《形态学综合实验》课程教学大纲

1、形态学综合实验实验教学大纲课程代码：CLMD3027课程名称：形态学综合实验 英文名称：Synthetic Experiment of Morphology实验室名称：基础医学教学实验中心（省级）形态学实验室课程学时：54实验学时：54一、本课程实验教学目的与要求开设医学形态学综合实验课程，着重培养医学生医学基础知识系统整合能力及应用于科研实践的能力，为将来开展专业研究工作打下基础。本实验采用小鼠为研究对象，以制作血吸虫病和H22小鼠肝癌细胞肿瘤动物模型为主干线，设血吸虫病动物模型组、小鼠肝癌细胞肿瘤动物模型组和正常对照组。要求学生在综合实验中掌握感染性疾病和肿瘤动物模型制作；H22小鼠肝癌细

2、胞细胞分离、培养；正常对照组动物及血吸虫病和小鼠肝癌细胞肿瘤实验动物模型病理解剖、取材、包埋、切片、染色和分析；掌握ELISA检测血吸虫病动物模型血清抗体；掌握肿瘤的免疫组织化学法鉴定及其注意事项；掌握血液标本中常见病原菌的检验程序及检验方法；掌握免疫荧光技术，能够正确使用荧光显微镜及对其结果的进行识别；掌握PCR检测基因的技术。综合分析实验结果，并写出综合性实验报告。二、主要仪器设备及现有台套数1、捷达互动显微系统软件 1套/每人 2、教师用计算机 清华同方 超越E380 1台/每室3、学生用计算机 清华同方 超越E200 1台/每人4、数码显微镜 CX21 1台/每室5、数码显微镜 CX3

3、1 1台/每人6、倒置显微镜2台7、荧光显微镜1台8、石蜡切片机4台9、冰冻切片机2台10、可调移液器10支 11、气泵1台12、真空泵 1台13、酶标仪 1台14、流式细胞仪 1台15、CO2培养箱 2台16、冷冻离心机 4台17、医用超净台 12套18、恒温水浴箱 4台19、PCR检测仪 4台20、-20冰箱 2台三、实验课程内容和学时分配序号实验项目名称目的、要求实验内容学时分配实验类型每组人数必开选开1血吸虫病动物模型制备掌握钉螺逸出血吸虫尾蚴条件,挑取感染性尾蚴,镜下计数，固定家兔,接种尾蚴。1、逸尾蚴并计数2、计数尾蚴接种家兔3、检测模型血吸虫卵3创新性1必开2血吸虫病的病原学及免

4、疫学检测掌握采血,分离血清;进行环卵沉淀试验;固相免疫酶染、免疫荧光检测血吸虫肝、肠、肺、脑虫卵肉芽肿及其虫卵周围的抗原复合物分布，酶标检测抗体滴度。1、采血制备血清2、用环卵沉淀试验检测血吸虫病模型抗体3、用免疫荧光法和酶标法检测血吸虫卵肉芽肿周围免疫复合物及血吸虫抗体3创新性1必开3血吸虫病淋巴细胞分离纯化和培养掌握从外周免疫器官中获取不同淋巴细胞的取材部位、制备方法及关键操作。1、分离纯化出T淋巴细胞，2、采用免疫荧光及流式细胞仪技术对T淋巴细胞表面的特异性分子进行鉴定。3、将鉴定后的细胞加入不同的刺激剂如PHA或T细胞活化相关的抗体如激发型的CD3和CD28等培养。观察T细胞的活化与增

5、殖状况。3创新性1必开4淋巴细胞的免疫荧光分析掌握细胞膜型分子的分析方法及原理，能够正确使用荧光显微镜及对实验结果的分析。以T淋巴细胞或B淋巴细胞或转基因细胞为靶细胞，采用免疫荧光技术分析细胞表面特定分子表达的阳性率及表达的密度。3创新性1必开5血涂片的制作掌握血涂片的制作方法；掌握血液的组成、各种血细胞与血小板的形态特点。熟悉Wright和Giemsa染色过程。1、观看教学光盘：血液；2、自己制作并观察血涂片3综合性设计性1必开6正常动物的组织切片制作掌握石蜡切片HE染色标本制作方法；熟悉组织学与胚胎学的其他研究方法；了解组织学与胚胎学研究的最新进展。1、收集正常对照组实验动物，处死动物及取

