日本岛津UV2550分光光度计 操作培训课件

1、山东安和安全技术研究院有限公司检测部 Tel: (0543) 3065070E_mail:岛津UV2550紫外/可见分光光度计操作培训1紫外-可见吸收光谱吸收光谱的测量-Lambert-Beer 定律紫外-可见分光光度计仪器组成分析条件选择UV-Vis分光光度法的应用紫外-可见分光光度计的维护和保养UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射的吸收特性。UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160780nm.UV-Vis主要用于分子的定量分析，但紫外光谱(UV)为四大波谱之一，是 鉴定许多化合物，尤其是有机化合物的重要定性工具之一。 目录2紫外-可见吸收光谱3一、分子吸收光谱

2、的形成1. 过程：运动的分子外层电子-吸收外来外来辐射-产生电子能级跃迁-分子吸收谱。基态 E0激发态 E1DE = E1 - E0 = hn能量激发e能量差DE52. 能级组成：除了电子能级(Electron energy level)外，分子吸收能量将伴随着分子的振动和转动，即同时将发生振动(Vibration)能级和转动(Rotation)能级的跃迁！据量子力学理论，分子的振-转跃迁也是量子化的或者说将产生非连续谱。因此，分子的能量变化E为各种形式能量变化的总和： 其中Ee最大：1-10 eV; Ev次之：0.05-1 eV; Er最小：0.05 eV 6能级跃迁示意图电磁波与分子相互作

3、用时产生能级跃迁：能级振动能级跃迁 转动能级跃迁v1v2v0543210电子能级跃迁E1E0v0v1v2E = hn 其中 h 为普朗克常数 (6.626 10-34 焦耳 秒） n 为频率 7各轨道能级高低顺序： n*；可能的跃迁类型：-*；-*；-*；n-*；-*；n-*8几个概念：生色团（Chromogenesis group）： 分子中含有非键或键的电子体系，能吸收外来辐射时并引起n-* 和-*跃迁，可产生此类跃迁或吸收的结构单元，称为生色团。助色团（Auxochromous group） ： 含有孤对电子，可使生色团吸收峰向长波方向移动并提高吸收强度的一些官能团，称之为助色团。红移或

4、蓝移（Redshift or blueshift）： 在分子中引入的一些基团或受到其它外界因素影响，吸收峰向长波方向（红移）或短波方向移动（蓝移）的现象。10一、透射率T%入射光I0透射光 I光程长b 透射率 T% =II0 100%12 样品吸光度 A 与光程 b 总是成正比。但当 b 一定时，A 与 c 并不总是成正比，即偏离 L-B 定律！这种偏离由样品性质和仪器决定。1. 样品性质影响a）待测物高浓度-吸收质点间隔变小质点间相互作用对特定辐射 的吸收能力发生变化- 变化；b）试液中各组份的相互作用，如缔合、离解、光化反应、异构化、配 体数目改变等，会引起待测组份吸收曲线的变化；c）溶剂

5、的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响；d）胶体、乳状液或悬浮液对光的散射损失。 三、偏离 L-B 定律的因素142. 仪器因素 仪器因素包括光源稳定性以及入射光的单色性等。a）入射光的非单色性：不同光对所产生的吸收不同，可导致测定偏差。b）谱带宽度与狭缝宽度：“单色光”仅是理想情况，经分光元件色散所得的“单色光”实际上是有一定波长范围的光谱带(即谱带宽度)。单色光的“纯度”与狭缝宽度有关，狭缝越窄，它所包含的波长范围越小，单色性越好。15紫外-可见分光光度计仪器组成16UV示意图17 紫外-可见光度计仪器由光源、单色器、吸收池和检测器四部分组成。一、光源 对光源基本要求：足够光强、稳

6、定、连续辐射且强度随波长变化小。1. 钨及碘钨灯：3401500 nm，多用在可见光区；2. 氢灯和氘灯：160375nm，多用在紫外区。二、单色器(Monochromator) 与原子吸收光度仪不同，在UV-Vis光度计中，单色器通常置于吸收池的前面！（可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解）三、吸收池(Cell，Container)： 用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。四、检测器： 硅光电池、PMT、PDA18分光光度计的校正 当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对其进行校正。波长标

