三聚氰胺的应用现状及检测方法探讨

1、目录摘 要1Abstract1 HYPERLINK l “_TOC_250007“ 前言1 HYPERLINK l “_TOC_250006“ 三聚氰胺根本概念2 HYPERLINK l “_TOC_250005“ 三聚氰胺用途与消费3 HYPERLINK l “_TOC_250004“ 用三聚氰胺制假蛋白缘由及原理5 HYPERLINK l “_TOC_250003“ 食物中三聚氰胺的检测方法6 HYPERLINK l “_TOC_250002“ 造假产品的危害及纯蛋白检测方法13 HYPERLINK l “_TOC_250001“ 6 结语16 HYPERLINK l “_TOC_2500

2、00“ 参考文献16 1食品中三聚氰胺的检测方法探讨摘 要：三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，最主要是作为生产三聚氰胺甲醛树脂MF的原料。三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。三聚氰胺因其高含氮量被一些造假者利用添加在食品中,对人体安康造成危害。本文对三聚氰胺进展概括性介绍，并对国内外食品中三聚氰胺的检测方法进展综述和概括。关键词：食品；三聚氰胺；检测方法Abstract:Melamine is one of the nitrogen-containing heterocyclic triazinecompounds. Its main purpose is used as ra

3、w material for production of melamine formaldehyde resin (MF). It can be also used as flame retardant, superplasticizer and formaldehyde cleaner,etc. However,due to there are loopholes in the Kjeldahl method,melamine is added into foods to increase the nitrogen content by some counterfeiters. Theref

4、ore,this thesis descripted melamine generally,and arranged some detections of melamine in foods.Keywords: Food ; Melamine ; Detection前言三聚氰胺Melamine化学式：C H N ，俗称密胺、蛋白精，IUPAC 命名为“1,3,5-3 6 6三嗪-2,4,6-三氨基”，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水3.1g/L 常温，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类、对身体有害，不行用于食品加

5、工或食品添加物。然而，近日青海、甘肃、吉林等省再现三聚氰胺超标奶粉，超标 500 余倍。很可能是对尚未完全销毁的“三鹿问题奶粉”进展加工、销售。2022 年月，由于我国经济的快速进展，乳制品市场转变成一个很大市场， 且因巨大消费群体，更可划分为高、中、低三个消费层次。为了调整大陆市场供给与需求，除了从海外的日本、西兰等国进口将近30 万吨乳制品以应付高中消费层次外，中国大陆绝大多数消费群体，包括婴幼儿，还是以我国自主生产的产品为主。在此因素下，知名三鹿牌顺势推出以一袋18 元人民币约 3 美金，不到进口奶粉价格一半价格婴幼儿配方奶粉以应付大规模的奶业市场，之后并成为大陆重要且知名婴幼儿奶粉品牌

6、，多年蝉联该中国大陆自制乳品市场的首位。 不过由于需求甚殷，价格竞争等因素，公司与政府均漠视生产流程及质量控管， 最终爆发此弊端漏洞。基于当前的社会背景和生活环境，市场上有可能仍旧存在着以次充好的的不合格三聚氰胺超标食品。食品安全是国家与社会的根本安全，因此关注和严格监视食品安全格外重要。本文首先概述三聚氰胺的根本性质及用途，然后分析造假缘由，接着主要从化学的角度较具体来阐述各种常用的检测方法和反响机理，最终总结全文，指出造假产品的危害和更全面的蛋白质检测方法，并对此做出反思与总结。三聚氰胺根本概念三聚氰胺根本性质三聚氰胺英文名：Melamine，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有

7、机化工原料。简称三胺，俗称蜜胺、蛋白精，又叫 2 ,4 ,6- 三氨基-1,3,5- 三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6-三氨基脲、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺。化学式分子式 C H N3 6 6相对分子质量 126.15CAS 登录号 108-78-1EINECS 登录号 203-615-4三聚氰胺性状为纯白色单斜棱晶体，不行燃，无味，低毒，密度1.573g/cm3 (16)。常压熔点 354，急剧加热则分解；快速加热升华，升华温度 300。在水中溶解度随温度上升而增大,在 20时，约为 3.3 g/L，即微溶于冷水，溶于热水， 极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇

