残留溶剂方法学验证方案

1、残留溶剂方法学验证方案重庆麦克福新制药VP-01-06-00-041第2页共24页阿莫西林残留溶剂分析方法验证方案文件编号：VP-01-06-00-041方案起草部门 签名 日期质量管理部方案审核部门 签名 日期质量管理部质量管理部方案批准质量受权人签名批准日期重庆麦克福新制药VP-01-06-00-041第4页共24页彭雪组员：负责审核验证方案及实施梅QA过程的监督和检查。组员：执行验证方案，样品的质张海QC量检验及记录的填写。李树组员：执行验证方案，样品的质冰QC量检验及记录的填写。5、验证前的风险评估5.1 验证小组人员按照质量风险管理规程，对分析方法进行了风险评估，确定了需进行方法确认

2、的项目。严重性（ S）： 危害可能产生后果的程度。严重程度分为五个等级。级 别级别描述评定标准赋分值可能导致检测结果不准确或不可靠，直接影第五级非常严重响产品质量。5可能导致检测结果产生重大偏差， 对产品质第四级严重量有较大影响。4可能导致检测结果产生偏差， 对产品质量有第三级中等一定影响。3可能导致检测结果产生偏差， 但在可接受范第二级轻微围。2第一级可忽略对检测结果无影响或影响可以忽略。1：影响检测结果的事件发生的可能性频率或概率，建立以下五个等级：5.1.2 可能性（ P）级 别级别描述评定标准赋分值第五级很高难控制，非常有可能发生5第四级高较难控制，很有可能发生4第三级中等可以控制，可

3、能发生3重庆麦克福新制药VP-01-06-00-041第5页共24页第二级低容易控制，不太可能发生2第一级稀少很容易控制，发生的几率极低1可检测性（ D）：检测到异常情况存在的能力的程度，定义如下：级 别级别描述评定标准赋分值第五级几乎不可能没有已知的控制方法能找出异常情况或现行5控制方法找出异常情况的可能性很微小。第四级微小现行控制方法找出异常情况的可能性很小。4第三级中等现行控制方法找出异常情况的可能性中等。3第二级高现行控制方法找出异常情况的可能性高。2第一级很高现行控制方法找出异常情况的可能性很高，1几乎肯定能找出异常情况。5.2 风险优先数量等级判定（RPN ）风险等级判定标准的确定

4、RPN 是事件发生的严重程度、可能性和可探测性三者乘积，用来衡量可能的仪器缺陷，以便采取可能的预防措施。RPN = Severity( 严重程度 )Possibility( 发生的可能性 )Detection( 可探测性 )风险得分风险级别RPN8低风险9RPN36中风险37 RPN125高风险5.2.2 风险评价和处理风险得分风险接受及控制措施低风险风险可接受，无需采取额外的风险控制措施中风险要求采用控制措施，通过提高可检测性及（或）降低风险产生重庆麦克福新制药VP-01-06-00-041第6页共24页的可能性来降低最终风险水平， 所采用的措施可以是规程或者是技术措施，但均应经过验证。高风

5、险风险不可以接受，需采取风险控制/降低措施注：当 RPN8，但严重性 S 为 5 时，仍需按中等以上风险进行后续控制。麦克福新制药VP-01-06-00-041页5.3 风险分析第7页共24序 风险可能的失败模潜在影响号 项目式专属不具有不能有效分性专属性离定量定量限、限与检测限甲醇或丙酮2 检测高无法被检出限不同时间或3精密精密度人员测定的度差结果不一致4准度确回收率 结果不准确低5 线性 线性差结果不准确SPD RPN3332733327333273332733327风 建议采险级别取措施首次使用前对中专属性进行验证对分析方法的定量限、中检测限进行验证首次使用前对中精密度进行验证首次使用前

6、对中准确度进行验证首次使中用前对麦克福新制药VP-01-06-00-041第8页共24页浓度超过范6 范围 范围窄围后结果不 33327准确参数微小变耐用 耐用性 化对结果影 33327性差响较大6、验证前的准备6.1 人员培训线性进行验证首次使用前对中范围进行验证首次使用前对中耐用性进行验证在本方案实施前，已对方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺利实施，做好培训记录，培训记录见表 1。表 1训确认表文件名称培训人参加培训人员溯源资料阿莫西林残留溶剂分析方法验证方案结论复核人检查人 /日期/日期7、验证内容7.1 验证项目及可接受标准麦克福新制药VP-01-06-00-041第9页共2

