培养基的一般常用成分

1、一)水制备培养基必须使用纯净的，无微量金属，杀菌性和抑菌性化学物质的蒸馏水。注意，以加氯的水进行蒸馏所得的蒸馏水，即使在使用前通过离子交换树脂，也偶含有显著量的游离氯所以应进行测试，如正联甲苯胺试验显色。测试后，以硫代硫酸钠中和后或进行重复蒸馏后才能使用。琼脂琼脂俗称洋菜，英文名agar,为由海藻类(主要足石花菜)提取出来的一种胶体多糖，即半乳聚糖水解后，产生半乳糖及少量五烷糖和有机硫。其化学性质系为一种不带侧链的半乳聚糖甙，含有90%右旋半乳糖和10左旋半乳糖。在约每10个吡喃半乳糖单位有一个首位或次位的羟基被硫酸脂化。其阴离子脂组(-so2-oh)主要是与钙结合，但也有少数是和镁、钠、或钾

2、结合。其制造方法，一般是在每年7-9月收集海中石花菜，洗涤并经晒干后保存。于冬季冰冻开始时，按1：30比例将干藻放入水中煮沸，然后加入硫酸少许并煮沸5-6小时。过滤后待冷，用“漏子”推成粗条，再经日晒夜冻2-3周后，即成条状琼脂。除少数菌种外，绝大多数细菌都不能分解琼脂，因而琼脂在培养某中无营养价值，只是在液体培养基中凝结成半固体或固体培养基而已。国外商售琼脂一般比较纯净，国内琼脂则含有杂质较多，故在使用前应先用冷水浸泡洗涤后才能使用。供细菌培养使用的品质优良的琼脂应具有下列特性：(l)凝固点不超过2C，通常范围在3438C。(2)1L的1.5%琼脂，在蒸汽浴中重新完全溶化，不超过45分钟。(

3、3)在98C能完全溶解子水。(4)在45C仍保待足够的液态，以利于试验时的混合均匀。(5)与水的结合水平至少在50%以上，以保证完全的溶解性。(6)含水量不超过原重17%。(7)燃烧残余物不超过3%。(8)金属最高允许含量，铅0.0005%，铁0.001%，镁0.1%，钙0.2%，钠0.4%，并不得含有抗菌物质。(9)透明度：在蒸馏水中加热溶解后，呈微乳白色透明凝块。无混浊沉淀及微粒。（10）凝胶强度：即在1.5%琼脂平板lcm2表面上于20秒钟内使其破坏的最小重量（g）。优良琼脂应在300-400克。在实际应用中，一般均将琼脂做成按0.5%的差距，递增至3%的生理盐水琼脂平板，然后用接种环或

4、接种针试行划线涂布，以决定该批琼脂实际使用的浓度。（三）蛋白胨和蛋白质水解物蛋白质分子在水解过程中生成一系列的产物。这些产物按其复杂程度而分的次序是；月示，胨，多肽，最后产物是氨基酸。有些氨基酸在早期的水解过程中就可裂解出来。月示和胨并不是均性的化学实体，而是原始蛋白质分子断片的混合物。月示和胨在组成上及大小上各不相同，将其归于一类仅权是因为都表现有某些共同的特性之故。在各种断片中，当溶液被硫酸铵半饱和时沉淀而出的称为初级月示，被硫酸铵全饱和时沉淀而出的称为次级月示。而胨则不发生沉淀。月示仍表现有胶体性质，但已有逐渐减少的趋势。待蛋白质分子分解至胨的阶段时，胶体性质已完全消失。因此，胨除去硫酸

5、铵饱和时不发生沉淀外还可以扩散透过火棉胶薄膜，也不呈现蛋白质某些特殊的沉淀反应。因为月示和胨都是原始蛋白质分子断片的非均相混合物，因此不同的制备方法将使月示和胨在组成上及性质上有所差异。这些差异决定于用作原始材料的蛋白质的本质，水解方法以及用于分离各种产物的方法。因此，市售的各种蛋白胨在组成上是互有差别的，所以在使用时应对各种蛋白胨和蛋白质水解物的成分及其特点有所了解，依据使用的目的和要求加以选用。蛋白胨的主要用途是供给细菌需要的氮源。为制备各种培养基最常使用的成分之一。蛋白胨之的特点为：（1）易溶于水；（2）不因受咼热而凝固（加热至130C也不凝固），且可被细菌直接利用以助生长；（3）系两性