8、、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。三聚氰胺呈弱碱性pH 值=8，与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性状况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中pH 值 5.56.5与羟甲基的衍生物进展缩聚反响而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最终生成三聚氰酸1。三聚氰胺合成工艺三聚氰胺最早被李比希于 1834 年合成，早期合成使用双氰胺法：由电石CaC 2制备氰胺化钙CaCN ，氰胺化钙水解后二聚生成双氰胺dicyandiamide，再加热2分解制备三聚氰胺。目前由于电石的高本钱，双氰胺

9、法已被淘汰。与该法相比，尿素法本钱低，目前较多承受。尿素以氨气为载体，硅胶为催化剂，在380-400温度下沸腾反响，先分解生成氰酸，并进一步缩合生成三聚氰胺。反响式为：6CO(NH ) = C H N + 6NH + 3CO 2 23 6 632生成的三聚胺气体经冷却捕集后得粗品，然后经溶解，除去杂质，重结晶得成品。尿素法生产三聚氰胺每吨产品消耗尿素约 3800kg、液氨 500kg。依据反响条件不同，三聚氰胺合成工艺又可分为高压法(7-10MPa，370-450， 液相)、低压法(0.5-1MPa，380-440，液相)和常压法(0.3MPa，390，气相)三类。国外三聚氰胺生产工艺大多以技

10、术开发公司命名， 如德国巴斯夫(BASF Process)、奥地利林茨化学法(Chemical Linz Process)、鲁奇法(Lurgi Process)、美国联合信号化学公司化学法 (Allied Signal Chemical) 、日本日产法 (Nissan Process)、荷兰斯塔米卡邦法(即 DSM 法)等。这些生产工艺按合成压力不同，可根本划分为高压法、低压法和常压法三种工艺。目前世界上技术先进、竞争力较强的主要有日本日产 Nissan 法和意大利 Allied-Eurotechnica 的高压法，荷兰 DSM 低压法和德国 BASF 的常压法2。中国三聚氰胺生产企业多承受半

11、干式常压法工艺，该方法是以尿素为原料0.1MPa 以下，390左右时，以硅胶做催化剂合成三聚氰胺，并使三聚氰胺在凝华器中结晶，粗品经溶解、过滤、结晶后制成成品。三聚氰胺用途与消费三聚氰胺主要用途三聚氰胺是一种用途广泛的根本有机化工中间产品，最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂MF的原料。三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。该树脂硬度比脲醛树脂高，不易燃，耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀、有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度，广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。其主要用途有以下几方面：装饰面板：三聚氰胺板，全称是三聚氰胺浸渍胶膜纸饰面人造板，是将带有不

12、同颜色或纹理的纸放入三聚氰胺树脂胶粘剂中浸泡，然后枯燥到肯定固化程度， 将其铺装在刨花板、中密度纤维板或硬质纤维板外表，经热压而成的装饰板。生产时就与基材严密粘合在一起的。由于它与基材(一般是防潮板)结合严密，根本上做到了无缝，所以，环保性高。可制成防火、抗震、耐热的层压板，色泽明媚、结实耐热的装饰板，作飞机、船舶和家具的贴面板及防火、抗震、耐热的房屋装饰材料。目前， 中高档的家具都是用它来制作。而且，三聚氰氨面板有各种不同的仿木纹款式，性能和美观都高于其它粘贴面板，所以，不需要再贴面板了。三聚氰胺板是现在家装用材的一个主流，它彻底打散了原来木材的组织，破坏了各项异性湿胀干缩的特性，尺寸极稳定

