样品浓度，a、b、c为回归常数）作为数据转换模型。经试验，溶血磷脂酰胆碱在19.86198.6g/ml的浓度范围内，呈良好线性，r=0.9991（n=4），连续进样6次峰面积的RSD%为1.3%，平均加样回收率为101.7%，最低检出限为0.25g。SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL50图. 供

27、试品溶液中含溶血磷脂色谱图2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL51其他质量控制要求3、黄曲霉素 黄曲霉毒素（Aflatoxins）是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，当粮食和油料作物未能及时晒干及储藏不当时往往容易被黄曲霉或寄生曲霉污染而产生此类毒素。黄曲霉毒素主要有B1、B2、G1和G2 以及另外两种代谢产物M1和M2。食品中所污染的主要是黄曲霉毒素B1，其毒性目前一般认为有三种临床特征：急性中毒、慢性中毒和致癌性。黄曲霉毒素B1限值1995年世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15g/kg。中国对食用油（花生油、菜籽

28、油、大豆油、葵花油、茶油、麻油和玉米胚芽油等）中黄曲霉毒素的最高允许含量10g/kg（黄曲霉毒素B1）。2022/9/17SHANGHAI INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL52测定方法薄膜层析法和液相色谱法是目前国内使用最广的检测黄曲霉毒素方法。而利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法也是最常用的黄曲霉毒素检测方法。这类方法通常包括放射免疫分析方法（Radioimmunoassay，RIA），酶联免疫法（Enzyme-linked of Immunosorbent Assay，ELISA）和免疫层析法（Immunoaflinity Column Assay，ICA）。它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定。其中ICA法能达到既定量准确又快速简便的要求。进行黄曲霉毒素总量 （B1B2G1G2） 的测定检测限可达到1ug/kg，达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg。另外，以金标试纸为代表的检测方法，由于快速、简便、特异、