7、4页验证项可接受标准目溶剂空白应不干扰甲醇和丙酮的检测。专属性甲醇和丙酮与相邻峰之间的分离度 1.5样品加入试验：不干扰残留溶剂测定，溶剂峰分离度 1.5系统适对照溶液连续进样 6 次的峰面积的 RSD10%用性理论塔板数 2000残留溶剂峰分离度 1.5定量限符合 S/N=101 的要求检测限符合 S/N=31 的要求线性及相关系数 R20.99范围回收率均在 80% 120% ，且 RSD 不得大于准确度10% 。精密度重复性与中间精密度各 6 份供试品测得的结果 RSD 均不得大于 10.0%，共计 12 份结果耐用性的 RSD 不得大于 15% 。各考察色谱条件下，各项改变测试结果均应

8、满足系统适用性要求。7.2 仪器配置检查（见表2）表 2 仪器配置表名称型号编号气相色谱万分之一十万分之检查人 /复 核 人日期/ 日期7.3 验证所用的试剂及样品 ( 见表 3)表 3 验证所用试剂及样品名称规格批号供应商丙酮分析纯甲醇色谱纯N,N 二甲基乙分析纯酰胺（ DMAC）阿莫西林麦克福新制药VP-01-06-00-041检查人 /复核人日期/ 日期7.3 实验条件：第10页共24页检测器： FID（氢火焰离子化检测器）色谱柱： WEL-62430m0.32mm 0.25um升温程序： 50，维持 6min， 60/min 的速率升温至 240，维持 3 分钟进样口温度： 200检测

9、器温度： 260载气：氮气流速： 2.98 ml/min分流比 1:1进样方式：顶空进样，顶空瓶平衡温度80，平衡时间 30min7.4 方法学验证专属性试验目的：确定所需测定的目标溶剂可以很好的分离，并且不会受到来自溶媒及可能出现的杂质的干扰。溶液的配制7.4.1.2.1空白溶剂：精密移取 5mlDMAC置于 20ml 顶空瓶中，密封。7.4.1.2.2甲醇贮备液：精密称取甲醇 30mg，置于已有 20mlDMAC的 50ml 量瓶中，加 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得。7.4.1.2.3甲醇定位溶液： 精密量取甲醇储备液 5ml 置 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度，摇匀。取 5

10、ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。7.4.1.2.4丙酮贮备液：精密称取甲醇 50mg，置于已有 20mlDMAC的 50ml 量瓶中，加 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得。7.4.1.2.5丙酮定位溶液： 精密量取丙酮储备液 5ml 置 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度，摇匀。取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。7.4.1.2.6对照溶液：精密量取甲醇贮备液 5ml，丙酮储备液 5ml 置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得。取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。麦克福新制药VP-01-06-00-041第11页共24页样品溶液：取样品约0.1g

11、，置于 20ml 顶空瓶中，精密加入5mlDMAC溶解，密封。密封，超声使其分散均匀，即得。样品 - 对照溶液：取样品约 0.1g ，置于 20ml 顶空瓶中，精密加入上述对照溶液5ml，密封，超声使其分散均匀，即得。测定分别将上述空白溶剂、甲醇定位溶液、丙酮定位溶液、对照溶液、样品溶液、样品- 对照溶液混合溶液各进样1 针，记录色谱图。可接受标准：空白溶剂色谱图中目标峰出峰位置附近无显著干扰峰；? 对照溶液谱图中甲醇和丙酮目标峰与相邻峰的分离度应不小于1.5，理论塔板数 5000；样品中可能出现的杂质对溶剂测定无干扰。试验结果（见表4）表 4 专属性试验结果出峰顺名称保留时间分离度理论塔板序

12、数123结论试验人 / 日期复核人 / 日期系统适用性试验目的：确认用本仪器系统进行残留溶剂测定方法的验证符合要求。溶液的配制：系统适用性溶液的配制：取专属性项下对照溶液，作为系统适用性溶液。麦克福新制药VP-01-06-00-041测定：取系统适用性溶液，连续进样6 次，记录色谱图。可接受标准：第12页共24页对照溶液连续 6 次进样所得图谱中目标峰峰面积 RSD10%，保留时间的 RSD1%理论塔板数 2000；分离度 1.5试验结果（见表5）表 5 系统适用性试验结果序号保留时间峰面积理论塔分离度甲丙甲醇丙酮甲 丙甲 丙123456平均RSD结论试验人复核人 /7./4.3日检期测限日期