13、，抑制了实木因单体收缩，简洁变形、开裂的缺乏，具有较好的尺寸稳定性， 而且防虫，不助燃，不变形、不翘曲、耐腐蚀、简洁维护清洗等特点。涂料：用丁醇、甲醇醚化后，作为高级热固性涂料、固体粉末涂料的胶联剂、可制作金属涂料和车辆、电器用高档氨基树脂装饰漆。模塑粉：经混炼、造粒等工序可制成蜜胺塑料，无毒、抗污，潮湿时仍能保持良好的电气性能，可制成洁白、耐摔打的日用器皿、卫生洁具和仿瓷餐具，电器设备等高级绝缘材料。纸张：用乙醚醚化后可用作纸张处理剂，生产抗皱、抗缩、不腐烂的钞票和军用地图等高级纸。三聚氰胺甲醛树酯与其他原料混配，还可以生产出织物整理剂、皮革鞣润剂、上光剂和抗水剂、橡胶粘合剂、助燃剂、高效水

14、泥减水剂、钢材淡化剂等。农业：在农业中三聚氰胺是用来加在化肥中的3。三聚氰胺消费市场中国三聚氰胺的消费市场主要集中于木材加工、装饰板、涂料、模塑料、纸张、纺织、皮革等行业，其中木材加工业占国内总消费量的 56%。另外，中国三聚氰胺约有 50%用于出口，主要出口到日本、韩国、加坡、西班牙、德国、印尼、意大利等国家。国内需求量较大的市场是广东、广西、苏南地区，年需求量在 1.25 万吨左右。在两广地区，山东海化魁星股份、四川川化集团公司、合肥四方集团公司三家的市场份额约占整个市场用量的 65%。苏南市场用户多为个体私营企业，需求量虽大，但竞争很剧烈，经营风险较大，其次是上海市场，年需求量在1.0

15、万吨以上，主要被南京金星、石化实业、四川川化集团公司、合肥四方集团公司占有。华北市场年需求量约 1.20 万吨，但该地区生产厂家众多，价格混乱，竞争无序，因此一些厂家限制了对该地区的供货。东北、浙闽、西北、湘赣等地的市场需求量不断增加，价格也比较稳定，西部地区随着大开发的进展，今后的用量也将不断的增加，重点在建筑、油漆业、涂料等方面，但由于该地区整体经济水平较差，需求不旺。全球三聚氰胺消费总量以高于 5%的幅度增长，但各地区分布不均衡。2022 年， 全球三聚氰胺需求量约 110 万吨，主要集中在欧美和日本等兴旺国家和地区，约占全球总消费量的 60%70%，主要用于涂料、装饰纸或层压板、纺织或

16、造纸、模塑料以及胶粘剂等行业。估量 2022 年全球消费量约为 120 万吨，比 2022 年增长约 8%。近几年中国三聚氰胺消费快速增长，目前保持 10%20%的增长幅度。随着中国经济总体进展水平的不断提高，人们对高档建筑装饰材料的需求不断增加。据中国木材流通协会地板委员会的资料显示，今年中国强化木地板市场消费量同比增长约30%，而国家自 2022 年 7 月 1 日正式实施建筑材料把握游离甲醛含量的强制性标准， 也极大地刺激了三聚氰胺在强化木地板生产方面的消费。但其他方面的需求增长相对缓慢。估量，将来几年中国对三聚氰胺消费增长幅度仍会保持在 10%20%4。用三聚氰胺制假蛋白缘由及原理添加

17、缘由奶粉有毒是由于其中含三聚氰胺，可能是在奶粉中直接参加的，也可能是在原料奶中参加的。牛奶和奶粉添加三聚氰胺，主要是由于它能冒充蛋白质。食品都是要按规定检测蛋白质含量的。要是蛋白质不够多，说明牛奶兑水兑得太多，说明奶粉中有太多别的东西的粉。但是，蛋白质太不简洁检测，生化学家们就想出个偷懒的方法：由于蛋白质是含氮的，所以只要测出食品中的含氮量，就可以推算出其中的蛋白质含量。因此添加过三聚氰胺的奶粉就很难检测出其蛋白质不合格了，这就是三聚氰胺的假蛋白。假蛋白原理由于中国承受估测食品和饲料工业蛋白质含量方法的缺陷，三聚氰胺也常被不法商人掺杂进食品或饲料中，以提升食品或饲料检测中的蛋白质含量指标，因此