6、电解质，故有缓冲作用。水解动物蛋白质的酶类有动物消化腺，如胃蛋白酶和胰蛋白酶等。植物蛋白质最常用的为木瓜酶，此外还有分解酵母时用的自溶酶等。胃蛋白酶分解蛋白质的结果，能得到含有蛋白分子较大碎片的产物（月示和胨），具有显著的双缩脲反应，此外还有较少量的低级多肽类和游离氨基酸。在这种蛋白胨中生长素很少，故不宜单独用作培养基，必须和肉浸液等混合使用。胰蛋白酶消化的蛋白制品的特点是其成分中有很多游离的氨基酸，特别是色氨酸，低级的多肽类，含蛋白胨和蛋白月示较少所以其营养价值比胃蛋白酶所消化蛋白质的粗制品要咼得多，比肉浸液加蛋白胨也要好得多，因大多数细菌在生长时最易利用游离的氨基酸，其次才是蛋白胨。近年来

7、国外商售蛋白胨品种增加很多，各种牌号也日新月异。1.胰化酪蛋白胨PeptonefromCasein,trypsindigested（E.Merek）本品为胰朊酶消化酪朊所得的蛋白胨。为淡黄色细纯如砂的粉末。在105C干燥失重不超过5%，含磷1-1.5%可凝固性蛋白，也不含有可发酵性的碳水化合物。由于其色氨酸含量咼，故多用于靛基质试验。2胰化肉蛋白胨Peptonefrommeat,trypsindigested(E.Merck)本品为胰朊酶消化肉所得的蛋白胨。通常用量为1%。为淡黄-淡棕色粉末，具特殊臭味。105C干燥失重不超过5%。硫酸化灰分不超过7%。氯化钠含量不超过l%。肌酸酐不少于0.8

8、%，磷不少于0.5-1.0%，总氮量不少于13-15%。不能检出可凝固蛋白。3.胃化肉蛋白胨Peptonefrommeat,Pespindigested(EMerck)本品为胃朊酶消化肉所得的蛋白胨。为黄至淡棕色粉末。105C干燥失重和硫酸化灰分分别不超过5%和8%。氯化钠含量少于0.5%，磷不多于1%，总氮量不超过13.5-14.5%。检查不出可凝固蛋白。4，胰化明胶蛋白胨Peptonefromgelatin,pancreaticallydigested(E.Merck)本品为胰液消化明胶所得的蛋白胨。可用于细菌培养基和食品添加剂。因其胱氨酸和色氨酸含量低并且没有可发酵的碳水化合物，故很适合

9、制备不良营养性培养基之用。为白至黄色粉末。105C干燥失重和硫酸化灰分均不超过75。总氮量不少于14.5%。无可凝固蛋白。5，植物蛋白胨PeptonefromSoybeanMeal,Papain-digested(E.Meack)本品为木瓜酶消化脱脂大豆粉所得蛋白胨。由于其营养物质丰富并含有高浓度碳水化合物和维生素，特别是硫胺素，此外，其巯基含量也高，故对某些营养要求严格的细菌如奈氏菌群和梭状芽孢杆菌属可用为优良的培养基础。并很适于真菌和酵母的培养和在酒厂中乳酸杆菌常规检验。因其碳水化合物含量高，故不能用于细菌发酵试验。本品为淡黄粉末。105C干燥失重不超过5%。总氮量9-10%。无可凝固性蛋

10、白。.酪朊胰水解物，无磺胺对抗物CaseinHydrolysate,pancreatic,freefromsulfonamideantagonists(E.Merck)本品系用能获得高含量游离氨基酸的高度无破坏性酶分裂工艺从酪朊得到的水解物，因其无磺胺对抗物(PABA)故主要用于磺胺敏感试验培养基。本品为淡黄色细粒粉。105C干燥失重不超过7%。硫酸化灰分不超过10%。氮含最至少12%。无易发酵的碳水化合物，易溶于水。常用量0.3%。.酪朊酸水解物，无维生素CaseinHgdrolysat,acid-hydrolysed,Vitamin-Free(E.Nerck)本品为盐酸消化酪朊所得的水解物

