中药鉴定DNA分子标记在中药品种鉴定中的运用

1、DNA分子标识在中药品种判定中利用指导老师：谢冬梅老师小组组员：赵维波 刘万冬 朱婷 周孟凡 周悦 4月14日第1页汇报内容1、研究背景2、DNA分子标识介绍3、DNA分子标识技术方法介绍4、在中药品种判定中利用5、小结6、展望第2页1 研究背景中药准确判定包括到人民生命安全和切身利益。传统判定方法存在着不一样程度不足，近年来，伴随分子生物学技术进步，DNA 分子标识新技术不停涌现，DNA 分子标识技术凭借着特异性强、准确、快速、微量、可靠等特点，在中药品种判定中展现了辽阔应用前景。第3页2 DNA分子标识介绍分子标识定义：广义分子标识是指可遗传并可检测DNA序列或蛋白质。狭义分子标识是指能反

2、应生物个体或种群间基因组中某种差异特异性DNA片段。分子标识类别：依据目标基因所在细胞器不一样可分为核DNA 标识、线粒体DNA标识和叶绿体DNA标识。适合用于动物起源进化、亲缘关系、遗传变异、物种判别等研究线粒体DNA适合用于高等植物亲缘关系、物种判别等研究核DNA与叶绿体DNA第4页3 DNA分子标识技术定义：DNA分子标识技术， 也称DNA分子诊疗技术，是指经过直接分析遗传物质多态性来诊疗生物内在基因排布规律及其外在性状表现规律技术。第5页DNA分子标识技术特点不受组织类别、发育阶段等影响。取材不受限制。不受环境影响。因为环境只影响基因表示转录与翻译，而不影响基因结构。数量多且多态性高。

3、含有共显性，能够判别纯种和杂合基因。简单、快速、易于自动化。第6页惯用DNA分标识技术分类基本原理技术名称特点适用范围以电泳技术和 分子杂交技术为关键DNA 标识技术RFLP 分子标识技术 具极大丰富性、共显性、具稳定性、分析简单等研究属种, 甚至品种亲缘关系、系统发育与演化以电泳技术和PCR 技术为基础DNA 分子标识技术RAPD 分子标识技术含有广泛性和通用性、简便易行研究种、亚种,判别栽培种与野生种AFLP 标识技术多态性强,稳定性强,重复性高重复次序标识技术信息量大, 结果重复性好DNA 序列直接测定法DNA 序列直接测定技术简便快速研究植物分类判别和亲缘关系第7页DNA分子标识技术原

4、理以RAPD为例简明介绍DNA分子标识技术原理、操作过程及结果分析。原理：RAPD是建立在PCR基础之上一个可对整个未知序列基因组进行多态性分析分子技术。其以基因组DNA为模板，以单个人工合成随机多态核苷酸序列为引物，在热稳定DNA聚合酶作用下，进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫外透视仪上检测多态性。扩增产物多态性反应了基因组多态性。第8页操作过程第9页结果分析DNA的提取模板DNA浓度和质量的检测电泳检测用EB处理、观察、拍照系统分析第10页DNA分子标识技术利用情况方法：以惯用中药材名称和分子标识技术为关键词，搜索CNKI文库中汉字文件，并进行分类统

5、计。统计结果技术方法PCR扩增、测序RAPD-PCR扩增位点特异性PCRISSR-PCR其它总和篇数7817963116第11页以PCR扩增、测序为判别方法部分惯用中药分类药材药用部位药材名称药材或饮片起源标识序列对应判别药材植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类植物类菌 类动物类动物类动物类动物类根基根茎类根及根茎类根及根茎类茎木类茎木类叶类皮类花类全草类果实及种子类巴戟天柴胡大黄鸡血藤川木通石韦牡丹皮西红花石斛地肤子灵芝乌鞘蛇阿胶海马羚羊角巴戟天野生柴胡药用大黄密花豆小木通、绣球藤石韦牡丹番红花束花石斛地肤血芝乌鞘蛇驴皮小海马羚羊角ITS标识序列ITS标识序列SRAP标识序

6、列ITS标识序列ITS标识序列叶绿体序列ITS标识序列ITS标识序列ITS标识序列ITS2标识序列18S RNA序列12S RNA序列12S RNA序列12S RNA序列特异性引物羊角藤、虎刺栽培柴胡掌叶大黄、唐古拉大黄香花崖豆藤、大血藤女萎、短尾铁线莲庐山石韦川赤芍、芍药番紫花、菊花流苏石斛荆芥、草木犀其它灵芝红点锦蛇牛皮、马皮三斑海马山羊角第12页标识选择标识选择是筛选取于中药分子判别DNA标识前提。惯用于植物判别基因标识序列有：rbcL、ITS、matK、psbA-trnH、trnL-trnF 动物判别片段主要用COI基因片段。第13页品种判定中标识序列应用情况第14页 4 在中药品种判

7、定中利用在中药种类分布在植物药中分布第15页在中药品种判定中利用一、判定近缘中药品种 相关学者对美洲东部西洋参、三叶人参进行基因分析后，发觉西洋参加东亚种人参、竹节参、三七含有更近亲缘关系。二、判定动物类中药品种 DNA标识技术不但能对动物药整体、破碎组织进行准确判定，还能对动物粉末、体液、分泌物、排泄物入药中药或中药制剂进行有效真伪判定。 王建云利用PCR技术准确判别鸡内金和鸭内金。第16页在中药品种判定中利用三、判定药材地道性道地药材与非道地药材物种起源、形态、显微及化学成份等特征上含有高度相同性,因而不易判定，而DNA分子标识技术从群居和分子水平上说明药材地道性。陈永久利用RAPD技术研

8、究冬虫夏草在不一样群体间遗传分化现象，同一地域样品差异甚微而不一样地域样品差异甚大。第17页在中药品种判定中利用四、判定中药野生与栽培品种 栽培品种在长久人工选择与驯化作用，其生物性状、品质发生一定改变。而市场上以栽培品充当野生品现象屡见不鲜，仅靠传统判别极难区分。DNA分子标识技术则展示其良好利用前景。马小等用RAPD、AFLP标识对园参加山参研究发觉，该技术可用于栽培品与野生品判定。第18页5 小结现实状况DNA分子遗传标识技术在中药判定及其相关研究方面含有独到优势和辽阔应用前景,但当前尚处于探索阶段。各种DNA分子遗传技术均存在一定不足,有待深入规范和完善。中药分子判定试验中问题目标基因真实性与DNA同源性DNA分子标识技术稳定性分子生物研究成本等。第19