18、三聚氰胺也被作假的人称为“蛋白精”。蛋白质主要由氨基酸组成。蛋白质平均含氮量为 16左右，而三聚氰胺的含氮量为 66左右。常用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过测出含氮量乘以 6.25 来估算蛋白质含量，因此，添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量虚高，从而使劣质食品和饲料在检验机构只做粗蛋白质简易测试时蒙混过关。有人估算在植物蛋白粉和饲料中使测试蛋白质含量增加一个百分点，用三聚氰胺的花费只有真实蛋白原料的 1/5。三聚氰胺作为一种白色结晶粉末，没有什么气味和味道，所以掺杂后不易被觉察5。奶粉大事：各个品牌奶粉中蛋白质含量为 15-20%晚上在超市看到包装上还有标示为 10-20%的，蛋白质

19、中含氮量平均为 16%。某合格奶粉蛋白质含量为 18%计算，含氮量为 2.88%。而三聚氰胺含氮量为 66.6%，是鲜牛奶的 151 倍，是奶粉的 23 倍。每 100g 牛奶中添加 0.1 克三聚氰胺，理论上就能提高 0.625%蛋白质。微溶系指 1g(ml)溶质能在 100ml1000ml 溶剂中溶解，三聚氰胺在水中微溶， 在牛奶这种水包油型的乳液中溶解度未找到试验数据，应当比水的溶解度要好一些， 待验证。检测方案：在现有奶粉检测的国家标准中，主要进展蛋白质、脂肪、细菌等检测。三聚氰胺属于化工原料，是不允许添加到食品中的，所以现有标准不会包含相应内容。亦即三聚氰胺检测目前并无国家标准。因此

20、，德国莱茵 TV 集团参照美国食品化学品法典(FCC)HPLC-UV 定量方法，同时还可承受 HPLC/MS 检测方法试验室方法对婴儿食品，宠物食品，饲料及其原料(包括淀粉，大米蛋白, 玉米蛋白, 谷朊粉、粮油等)开展的检测业务，检测结果具备权威性。三鹿奶粉假蛋白的另一种解释为，企业参加的是尿素，而原奶直接变成奶粉是在高温下进展的，高温使得尿素发生脱水反响，生成三聚氰胺，因此最终产出的奶粉中还有三聚氰胺。其他可能被添加的商品鸡蛋可能是饲料厂家为使饲料蛋白质含量检测起来更多，卖得更多而添进饲料里，鸡吃了这种饲料，下的蛋也就含有三聚氰胺饲料 (以家禽饲料为主)食物中三聚氰胺的检测方法家庭简易检测法

21、面对当前社会担忧全的食品品质形势，对食品进展安全检测变得相当必要。然而专业检测方法与设备并非一般人可以完全把握，于此举出一种家庭用简易检测方法， 仅供参考。方法步骤：按比寻常浓的重量用热水冲奶粉，充分搅拌到不见固块，然后放入冰箱，待牛奶静置降温。预备黑布一块和空杯一个。把黑布蒙在空杯口上作为过滤器。将冷却的牛奶倒在黑布上过滤。假设有白色固体滤出，则用清水冲洗几次，排解其它可溶物。假设冲洗后觉察有白色晶体，可以将晶体放入清水中，该晶体假设沉入水底。那就很可能是三聚氰胺，这种奶粉不能用了。这种方法可能无法觉察微量的三聚氰胺，但微量的三聚氰胺使孩子得结石的可能性也低得多，至少可以把把关6。化学检测法

22、常用的化学检测方法有： GC-MS 法测定动物食品中的三聚氰胺； Spectra-Quad 实现三聚氰胺含量在线检测；超高效液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺；反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量；高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺；高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量；高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量；固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺；液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氰胺；液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留。仪器与条件Agilent1100 高效液相色谱仪(美国，Agilen