11、。在加工中维生素和其它生民促进物均被大量破坏，因此，特用于微生物学维生素检验的培养基制备。通常用量约15g/L，但用于Mueller-Hinton琼脂则为17.5g。本品为淡黄色粉状、易溶于水。在105C干燥失重要多5%，硫酸化灰分不超过5%，氯化钠含量约25%，氮不低于7%。.酪朊酸水解物CaseinHgdrolysate(E.Meck)本品也是盐酸消化酪朊的水解物，但保留一定程度的维生素和促生长物质，故可较广泛应用。特别用于白喉杆菌，破伤风杆菌和链球菌的毒素和链菌酶生产的培养。9.肝酶化水解物LiverHgdrolgsate,enzymatier(E、Merckk)本品为牛肝经酶消化所得的

12、水解物。主要用于毛滴虫属、布鲁氏菌属、支原体属，厌氧菌和真菌的培养。培养毛滴虫属每升培养基加25g、厌氧菌则加5-10g。10胨蛋白胨ProteosePeptone(E、Merck)本品为含有大量低分子量肽、游离氨基酸和促生长因子的混合蛋白胨。以优良营养质量为特征，适用于毒素生产的培养。因不含有对氨基苯甲酸，也适用于制备敏感试验培养基。对萘氏菌属、葡萄球菌、嗜血杆菌属、沙门氏菌属、巴斯德氏菌属和棒状杆菌属均能供给优良的营养基础。胰化多价蛋白胨Tryptose(E、Merck)本品为含有大量胰化蛋白的混合蛋白胨，适于培养对营养要求严格的细菌，如布鲁氏菌属、链球菌和血琼脂的制备。酸化酪蛋白胨Aci

13、dcasePeptone(BBL),Biocase本品为盐酸消化酪朊的水解物。氮含量8%，但缺乏胱氨酸和色氨酸。氯化钠含量37%，维生素被盐酸水解大量破坏。适用于B12和其它维生素在药品和食品中含量的检测以及毒素生产。胰化明胶蛋白胨GelysatePeptone(BBL)Biogelytone本品为胰化明胶的水解物。胱氨酸和色氨酸含量低并缺乏碳水化合物。适用发酵试验。胰化乳蛋白胨LactolysatePeptone(BBL)Lactlysate本品为胰化乳白蛋白的水解物。适用于乳酸杆菌培养。因其色氨酸含量高，利于细菌色素的产生和靛基质试验。本品特别适用于组织培养。.胰化心肌蛋白胨Myosate

14、Peptone(BBL),Biomyotone本品为胰化心肌的水解物，比肉浸液或肉蛋白胨可使细菌生长较多较早。.多价蛋白胨PolypeptonePeptone(BBL)本品为胰化酪蛋白胨和胃化组织蛋白胨(TrypticaseandThiotone)等量的混合蛋白胨。适用一般细菌培养、特别是肠杆菌科。植物蛋白胨PhytonePeptone(BBL),Biosoyase本品为木瓜酶消化大豆粉所得水解物，维生素含量高、特别是硫氨素，并含有大量植物组织的碳水化合物、为培养各种细菌的优良蛋白胨、包括真菌和许多营养要求严格的细菌，例如梭状芽孢杆菌属和奈氏菌属某些菌种。含有本品的培养基一般可使细菌生长较快较

15、多，在血平板上溶血反应较典型。因碳水化合物含境丰富、故不适用于发酵试验。胃化动物组织蛋白胨ThiotonePeptone(BBL),Biothione本品为胃朊酶消化动物组织所得的蛋白胨。用于血琼脂检测溶血反应结果良好，因其含硫量高，故最适用于硫化氢试验。19胰化酪蛋白胨TrypticasePeptone（BBL）Trypcase本品为胰化酪朊所得的蛋白胨，质量优良，最适用于靛基质试验和糖发酵试验，因其色氨酸含量高而无可查出的碳水化合物。可广泛用于真菌和需氧及厌氧菌，包括肺炎球菌，乳酸杆菌、棒状杆菌和梭状芽孢杆菌以及水和牛奶等的细菌检验。还适用于硝酸盐还原试验2%用量有促进细菌光滑型生长作用，