7、度校正： 使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。因为二者均有其各自的特征吸收峰。吸光度标度校正： 采用 K2CrO4 标准液校正（在15oC时，于不同波长处测定0.04000g/L的 KOH 溶液（0.05mol/L）的吸光度 A，调整光度计使其A 达到指定的吸光度。20分析条件选择21二、反应条件选择 显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定、显色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。2. 显色剂用量： 配位数与显色剂用量有关；在形成逐级配合物，其用量更要严格控制。3. 溶液酸度：配位数和水解等与 pH 有关。4. 显色时间、温度、放置时间等

8、。23三、参比液选择 1.溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比； 2.试剂参比：当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物）； 3.试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。24紫外-可见分光光度法的应用26一、定性分析 不同物质结构不同或者说其分子能级的能量(各种能级能量总和)或能量间隔各异，因此不同物质将选择性地吸收不同波长或能量的外来辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。 定性分析具体做法是让不同波长的光通过待测物，经待测物吸收后，测量其对不同波长光的吸

9、收程度(吸光度A)，以吸光度A为纵坐标，辐射波长为横坐标作图，得到该物质的吸收光谱或吸收曲线，据吸收曲线的特性(峰强度、位置及数目等)研究分子结构。27-胡罗卜素咖啡因阿斯匹林丙酮 几种化合物的分子吸收光谱图28二、定量分析步骤（标准曲线法）先开主机，然后再打开UVPROBE软件；启动UVPROBE以后，点击界面下方“连接”进行仪器连接，仪器进行连接检查，待检查全部通过后，点击“OK”点击“光度测定”；点击“方法”，波长设定为通过光谱检测到所测样品的最大吸收波长,然后加入波长，类型多选择为“多点”，WL1=最大波长。 点击“下一步”，（注：根据所测样品对相应的参数进行设定），“方法”设定完后，

10、点击“关闭”；将两个空白参比放入光束吸收池架；点击“自动调零”；双击标准表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活；30点击下拉菜单中的I-扣空白；在标准表中依次输入标准系列ID；读取标准样品：将两个空白参比放入光束吸收池架，点击“自动调零”，然后放入样品，输入样品浓度，依次进行“读取”。样品的浓度读取完后，在“标准曲线”表中点击“右键”-“属性”中选择“方程式”、“相关系数”，查看标准曲线；样品读取：点击样品表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活；在样品表中输入样品ID，放入待测样品，进行“读取 ”。打印结果：点击文件-打印-（选择打印标准表或样品表）关机：点击操作界面“断开”，

11、然后关闭仪器电源，关闭操作软件，关闭电脑，将比色皿倒扣放置保存。31紫外-可见分光光度计的维护与保养32一、环境要求、使用工作温度：1535，湿度：4580%，如果温度高于30，则湿度必须小于70%、避免日光直射、避免震动、避免强磁场，电场、远离腐蚀性气体，并避免置于任何可能导致紫外区吸收的含有机/无机试剂气体的区域、避免脏污、多尘环境33二、工作台要求 、可承受压力 35Kg+25Kg（PC） 、最小尺寸 ：长：1120mm，宽：710mm，高：520mm三、电源要求 、供电电压：100/120/220/230/240V 交流5% 50/60Hz 、功率消耗：约190VA 、保险丝使用：100 - 120V供电，5A ；220-240V供电，3.15A 、安装地点具备可靠的仪器接地端子34四、清洁仪器外部和样品室1、使用软布稍微蘸取水，或水溶液或者中性清洁剂溶液轻柔搽拭外表面。避免蘸取过量而导致流入仪器内部。2、清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。35五、波长准确度检查（每半年一次）1、该项目在UVProbe软件中检查D2灯的2个特征峰，486.0nm , 656.1nm。2、选择“光谱模式”，编辑方法，设定记录范围0-100，波长范围660-650，中速扫描，自动采样间隔。仪器参数：仅使用D2灯，PM 2增益，狭缝0.2。“确定”返回主屏幕。