23、t 公司);二极管阵列检测器(DAD)， 检测波长 240nm，柱温：40。AgelaVenusilTMASBC18(4.6250mm);缓冲液：10mM 柠檬酸,10mM 庚烷磺酸钠; 流淌相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。AgelaVenusilTMASBC8(4.6250mm);流淌相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液： 10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0;流速：1.0mL/min。离子交换固相萃取柱 AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰尔科技)。试剂与样品宠物饲料样品(农业部饲料供给中心供给)；甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技供给

24、；氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司；三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma 公司)；甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。试验方法样品前处理方法(1)标准样品配制：取 50mg 三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50mL 得到 1000ppm 的标准溶液， 使用时，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。提取：称取饲料样品 5g，参加 50mL 0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，参加 2mL2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取局部溶液转移至 10mL 离心管中，8000rpm/min 离心 10min，取上清液 3mL 过混合型阳离子交换小柱(PCX)。净化(P

25、CX 小柱，60mg/3mL)：活化及平衡：3mL 甲醇，3mL 水b)上样：参加提取液 3mL淋洗：3mL 水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL 氨水+95mL 甲醇)。e)浓缩：50，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2mL，HPLC 分析或衍生后 GC/MS分析。HPLC 检测方法三聚氰胺 HPLC-UV 检测方法:三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相 C18 柱上保存粉差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保存与分裂，依照美国食物药品监视治理局 FDA的三聚氰胺检测方法和中国中国农业部公布的三聚氰胺检测方法，承

26、受艾杰尔(Agela) ASB 系列亲水色谱柱，可以得到良好的分裂效果，剖析色谱图如图所示。图：Venusil ASB 色谱柱分裂三聚氰胺的谱图色谱柱：Venusil ASB C8 4.6250mm；尺度：FDA 方法；流淌相：缓冲液： 乙腈=85：15；缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0；流速：1.0mL/min； 柱温：40；波长：240nm色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6250mm；尺度：中国农业部颁尺度方法；缓冲液：10mM 柠檬酸, 10mM 庚烷磺酸钠； 流淌相：缓冲溶液:乙腈=85:15；流速： 1.0mL/min;柱温：40；波长

27、：240nm由上图可以看出：用 PCX 柱净化样品，可以得到满足的回收率，此方法处理样品， 比 FDA 公布的前处理方法更加准确、牢靠。三聚氰胺 LC-MS 检测方法由于 FDA 公布的 HPLC-UV 方法中，流淌相添加了离子对试剂，因此限制了方法的应用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的 C18 柱上保存粉差，不能得到较好的分裂定量。基于此问题，艾杰尔科技公司自主开垦了的方法，承受艾杰尔(Agela) ASB 系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保存与分裂。因此方法中流淌相不含9离子对试剂，可以用于质谱质谱检测。与 FDA 2022 年 4 月公布的Updated FCC

28、Developmental Melamine Quantitation (HPLC-UV)相比较，该方法大大降低了最低检测限MSD：0.5ppm；UV：2ppm，提高了检测灵敏度。以该方法分别在 ASB-C8 4.6250mm ASB-C18 4.6250mm，得到的谱图如图 所示。图：LC-MS 方法检测三聚氰胺的谱图缓冲液：10mM 的 NH Ac；流淌相：Buffer:：ACN=95：5；流速：1.0mL/min；进4样量：样品先用 70%AcN 溶解成约 1mg/mL，用ACN 稀释成 0.1mg/mL，进 10L；柱温： 40；波长：240nm结果与争辩阳离子交换柱(PCX)三聚氰胺

29、呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般应选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯3苯(PEP)吸附剂上，具有阳离子交换和反相吸附两种机理，并具有以下优点：可通过两种不同溶液的洗涤(水/肯定 pH 值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度。批次重复性好。回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。(2)LC-MS 方法优点：检测过程简便：无须添加离子对试剂，三聚氰胺就可得到良好的保存与分别， 避开了配制离子对流淌相的简单过程。提高了检测的灵敏度：无离子对试剂，可以用于质谱检测器，大大降低了最低10 1