16、可用于原生动物的培养和抑菌或杀菌剂的检测。还适用于灭菌试验和抗生素或其它抗菌物质的测定。20.多月示蛋白胨Bacto-Protone（Difco）本品为各种月示、胨和氨基酸不同配合的蛋白胨。含月示丰富、适用于细菌生理代谢的研究、用于锡克氏试验白喉毒素稀释液具有显著稳定作用。（四）酵母浸膏为啤酒酵母的水提取物，经浓缩而成。因含各种维生素和氨基酸量较高，能为细菌提供良好的上长条件，故亦为制备培养基常用的基础成分之一。常用量为0.3-5%。（五）牛肉浸膏为牛肉浸液经蒸发浓缩而成，其原含有的糖类等不耐热物质，因受热破坏，以至其营养价值不如肉浸液丰富。但因其不含有糖类，故多用于制备醣类发酵试验培养基的基

17、础液。但应注意，一般商售的牛肉浸膏，常加有较多的氯化钠，有时可高达30%，甚至还加有防腐剂。此外不同牌号的牛肉浸膏其成分也各有差异，故在使用前应对其成分有所了解，并应用已知菌种进行予试。其用量一般为0.2-0.5%。若质量较差、可提高至1.0%。其成分大致如下：固体成分总量73.0%灰分1.60%总氮5.6%氨基氮0.51%氯化钠5.5%肌酐总量4.9%脂肪0.07%磷酸0.47%钾4.2%钠2.8%铁4ppm铜6ppm凝固性物质无六）麦芽浸膏为发芽大麦粒的水提取物。因其含有高浓度的各种碳水化合物，特别是麦芽糖含量丰富，故为培养酵母菌和各种真菌的常用成分。其化学成分大致如下含有丰富的碳水化合物

18、和某些特殊的蛋白质和维生素。常用于百日咳杆菌和真菌培养基。并对蛋白胨或琼脂中所含阻害细菌发育的物质具有缓和作用。其制备法，将马铃薯去皮切成薄片，加约三倍水，放冷库浸提4天。取出煮沸蒸发使成粘稠液即成。注意，必须用新收获的马铃薯制备。陈旧储藏的不能采用。若颜色过深，应以活性炭脱色。马铃薯成分（每100g）大致如下：水分79.7g异亮氨酸70.0mg蛋白质2.3g苏氨酸71.0mg脂肪O.lg苯丙氨酸81.0mg碳水化合物16.6g色氨酸32.0mg粗纤维0.3g蛋氨酸30.0mg灰分0.8g赖氨酸93.0mg钙ll.Omg胱氨酸28.0mg磷64.0mg钾502.0mg铁1.2mg钠2.2mg胡

19、萝卜素0.01mg镁22.9mg硫胺素1.0mg氯68.0mg核黄素0.03mg铜0.42-0.65mg尼克酸0.4mg锰0.5mg抗坏血酸16.0mg锌1.4mg缬氨酸113.0mg钼0.05mg亮氨酸113.0mg硼0.66mg（八）番茄汁和柑桔汁常用于嗜酸性细菌培养基，特别对乳酸菌有显著地促进发育作用。原料的新鲜程度对其应用效果具有显著影响，其制法即将水果去皮绞碎，压榨取汁，过滤即成。（九）明胶明胶是从骨原胶（Collagen）用沸水水解而来的蛋白质，Collagen是结缔组织的主要成分，是一种不能溶解的蛋白质，但煮沸可容易地转化为可溶性。明胶的化学结构与Collagen相似，其脯氨酸（