13、目的：确定在本色谱条件下，被测溶剂可以被检出的最低浓度。溶液的配制取专属性项下的甲醇定位溶液及丙酮定位溶液， 用 DMAC逐级稀释成一定浓度的溶液， 精密移取 5ml, 置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录色谱图，直到符合 S/N=3 1 的标准，该浓度的溶液即为检测限溶液，取此溶液 5ml 共 3 份，分别置于 20ml 顶空瓶中，密封。测定：取检测限溶液，顶空进样，共3 次，记录色谱图，计算各溶剂的最小检测限。麦克福新制药VP-01-06-00-041可接受标准：符合S/N=31试验结果（见表6）表 6 检测限试验结果第13页共24页残留溶进样S/NS/N 平检测限浓 相对样品剂

14、名称次数均值度( g/ml) 限度 (%)1甲醇231丙酮23结论复核试验人人/ 日/ 日期期定量限目的：确定在本色谱条件下，被测溶剂可以被准确定量的最低浓度。溶液的配制取专属性项下的甲醇定位溶液及丙酮定位溶液，用 DMAC逐级稀释成一定浓度的溶液，精密移取 5ml, 置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录色谱图，直到符合S/N=10 1 的标准，该浓度的溶液即为定量限溶液，取此溶液5ml 共 5 份，分别置于 20ml 顶空瓶中，密封。测定：取定量限溶液，顶空进样，平行操作共5 次，记录色谱图，计算各溶剂的最小定量限。可接受标准：符合S/N=10 1，重复 5 份的峰面积 RSD 不

15、大于 10%麦克福新制药VP-01-06-00-041试验结果（见表7）表 7 定量限试验结果S/N残留溶进样峰面积S/N平均剂名称次数值12甲醇34512丙酮345结论复核试验人人/ 日/ 日期期线性与范围第14页共24页检测相对样品限浓测定限度度目的：测试在定量限至限度标准的120% 范围内，待测溶剂的响应值与浓度之间的线性关系。溶液的配制：定量限：取定量限项下的浓度及平均峰面积值进行计算。麦克福新制药VP-01-06-00-041第15页共24页线性贮备液：取专属性项下甲醇储备液、丙酮储备液作为线性储备液。线性溶液 1：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各2ml，置 50ml 量瓶中，用

16、 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得（甲醇24ug/ml ，丙酮 40ug/ml ）。线性溶液 2：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各3ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得（甲醇36ug/ml ，丙酮 60ug/ml ）。线性溶液 3：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各4ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得（甲醇48ug/ml ，丙酮 80ug/ml ）。线性溶液 4：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各5ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得（甲醇60ug/ml ，丙酮 100ug/ml ）。线性溶液 5：分别

17、精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各6ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得（甲醇72ug/ml ，丙酮 120ug/ml ）。测定：精密量取各线性溶液5ml 置于顶空瓶中，密封，顶空进样检测，记录色谱图，记录每个浓度点的峰面积。以浓度对峰面积做回归曲线，以二次回归得到回归方程及相关系数。7.4.5.4可接受标准：线性相关系数 R2 不小于 0.99。7.4.5.5试验结果（见表 8）表 8 线性与范围试验结果123456溶限度限度限度限度项目定量标准标准标准限度标准剂限的的的标准的40%60%80%120%甲浓度醇（g/麦克福新制药VP-01-06-00-041ml ）

18、峰面积回归方程相关系数 R2浓度（g/ml ）丙峰面积酮回归方程相关系数 R2结论试验人 /复核人 /日期日期第16页共24页Excel 绘制曲线并计算相关系数麦克福新制药VP-01-06-00-041准确度第17页共24页目的：考察残留溶剂分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。溶液的配制；空白溶液： DMAC对照贮备溶液：精密称取甲醇30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得。对照贮备溶液：精密称取甲醇30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得。对

19、照溶液：精密量取对照贮备溶液5ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀，即得。取5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。对照溶液：精密量取对照贮备溶液5ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀，即得。取5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。供试品溶液：精密称取本品0.1g，置 20ml 顶空瓶中，精密加入DMAC5ml ，密封，超声使其分散均匀，摇匀，平行配制2 份。80% 对照溶液：精密量取对照贮备溶液4ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀，即得。120% 对照溶液：精密量取对照贮备溶液6ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀

20、释至刻度，摇匀，即得。80% 准确度溶液的配制：精密称取本品0.1g，置 20ml 顶空瓶中，精密加入80% 对照溶液 5ml ，作为 80% 回收溶液，密封，超声使其分散均匀，摇匀，平行配制3 份。100% 准确度溶液的配制：精密称取本品0.1g，置 20ml 顶空瓶中，精密加入对照溶液5ml，作为 100% 回收溶液，密封，超声使其分散均匀，摇匀，平行配制3 份。120% 准确度溶液的配制：精密称取本品0.1g，置 20ml 顶空瓶中，精密加入120% 对照溶液 5ml ，作为 120% 回收溶液，密封，超声使其分散均匀，摇匀，平行配制3 份。测定：取对照溶液连续顶空进样5 次，对照溶液连

21、续顶空进样2 次，供试品溶液、80% 准确度溶液、 100% 准确度溶液、 120% 准确度溶液顶空进样1 次，记录色谱图，计算各麦克福新制药VP-01-06-00-041浓度点的回收率。计算公式：第18页共24页WsCsRf1 Rf 2残留Au5RfVSRfRf100%As2Wu测得量 RfAF5测得量 - 样品原有量回收率100%加入量式中： Rf -甲醇或丙酮的校正因子；Rf 1 -五针对照液中甲醇或丙酮的校正因子的平均值；Rf 2 -两针对照液中甲醇或丙酮的校正因子的平均值；Rf -对照液中甲醇或丙酮的校正因子的平均值；W S-对照液中甲醇或丙酮的称样量，mg；Cs-对照品的含量， %

22、；Vs-对照品稀释倍数。As-对照液色谱图中甲醇或丙酮的峰面积。Wu -供试品的称样量， mg；Au -供试品色谱图中甲醇或丙酮的峰面积。A F-准确度溶液色谱图中甲醇或丙酮的峰面积。可接受标准： 9 份回收率均在 80% 120% ，且 RSD 不得大于 10% 。试验结果（见表9）：表 9准确度试验结果溶项目80% 准确度溶100% 准确度120% 准确度麦克福新制药VP-01-06-00-041第19页共24页剂液溶液溶液123123123样品原有量ug）甲醇加入量ug）测得量ug）回收率（% ）平均回收率（% ）RSD（% ）样品原有量ug）丙酮加入量ug）测得量ug）回收率（% ）平

23、均回麦克福新制药VP-01-06-00-041收率（% ）RSD（% ）结论试验人 /复核人 /日期日期精密度7.4.7.1重复性7.4.7.1.1目的：考察重复测定供试品中溶剂残留结果之间的接近程度。7.4.7.1.2溶液配制：第20页共24页对照溶液：同对照溶液：同供试品溶液：精密称取阿莫西林 0.1g 置 20ml 顶空瓶中，加 5mlN ，N- 二甲基乙酰胺，密封，超声使其分散均匀，摇匀即得。平行制备 6 份。7.4.7.1.3测定：取对照溶液连续顶空进样5 次，对照溶液连续顶空进样2 次，各供试品溶液顶空进样 1 次，记录色谱图。7.4.7.2中间精密度目的：测定在同一实验室下的变异

24、：不同时间，不同试验者测试结果的重现程度。溶液配制：对照贮备溶液：精密称取甲醇30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得。对照贮备溶液：精密称取甲醇30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得。对照溶液：精密量取对照贮备溶液5ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇麦克福新制药VP-01-06-00-041第21页共24页匀，即得。取5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。对照溶液：精密量取对照贮备溶液 5ml 置 50ml 量瓶中，以 DM

25、AC 稀释至刻度，摇匀，即得。取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。供试品溶液：精密称取本品 0.1g，置 20ml 顶空瓶中，精密加入 DMAC5ml ，密封，超声使其分散均匀，摇匀，平行配制 6 份。测定：取对照溶液连续顶空进样6 次，记录色谱图。可接受标准：重复性与中间精密度各 6 份供试品测得的结果 RSD 均不得大于 10.0% ，共计 12 份结果的 RSD 不得大于 15% 。试验结果（见表10）表 10精密度试验结果甲醇测试结果（ % ） 丙酮测试结果（ % ）测定次数重复性中间精密重复性中间精密123456平均值RSD（% ）12 份平均12 份 RSD结论试验人复核人耐用性7./4.日8期目的：验证在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度。麦克福新制药VP-01-06-00-041第22页共24页溶液配制：对照贮备溶液：精密称取甲醇 60mg、丙酮 10mg置于已加入 20mlDMAC 的 100ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，对照溶液：精密量取对照贮备溶液 10ml 置 100ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度， 摇匀，即得。取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封。测