30、3检测限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。降低了检测本钱：不用离子对试剂，就不再需要买价格较贵的离子对试剂了， 从而降低了检测本钱。延长了色谱柱的使用寿命：避开了使用离子对试剂削减色谱柱寿命的影响。e)该方法所使用的色谱柱具有通用性：无论是用 FDA 方法、中国农业部部颁标准方法和本公司开发的 LC-MS 方法，使用艾杰尔(Agela)ASB 系列亲水色谱柱均能得到一个很好的检测结果，从而给客户供给了多种选择空间7。国家食品质量监视检测中心有关人士说，在现有的国家标准奶粉检测中，主要进展蛋白质、脂肪、细菌等检测。三聚氰胺属于化工原料，是不允许添加到食品中的， 所以现有标准不会包含相应内

31、容。也就是说，三聚氰胺不属于常规检测工程，正常状况下，很少有人会想到去检测它。酶标仪检测法4.2 中的那些色谱方法格外准确，但对于设备和操纵而言，预备及运行的本钱都格外高。因此迫切需要一个简洁的高通量筛选方法，以公正的本钱准确检测牛奶中三聚氰胺的残留量。经典的 ELISA酶联免疫吸附测定测量可以作为一个抱负的解决方案。这种方法可以在微孔板中进展，因此样品数目较多时可以同时进展，仪器本钱也不高。目前已经开发了免疫测定试剂盒，可以高效、简便、灵敏地检测乳制品、动物饲料以及宠物食品的原料中的三聚氰胺污染物。以下是关于如何使用简便的 ELISA，高灵敏地筛选牛奶样品中的三聚氰胺。这些检测需要具备足够的

32、灵敏度，检出 10g 以下的三聚氰胺，这是全世界的监管机构对非婴儿类食品设定的界限。检测原理本争辩中，使用了两种来自不同生产商、但是根本原理一样的三聚氰胺 ELISA 商品试剂盒。未知样品以及辣根过氧化物酶HRP标记的三聚氰胺均置于三聚氰胺抗体包被的微孔板孔中。 HRP 标记的三聚氰胺与未知样品中的三聚氰胺竞争结合抗体。结合率相当于 HRP 标记物与游离三聚氰胺的浓度比。因此，与抗体结合的 HRP 标记物的量与样品中游离三聚氰胺的数目反向相关。结合阶段之后，使用微孔板清洗机往除未结合的物质，加进 HRP 显色底物。测定的 HRP 酶活与 HRP 标记的三聚氰胺的数目成正比，并且与未知样品中三聚

33、氰胺的浓度有关。规定的孵育时间之后中止反响，测定形成的有色染料的量。假设样品中不存在三聚氰胺，通过形成的有色染料的数目及较高吸取值可以得知酶活水平较高。未标记的游离三聚氰胺的量增加，则活力水平和吸取值降低。因此依据校准曲线就可以直接测定三聚氰胺的浓度。样品制备三个不同的牛奶样品自然的全脂牛奶、脱脂牛奶以及自然奶粉制成的人造奶加进纯的三聚氰胺。这三种不同的乳制品与三聚氰胺储藏液浓度为 2mg/mL 的蒸馏水溶液混合制成加标样品。三种牛奶均加进 20 及 100g/L 的三聚氰胺，全脂和脱脂牛奶样品另外再加进浓度为 550 及 1000g/L 的三聚氰胺。对于第一种检测试剂盒，加标牛奶样品按试剂盒

34、操纵方法进展制备：在干净试管中加进大约 1mL 加标牛奶样品；样品在 1500g、10下离心 10 分钟；取脂肪层下局部 200L 转进干净试管中；并且牛奶乳清中加进 800L 检测稀释液，认真混合稀释样品。对于其次种试剂盒，依据生产商直接供给的信息，对样品的制备方法稍加调整， 以进步检测灵敏度。假设依据原有的说明制备牛奶样品，会觉察三聚氰胺检测灵敏度低于第一种方法，由于依据原有的说明检测样品被稀释过量：干净试管中加进大约 1mL 加标牛奶；样品在 1,500g、10 下离心 10 分钟，分成 3 层；取中层 250L，转进干净试管中；并且取出液体以 1:3 的比例加进 10%的甲醇/PBS