6、材；2、组织块经固定、脱水、包埋、切片、染色等步骤，制备组织切片。3、在互动实验室观看切片，采集图片，递交电子版实验报告。9*综合性设计性1必开7H22小鼠肝癌细胞的分离与培养掌握H22小鼠肝癌细胞的分离与培养方法，了解小鼠解剖技术。1、H22小鼠肝癌细胞的分离与培养2、细胞的换液和传代3创新性1必开8H22小鼠肝癌实体瘤动物模型制备掌握动物皮下接种方法；掌握实验动物解剖；掌握实验动物肿瘤的观察及肿瘤的取材；了解实验动物肿瘤的形态特点。1、H22小鼠肝癌细胞悬液制备2、小鼠皮下注射3、肿瘤大小观察3创新性1必开9实验动物肿瘤切片的制备掌握肿瘤的一般形态、生长方式、扩散及转移的途径。1、实验动物

7、肿瘤的观察及肿瘤的取材2、实验动物肿瘤的形态特点。3、肿瘤的一般形态、生长方式、扩散及转移途径；4、常规HE染色方法。6*创新性1必开10肿瘤的免疫组织化学法鉴定及其结果判断了解肿瘤研究的常见方法；掌握免疫组织化学检查的方法；掌握免疫组织化学阳性的判断方法及其意义；掌握免疫组织化学方法在肿瘤研究中的重要性。1、免疫组织化学的实验方法及其注意事项，主要检测与肝细胞癌相关抗原AFP、与肝细胞增殖相关的基因PCNA、与肝细胞癌凋亡相关因子Fas的在H22小鼠肝癌实体瘤中的表达。2、免疫组织化学染色后的结果定位判断（胞浆、胞核以及胞膜）及其意义。5*创新性1必开11血吸虫病动物模型的病变观察（大体及切

8、片）通过对动物模型的解剖和病变观察，掌握血吸虫病主要病变部位及基本病变。解剖血吸虫动物模型并观察主要病变部位（肝、肠、肺）的主要病变，并观察病变切片。2创新性1必开12H22小鼠肝癌体内TGF-1基因检测及分析了解细胞基因组DNA的分离与提纯，掌握PCR检测技术。1、熟悉PCR技术原理、实验步骤。2、采用PCR技术检测荷瘤小鼠体内TGF-1基因表达。3、分析实验结果。3创新性1必开13血液标本中常见病原菌的分离培养与鉴定掌握血液标本中常见病原菌的检验程序及检验方法。熟悉血液标本中常见微生物的种类。了解血液标本的采集要点及注意事项。1、血液标本采集原则及方法2、血液标本的增菌培养3、血培养阳性标

9、本的分离培养4、鉴定（革兰染色镜检、培养特性、凝固酶试验、触酶试验、氧化酶试验、O/F试验、IMViC试验、动力试验、脲酶试验、甘露醇发酵试验、Optochin敏感试验、杆菌肽敏感试验、新生霉素耐药试验、玻片凝集试验）5、药物敏感试验：纸片扩散法6、鉴定结果及分析讨论8*综合性设计性1必开* 实验时间安排在周末为9学时，其实验有连续性，需要一定的时间，所以超过3学时四、考核方式1、实验报告：纸质版、电子版的实验报告及心得体会（1）每项实验的实验报告（纸质版）（2）实验成果，即组织切片及血涂片2、考核方式（评分标准）（1）综合实验学习心得体会30分（2）病理学15分（3）组织学15分（4）微生物学10分（5）寄生虫学10分（6）细胞生物学10分（7）免疫学10分五、实验教材、参考书1、教材：医学形态学综合实验（自编教材）2005年2、参考书：（1）高小联主编免疫学双语实验技术指导科学出版社 2004年.（2）李允鹤主编寄生虫病免疫学及免疫诊断江苏科学出版社 1991年. （3）吴观陵主编人体寄生虫学 人民卫生出版社 2005年.（4