血脂各个项目的不同测定方法

1、血清脂类测定血浆中的脂类包括胆固醇、胆固醇脂、甘油三酯、磷脂和非酯化脂肪酸等。目前，对有关脂类代谢疾患的诊断和治疗过程，均必须检测血浆（清）中的脂类，通过其含量的变化，对临床疾患提供协助诊断的依据。有关医学科研工作，脂类的定量检测也是一项必备的研究项目。1胆固醇测定血浆中胆胆固醇及及其酯的的含量检检测，从从方法学学上可分分为两大大类：一一类是化化学法包包括抽提提法和直直接测定定法，这这类方法法目前仍仍在沿用用；另一一类是酶酶法测定定，方法法敏感特特异快速速，并能能自动化化分析，已常规规应用。化学测测定法种种类多，由于显显色反应应的特异异性不同同，其结结果有一一定的差差异。目目前公认认的参考考方

2、法是是Abeell-Kenndalll(LL-B反反应)法法。另外外，三氯氯化铁-硫酸反反应法（Zakk法）具具有显色色稳定法法、操作作简便、灵敏度度约5倍倍于L-B反应应法，胆胆固醇酯酯与游离离胆固醇醇显色程程度比较较接近等等优点，缺点是是特异性性差，干干扰因素素比L-B法多多，如冰冰醋酸中中含有的的乙醛酸酸，血清清样品中中的血红红蛋白，胆红素素以及硫硫酸的质质量等因因素均可可影响ZZak方方法的准准确性，Zakk法更适适合于科科研使用用。酶法法测定血血清胆固固醇的方方法已被被广泛采采用，国国产试剂剂已能满满足临床床的需要要。胆固固醇测定定用的标标准品，按美国国国家标标准局（NBSS）出品品

3、纯度达达99.8%,是国际际公认的的参考物物，国内内李健斋斋等已纯纯化制成成符合这这一要求求的胆固固醇纯品品，已供供临床检检测血清清胆固醇醇使用。2甘油油三酯测测定血浆甘油油三酯的的测定，目前多多以化学学法和酶酶法定量量。化学学法测定定甘油三三酯是以以脂蛋白白变性，水解成成甘油，并以甘甘油为计计算依据据。酶法法是以特特异酶水水解甘油油三酯，除去脂脂肪酸，再测定定甘油，方法特特异，准准确而快快速，临临床广为为应用。目前甘甘油三酯酯测定的的方法主主要以定定量甘油油为依据据，然而而血清样样品中存存在有游游离甘油油，如何何从反应应过程中中的总甘甘油中减减去游离离甘油，多年来来一直在在研究讨讨论这一一问

4、题。若不减减去，其其测定值值将会高高于血清清样品中中的真值值，如果果要减去去，就必必须先测测出血清清样品中中的游离离甘油，甘油三三酯的测测定方法法将增加加一个繁繁杂的步步骤，实实际工作作中难以以做到。有报道道血清样样品中的的游离甘甘油实际际量是00.0770.13mmmoll/L，相当于于甘油三三酯的00.56.00mmool/LL，为此此建议，实测的的甘油三三酯量减减去一个个校正系系数即：甘油三酯酯（mmmol/L）=0.98总甘油油（mmmol/L）-0.07（mmool/LL）。这一校正正系数也也仅适用用于健康康人，对对临床病病人并不不一定适适用。据据报道，血清样样品的游游离甘油油一直是

5、是个未知知数，无无法测准准。为此此，目前前临床测测定血清清甘油三三酯时，基本上上未考虑虑游离甘甘油，因因为其含含量很少少，暂且且忽略不不记。甘甘油三酯酯测定的的参考物物，推荐荐三油酸酸甘油酯酯和三软软脂酸甘甘油酯混混合物（2：11，W/W），此参考考物适用用于化学学法。在在酶法测测定中，仍以高高纯度的的三油酸酸甘油酯酯为参考考物。3磷脂脂测定血清磷脂脂包括卵卵磷脂、溶血卵卵磷脂、神经磷磷脂、脑脑磷脂和和其他少少量磷脂脂。如需需要分别别检测各各种磷脂脂，可以以通过薄薄层层析析法、柱柱层析法法和高压压液相色色谱法。目前，临床仅仅测定血血清磷脂脂总量。血清磷磷脂总量量的测定定方法有有化学方方法和酶酶

6、法两大大类。化化学法是是以磷脂脂中的磷磷为定量量依据，因为每每磷脂分分子中都都含有一一个磷酸酸根，故故将磷脂脂的磷称称为脂性性磷。由由于血清清中磷脂脂大部分分为卵磷磷脂，其其分子量量中磷约约占4%，故将将脂性磷磷换算成成磷脂的的系数，一般为为25。由于化化学法均均需要抽抽提，再再测抽提提液中的的磷脂的的磷，血血清中的的磷酸盐盐不可能能混入抽抽提液中中，因此此血清中中的磷酸酸盐对磷磷脂测定定的干扰扰很少。酶法是是利用磷磷脂酶进进行定量量测定。生物体体中磷脂脂酶包括括磷脂酶酶A1、A2、C和和D四种种。磷脂脂酶D特特异性差差，均可可水解卵卵磷脂、溶血卵卵磷脂和和神经磷磷脂，三三者约占占血清总总磷脂