35、溶液20mM。两种 ELISA 试剂盒的使用都参照生产商的说明。抗体包被的微孔中加进三聚氰胺标准品或加标样的加进量为 100 或 150L取决于试剂盒。随后每一个微孔中加进50L HRP三聚氰胺标记物，混匀微孔板并在室温孵育 30 分钟。蒸馏水冲洗往除未结合的样品。300L 蒸馏水重复冲洗 4 次。100L HRP底物分装进每一个微孔中，微孔板在室温下再次孵育 20 或 30 分钟取决于试剂盒。加进 100L 终止液终止反响，使用六种不同的酶标仪在 450nm 测定吸取值。制作校准曲线，用于确定未知浓度。该曲线可以依据吸取值或是正确值进展计算，空缺比照的吸取值被设定为100%。校准曲线及检验灵

36、敏度利用第一种试剂盒制作的三聚氰胺校准曲线，使用了六种不同型号的酶标仪进展测定。计算其次种试剂盒的校准曲线时，只使用了两种酶标仪。以前的数据显示检测仪对结果没有影响。该方法的检测限LOD，是使用标准 IUPAC 3*SD 方法，依据校准数据以及空缺比照样品的数据进展计算。这些方法所需的丈量范围，与全部酶标仪具有良好正确度的波长范围全都。这些方法的检测限在很大程度上取决于测光读数仪的正确度和准确度。因此，LOD 值之间仅存在微小的不具备明显性的差异。对于两种试剂盒，低于 10g/L 的三聚氰胺浓度能够轻易检出。因此，ELISA 方法检测三聚氰胺的正确度与 LC/MS/MS 相当。三聚氰胺的测定三

37、种不同的牛奶加进纯的三聚氰胺，用两种试剂盒进展分析。承受一系列不同的光度计进展丈量。数据说明，两种试剂盒测定的酶活格外接近，回收率差异小于 10%。此外，两种试剂盒都存在一个一样的趋势，即三聚氰胺高浓度样品的浓度丈量值稍偏低；不过， 这对这些方法的使用不会产生影响，由于全部样品还会作为筛选检测的高浓度阳性样品进展测定。因此，结果明确说明，ELISA 检测适适用于筛选，包括未知牛奶样品中三聚氰胺的检测。依据前述结果，两种测试都能用于正确测定乳制品中三聚氰胺的残留量。测试的灵敏度与质谱分析的灵敏度相当。不过，与色谱方法相比，ELISAs 具有本钱方面的上风。这种简便、高通量的筛选方法能够以较低的仪

38、器本钱、适中的运行价格，对上千个样品进展大规模的筛选。固然这些方法对牛奶样品中高浓度三聚氰胺的测定值稍低，但是其灵敏度到达的水平照旧适合对三聚氰胺进展筛选，作出有/无的判定。当这些方法用于筛选时，阳性样品随后仍旧需要使用 LC/MS/MS 或 GC/MS/MS 方法确定三聚氰胺的准确含量。这种快速总的检测时间：大约 1 小时并且具备本钱效益的方法可以检测牛奶中三聚氰胺的残留量，从而对乳制品进展高效的筛选，这确保了任何污染物都能被快速、简便地觉察8。造假产品的危害及纯蛋白检测方法三聚氰胺毒性危害目前三聚氰胺被认为毒性稍微，大鼠口服的半数致死量大于 3 克/公斤体重。据1945 年的一个试验报道：

39、将大剂量的三聚氰胺饲喂给大鼠、兔和狗后没有观看到明显的中毒现象。动物长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。1994 年国际化学品安全规划署和欧洲联盟委员会合编的国际化学品安全手册第三卷和国际化学品安全卡片也只说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。然而，2022 年美国宠物食品污染大事的初步调查结果认为：掺杂了6.6%三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的缘由，为上述毒性稍微的结论画上了问号。但为安全计，一般承受三聚氰胺制造的食具都会标明“不行放进微波炉使用”。国家卫生部于 2022 年 9 月 12 日公布了“与食用