20、Proline）和甘氨酸（glycine）含量特高，总氮为15%，含硫2%,二氧化硫0.01%,重金属V0.001%,在105C干燥损失不超过15%无过氧化物或磺胺类抗菌物质。明胶主要供作鉴别细菌用，约在28C凝固，明胶可被各种细菌的明胶酶水解，且在37C时即液化，所以不能代替琼脂。（十）肝粉为新鲜牛肝经脱水干燥加以研碎而成。作为天然氧化还原系统和营养物质常用于厌氧菌，布氏杆菌和痢疾阿米巴原虫培养基。一克肝粉约等于五克鲜肝。常用量为5%。亦可将煮熟牛肝或猪肝切成碎块使用。（一）乳酪为从牛奶取得的一种无纤维素的等电点牛奶蛋白质。其商售品为白至淡黄色细粒粉，含氮14%以上，脂肪不超过0.5%、灰分

21、不超过1.5%，在105C干燥损失不超过8.0%。主要用于需氧乳酪分解菌的检验。十二）无机元素对细菌而言，最需耍的无机元素为钠、钾、镁、铁、硫、磷、氯等，其他奴锰、钴、铜、钙等也有一些特殊作用。磷酸盐、碳酸盐或醋酸盐兼有缓冲作用。无机元素的主要功用：(1)构成菌体的成分；(2)作为酶的组成部分或为酶反应的促进者；(3)维持酸碱度的平衡，(4)调节细菌细胞内的渗透压，(5)作为自养菌的能源。磷：细菌体中磷的含量较多，磷在代谢活动中占有重要的地位，磷酸盐是重要的缓冲剂之一。此外磷酸盐可促进芽孢进步的发育。硫：硫氢基(-SH)是许多酶类的必要基，硫是某些自养菌的能源。铁：铁是过氧化氢酶，过氧化物酶、

22、细胞色素、细胞色素氧化酶的组成部分，缺铁时，这些酶类的合成受影响。铁对毒素的产生也很重要。只有在一定浓度范围内才能有毒素产生。镁：镁与核糖核酸结合成复合物，存在于革兰氏阳性菌菌体的表层，与革兰氏染色有关。细菌为了生存和生长，也需要镁离子。镁也是细菌叶绿素的组成原素。锰：糖代谢中许多酶类的活性都需要锰。锰对羧化作用是必需的。钙：变形杆菌需要钙以合成蛋白酶，自养菌中亚硝酸盐菌的生长也需要钙。钾：钾离子与磷的传递作用有关。氯化钠：主要是调节渗透压(十三)发酵性化合物主要为碳水化合物和醇类等发酵性化合物。发酵性化合物可作为能源和碳源，或利用发酵反应以鉴定细菌，因细菌具有各种酶系统，能分解糖类，产生酸类

23、、气体和其他产物。不同细菌对各种糖类的分解能力不同。常用的各种糖类、醇类和糖苷类包括：单糖类：戊糖阿拉伯糖、木糖、鼠李糖。已糖葡萄糖、甘露糖、左旋糖和半乳糖。双糖类：蔗糖、麦芽糖、乳糖和蕈糖。三糖类：棉子糖。多糖类：淀粉、菊糖、糊精、动物淀粉。醇类有：三元醇：丙三醇四元醇：赤丝藻醇五元醇：侧金盏花醇六元醇：甘露醇、卫茅醇、山梨醇苷类有：水杨苷、松柏苷和马栗树皮苷。非糖物质有肌醇。培养基中糖类加入量为0.5-1%，贵重价昂的糖加入0.5%，普通的糖可加入1%。各种糖类因高温而呈不同程度的水解和变质，特别和共它盐类混合一起时尤甚，因此，最好先将糖类配成10-20%浓溶液，经高压蒸汽或阿诺氏蒸汽灭菌

24、，或用赛氏器滤过后再加入。常用糖类中以葡萄糖和甘露醇性质较稳定，乳糖、麦芽糖和蔗糖较易分解。（十四）血液和体液血浓、血清或腹水中含有蛋白质和生长因素，一般营养要求较高的细菌需要血液或血清才能生长。新鲜的血清中含有补体，有杀菌作用，宜加热灭活后再使用。使用新鲜血液时，常用无菌的脱纤维血液，于培养基灭菌并冷至4550C时再行加入。（十五）选择性抑菌剂在一些培养基中，常需加入某种特殊抑制剂，以抑制某些细菌的生长，利于检出菌的生长和鉴别。一般称为选择性抑菌剂。常用的选择性抑菌剂有胆盐、蔷薇酸、亚硫酸铋、煌绿、孔雀绿、亚硒酸钠、四硫磺酸钠、叠氮化钠、结晶紫等。胆盐、蔷薇酸、亚硫酸铋和煌绿都有抑制革兰氏阳