7、的的95%，临床床多用含含磷脂酶酶D 的的试剂进进行磷脂脂的定量量测定。4游离离脂肪酸酸测定游离脂肪肪酸属于于未酯化化的一类类脂肪酸酸，故又又称为非非酯化脂脂肪酸，其量很很少，采采用方法法必须是是灵敏的的方法，还需要要避免脂脂肪水解解产生脂脂肪酸的的干扰。测定方方法有：滴定定法需要要微量滴滴定装置置，因为为要通过过肉眼观观察颜色色，难免免会有主主观因素素的影响响，所以以难以测测定准确确，很难难用于常常规；光度法法，以铜铜皂法常常用；酶法，主要采采用特异异性不强强的脂肪肪酶D进进行检测测，方法法特异，快速准准确，已已常规应应用于临临床。第一节 胆固醇醇测定血清中胆胆固醇包包括CEE和FCC，酯型

8、型的CEE占700%，FFC占330%。CE中中的C33的-OOH在LLCATT作用下下，可分分别结合合亚油酸酸（433%）、油酸（24%）、软软脂酸（10%）、亚亚麻油酸酸（6%）、花花生四烯烯酸（66%）、硬脂酸酸（3%）等脂脂肪酸结结合而成成。血清清中胆固固醇在LLDL中中最多，其次是是HDLL和VLLDL、CM最最少。血血清总胆胆固醇测测定方法法分为化化学法和和酶法两两大类。1化学学法化学法一一般包括括：抽抽提；皂化；毛地地黄皂苷苷沉淀纯纯化；显色比比色四个个阶段。代表性性的方法法有Spperrry-WWebbb法，通通过步骤骤操作过过程。常常规操作作中多采采用省去去了、。或或者用省省

9、去、步骤骤的Zaak-HHenlly法及及省去步骤的的Abeell-Kenndalll法，现将此此法作为为标准参参考方法法予以引引用。2酵法法测定CE在胆胆固醇酯酯酶（cchollestterool eesteerasse）作作用下水水解成FFC和NNFFAA，TCC再经胆胆固醇氧氧化酶（choolessterrol oxiidasse,CCOD）氧化成成4胆胆甾烯酮酮和H22O2。再分分别定量量O2的消耗耗或者HH2O2的生成成量，或或者44胆甾烯烯酮生成成量,以以作为TTC的定定量依据据。该法法是目前前常规的的应用方方法，快快速准确确，标本本用量少少，便于于自动生生化分析析仪作批批量测定定

10、。一、Abbelll-Keendaall改改良法1原理理血清加入入醇溶性性氢氧化化钾，使使胆固醇醇从脂蛋蛋白中分分离出来来，同时时使胆固固醇酯加加水分解解成游离离胆固醇醇，加石石油醚振振摇、抽抽提，使使胆固醇醇移入石石油醚层层，分离离并取一一定量的的石油醚醚层，蒸蒸发至干干，再进进行Liiebeermaann-Burrchaard 显色反反应，6620nnm比色色定量。该法可可用于基基本功训训练及组组织细胞胞胆固醇醇的提取取定量。2试剂剂组成代号种类浓度组 成成贮存28有效时间间R1乙醇优质纯R2石油醚沸点688，特特级纯R3水醋酸分析纯R4无水醋酸酸胆固醇分分析用，不含HHCIR5浓硫酸分析

11、纯R6KOH液液33%(W/WW)KOH110g+H2O20mmlR7乙醇性KKOH液液R1944ml+R666ml临用前配配制R8Liebbermmannn配制后BurccharrdR4200体积+R511体积+R3110体积积1h试剂*内用完R9胆固醇标标准液5.177mmool/LL胆固醇标标准品2200mmg+RR11100mml0*：在三三角烧瓶瓶内，加加入无水水醋酸，于冰水水中冷至至10以下，再慢慢慢加入浓浓硫酸，混合，静置110miin，又又加冰醋醋酸混匀匀，备用用。3操作作 图155-1 血清胆胆固醇（Abeell法法）测定定操作图图4计算算标准总胆胆固醇浓浓度=EESA/EE

12、ST55.177(mmmol/L)二、酶法法（CEEH、CCOD-PODD法）首先将血血清中胆胆固醇酯酯在胆固固醇酯酶酶（CEEH）水水解为游游离胆固固醇和脂脂肪酸，胆固醇醇在胆固固醇氧化化酶（CCOD）作用下下，生成成4-胆甾烯烯酮和HH2O2，再HH2O2经过氧氧化物酶酶（POOD）作作用在44-氨基基安替比比林（44-AAA-P）及N-乙基-N-（3-磺磺基醋酸酸）-33甲氧基基苯胺（N-eethyyl-NN-(33-suulfooproopyll)-mmaniisiddinee,ESSPASS）参与与下，生生成红色色醌亚胺胺色素。H2O22+ESSPASS+4-氨基安安替比林林红色色醌

13、亚胺胺色素（一）手手工测定定法1试剂剂组成代号种类浓度组成贮288有效时间间Na2HHPO4450mmmol/LNa2HH2PO450mmmol/L胆酸钠3mmool/LL4-氨基基安替比比林0.822mmool/LLR1*ESPAAS14mmmol/L24hCarbbowaax-6600000.177mmool/LLCEH33U/LCOD117UU/LPOD67000U/LLR2标准液5.177mmool/LL用异丙醇醇溶解胆胆固醇*混匀，调pHH至6.700.110(225)，或购购买试剂剂盒。酶酶以活性性单位表表示。2操作作按图155-2操操作。3计算算标准总胆胆固醇浓浓度=EESA/EEST55.177(mmmol/L)（二）自自动化分分析仪测测定以CL-72000型全全自动生生化分析析仪检测测为例。1试剂剂组成A液：CCEH、PODD、抗坏坏血酸氧氧化酶等等。B液：CCOD、4-氨氨基安替替比林等等。图15-2 血血清胆固固醇测定定（酶法法）操作作图2上机机参数项 目目参 数数方 法法终点法波 长长双波长（5400nm，7000nm）反应