40、受污染三鹿牌婴幼儿配方奶粉相关的婴幼儿泌尿系统结石诊疗方案”，有关方面可以参照。方案中指出结石绝大局部累及双侧集合系统及双侧输尿管，这与成人泌尿系统结石临床表现有所不同，多发性结石影响肾功能的概率更高。由于患儿多不具备病症主诉力量，家长需要加强对相关儿童的观看，依靠腹部 B 超和或CT 检查，可以帮助早期确定诊断。在治疗方面，目前没有针对三聚氰胺毒性作用的特效解毒剂，临床上主要依靠对症支持治疗，必要时可以考虑外科手术干预，解除患儿肾功能长期损害的风险。早期诊断、早期治疗，是使患儿早日康复的关键。三聚氰胺进入人体后，发生取代反响(水解)，生成三聚氰酸，三聚氰酸和三聚氰胺形成大的网状构造，造成结石

41、。美国食品药品治理局(FDA)食品安全高官史蒂芬桑德洛夫表示，争辩觉察，在食品中只有同时含有三聚氰胺和三聚氰酸这两种化学成分时才对婴儿安康构成威逼。这看来虽然三聚氰胺和三聚氰酸共同作用下才会导致肾结石，但是三聚氰胺在胃的强酸性环境中会有局部水解成为三聚氰酸，因此只要含有了三聚氰胺就相当于含有了三聚氰酸，其危害的本身仍源于三聚氰胺9。人体对其耐受标准三聚氰胺是一种低毒的化工原料。动物试验结果说明，在动物体内陈代谢很快而且不会存留，主要影响泌尿系统。三聚氰胺量剂和临床疾病之间存在明显的量效关系。三聚氰胺在婴儿体内最大耐受量为每公斤奶粉 15 毫克。专家对受污染婴幼儿配方奶粉进展的风险评估显示，以体

42、重 7 公斤的婴儿为例，假设每日摄入奶粉 150 克，其安全预值即最大耐受量为 15 毫克/公斤奶粉。依据美国食物及药物治理局的标准，三聚氰胺每日可容忍摄入量为每日 0.63 毫克/公斤体重10。相关致病案例2022 年，美国爆发宠物食品受污染大事。事后调查说明：掺杂了6.6%三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的缘由。2022 年深圳检验检疫局从台湾进口的 3 批“爱族牌”欣赏鱼饲料检出三聚氰胺， 且三聚氰胺含量较高，分别为 0.35 g/kg 、0.47g/kg 、0.51g/kg。这 3 批鱼饲料共846 千克。据美国食品药品治理局(FDA)官方消息，美国 FDA 首次在美国国内生产的

43、饲料中觉察含有三聚氰胺，有关企业已经开头自动召回相关产品。含有三聚氰胺的饲料添加剂来自俄亥俄州托莱多市 Tembec BTLSR 公司和科罗拉多州约翰斯敦市 Uniscope 公司。2022 年 9 月，中国爆发三鹿婴幼儿奶粉受污染大事，导致食用了受污染奶粉的婴幼儿产生肾结石病症，其缘由也是奶粉中含有三聚氰胺。国家质检总局近日紧急在全国开展了婴幼儿奶粉三聚氰胺含量专项检查。此次专项检查对其余 109 家企业进展了排查，共检验了这些企业的 491 批次产品。阶段性检查结果显示，有22 家婴幼儿奶粉生产企业的69 批次产品检出了含量不同的三聚氰胺。山西省阳泉市郊区检察院日前批准逮捕 7 名生产销售有毒有害食品三聚氰胺含量严峻超标奶粉案犯罪嫌疑人。 经检察机关查证:2022 年 12 月，阳泉市金福来乳业利用鲜奶和顶账回来的过期奶粉加工成 26 吨奶粉，在未检测的状况下将该奶粉销往湖南、河北等地，该奶粉三聚氰胺含量严峻超标，该案涉案区域广，社会影响极大。阳泉市郊区公安分局提请批准逮捕该公司法定代表人兼总经理王志刚等 7名涉案犯罪嫌疑人后，阳泉市郊区检察院集中办案力气，在 4 日之内