25、性菌的作用，叠氮化钠还可抑制变形杆菌的生长。各种不同革兰氏阴性菌对同一染料或药品的敏感度也不相同，利用该特性，可以有目的地抑制不需要的细菌，使病原菌更易被分离出来。煌绿和孔雀绿能抑制大肠杆菌、痢疾杆菌和伤寒杆菌的生长、而适于分离其它沙门氏菌属，亚硒酸钠能抑制大肠杆菌、可用于分禽伤寒杆菌和其它沙门氏菌属。四硫磺酸钠可抑制大肠杆菌，而伤寒杆菌和副伤寒杆菌仍可生长。兹摘要介绍如下：1.胆盐胆盐是一种胆酸的钠盐，是胆酸的羧基和甘氨酸或牛磺酸的氨基，通过酰胺键结合而成。脱氧胆酸钠是在3和12碳上带有羟基的二羟基化合物，它比三羟酸，即胆酸或牛磺胆酸活性更大，缺少羟基的胆酸没有活牲。脱氧胆酸钠在水溶液中呈弱

26、碱性，为无色。胆盐可降低培养基与菌膜界面上的表面张力、并使胞膜紊乱、加速天然的自溶过程。因脱氧胆酸钠或牛磺胆酸钠溶解活力最大、故常用于胆汁溶解试验中。胆盐遇酸生成沉淀、使菌落的色素不致外散、更有利于鉴别。市售胆盐是中性，脱水胆盐效果与新鲜胆汁相同、可代替鲜胆汁，避免引起培养基混浊，且可灭菌、浓度易控制。常用培养基中浓度为1.5g/L。商售混合胆盐中不同胆酸的相对百分数如表2-5所示。胆酸混合胆盐Bacto胆盐Bacto-3号胆盐Bacto-牛胆汁石胆酸2.2脱氧胆酸1.141.744.7鹅胆酸48.92.94.5胆酸0.453.048.8猪脱氧胆酸25.82.0amurjcholjc21.60

27、.6Downie氏等把胆酸分成两类：(1)非结合酸，其不同类型只是它们的化学结构不同，(2)络胆酸，它是脱氧胆酸的加成化合物，根据增加物的类型不同而有差异。牛磺酸是由氨基酸、半胱氨酸衍生而来，它与胆酸形成的结合物称为牛磺胆酸。胆酸与甘氨酸结合称为甘胆酸。脱氧胆酸是二羟酸，胆酸和牛磺胆酸是三羟酸，所有的胆汁酸都有一个共同的基本核，即环戊烷多烃菲。牛磺胆酸、甘胆酸、脱氧胆酸等对革兰氏阳性菌有强大的抑制作用，对革兰氏阴性菌仅有轻度的抑制作用。脂肪酸也有抑菌作用。胆汁的固形成分约占总量的13%，其中胆酸约为5-6%，粘蛋白4%，类脂2%，胆固醇0.04%，无机物0.8%，胆汁色素0.2%。胆汁具有降低表面张力的作用，使细菌的细胞膜损坏，原生质中一部分内容漏出，或促使菌体的崩解，但肠系细菌因在肠道内长期与胆汁接触由于适应作用，所以对它有一定的抗力。牛胆汁透析物中、含有3.25ug/ml的色氨酸、可能有增菌作用。胆汁中的粘蛋白可作为细菌营养物、并对胆酸和脂肪酸的抑菌力起一定的中和作用。常用量为10-20g/L,1g干燥粉约等于10-12g鲜胆汁。2涤波为商品名称、系石油副产品。其主要成分为十二烷基硫酸钠。具有抑制革兰氏阳性细菌发育的作用，与胆酸盐作用相似。由于其对革兰氏阴性细菌的作用比胆酸盐弱，且价格较便宜、因而近年来多用于培养基中。应注意，其不同批号产品所含成分