高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量

1、高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量【摘要】目的建立高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Diansilt18柱；流动相：甲醇-0.1l/L磷酸二氢钾水溶液5050；流速：1.0l/in；检测波长：290n。结果鬼臼毒素在0.047690.4769g/l呈良好线性关系r=0.9996，平均回收率为99.94%，RSD=1.71%n=5。结论采用高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量，操作简便、准确，专属性强。【关键词】高效液相色谱八角莲鬼臼毒素Abstrat：bjetiveTestablishaethdfdeteriningPdphlltxinin

2、DyssaversipellisbyHPL.ethdsHighPerfraneLiquidhratgraphyasperfredDiansil18.Thehratgraphynditinsereasflls:ethanl-0.1l/Lnbasiptassiuphsphate(5050)asbilephase,flratebEing1.0l/inanddetetingavelengthas290n.ResultsAgdlinearityfPdphlltxinasshninrangef0.047690.4769g/l(r=0.9996),theaveragereveryas99.94%andRSD

3、as1.71%(n=5).nlusinTheethdansupplyevidenefrthequalityevaluatinfDyssaversipellis.Itissipleandaurate.Keyrds：HPL；Dyssaversipellis；Pdphlltxin八角莲为小檗科植物八角莲DyssaversipellisHane.hengPdphylluversipelleHane.的根及根茎。具有清热解毒、化痰散结、祛痰消肿之功能。用于痈肿疔疮、瘰疬、咽喉肿痛、跌打损伤、毒蛇咬伤等。笔者曾对八角莲的性状、显微构造进展过研究1。本实验采用高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量，为完善

4、八角莲药材的质量标准及临床应用提供科学根据。1仪器与试药1.1仪器戴安UltiateT3000型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器、变色龙hrelen软件数据处理系统；岛津AU120D分析天平d0.1g/0.01g；UP5200H超声波清洗器熊猫集团南京电子计量。1.2试药甲醇为色谱纯中国上海陆都化学试剂厂；磷酸二氢钾为分析纯。鬼臼毒素对照品含量测定用，以93.5%计，批号111645202201由中国药品生物制品检定所提供；八角莲DyssaversipellisHane.hengPdphylluversipelleHane.，由中南民族大学万定荣教授鉴定和提供。2

5、方法与结果2.1色谱条件Diansilt18色谱柱2504.6，5；流动相为甲醇-0.1l/L磷酸二氢钾5050；检测波长290n；流速1.0l/in；柱温30；灵敏度：0.1AUFS；理论塔板数按鬼臼毒素峰计算不低于1500。2.2对照品溶液的制备精细称取在五氧化二磷枯燥器中减压枯燥12h的鬼臼毒素对照品适量，加甲醇制成每毫升约含0.5g的溶液，摇匀，微孔滤膜过滤0.45，得鬼臼毒素对照品溶液。2.3供试品溶液的制备分别取八角莲根茎和根粉末过3号筛各约0.5g，精细称取，置具塞锥形瓶中，精细参加甲醇25l，密塞，放置12h，称定重量，超声处理30in，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的

6、重量，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜过滤0.45，得八角莲根茎和根的供试品溶液。2.4八角莲根茎和根HPL谱图比拟分别取八角莲根茎和根供试品溶液10l，注入高效液相色谱仪中，对其HPL图进展比拟，由图14比拟可以看出，八角莲根中根本不含鬼臼毒素成分。图1八角莲根茎HPL图略图2八角莲根HPL图略图3鬼臼毒素对照品HPL图略图4空白溶剂HPL图略2.5线性关系考察精细称取在五氧化二磷枯燥器中减压枯燥12h的鬼臼毒素对照品25.5g，置50l容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀0.5193.5%0.4769g/l，精细量取溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0l，分别置10l容量瓶中，加甲醇

7、稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，鬼臼毒素含量为横坐标，绘制标准曲线，统计学计算回归方程为：Y=0.01108X8.6782103，r=0.9996。结果说明，鬼臼毒素的进样量在0.047690.4769g/l的范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系。2.6精细度实验精细汲取鬼臼毒素对照品溶液10l，按上述色谱条件，连续进样5次，依次测定各峰的峰面积值，结果鬼臼毒素对照品RSD=0.24%，说明仪器精细度良好。2.7稳定性实验精细汲取密封室温保存的八角莲根茎供试品溶液10l，分别于0，2，5，8，10h进样，测定其峰面积值，计算RSD=0.84%n=3，结果说明，供试品

8、溶液在10h内检测对结果无影响，稳定性良好。2.8重现性实验取同一批八角莲根茎样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份供试液，分别精细汲取对照品溶液与供试品溶液各10l，测定5份供试品中鬼臼毒素的含量，结果RSD=1.50%。2.9样品测定取3批八角莲根茎样品，按供试品溶液制备方法操作，分别精细汲取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入高效液相色谱仪，用外标法测定，计算样品中鬼臼毒素的含量。结果见表1。2.10加样回收率实验取含量的八角莲根茎样品5份，各约0.25g，精细称定，分别参加鬼臼毒素对照品2.55g2.5593.5%2.3843g，按供试品溶液制备方法操作，照上述色谱条件测定，计算回收率

9、，结果平均回收率为99.94%，RSD=1.71%。表1八角莲中鬼臼毒素的含量测定结果略表2八角莲中鬼臼毒素加样回收率测定结果略3讨论3.1八角莲中鬼臼毒素的含量与提取方法有关八角莲的有效成分为鬼臼毒素，有文献报道八角莲经80%甲醇超声提取，测得鬼臼毒素的含量为0.94%2，采用文中所用的甲醇超声提取测得鬼臼毒素的含量为1.01%，结果说明，八角莲中鬼臼毒素的含量可能与提取溶剂、方法等有一定关系，值得进一步研究。3.2八角莲根中根本不含鬼臼毒素通过比拟八角莲根与根茎的HPL图可以看出，八角莲根中根本不含鬼臼毒素，实验结果说明，主要是八角莲的根茎具有鬼臼毒素的抗癌抗病毒活性。本法测定八角莲中鬼臼毒素的含量，样品预处理简单，有效成