关木通及其炮制品中马兜铃酸A的含量变化

1、关木通及其炮制品中马兜铃酸A的含量变化【摘要】目的考察关木通药材及其炮制品中马兜铃酸A的含量变化。方法采用高效液相色谱法HPL检测。色谱条件：色谱柱为Lihrspher-18柱4.6200，5，流动相为甲醇-0.1%冰醋酸溶液(7030)，流速1.0l/in,检测波长310n，柱温为30。结果炒焦、滑石粉炒、麸炒3种炮制品中的马兜铃酸A含量均较生品有所降低,并且滑石粉炒后的炮制品降低率最高。结论这3种炮制方法可以降低关木通中马兜铃酸A的含量，到达了降低毒性的目的。【关键词】关木通炮制品马兜铃酸A关木通为马兜铃科植物东北马兜铃AristlhiaanshuriensisK.的枯燥藤茎，主要含马兜铃

2、酸类化合物。近年来，关于马兜铃酸引起肾损害的报道较多，称之为马兜铃酸肾病1。虽然含马兜铃酸的中药肾毒性是确定无疑的，但同时该类中药使用历史悠久，疗效确切，临床使用广泛，假如因噎废食，采取一刀切的方法，全部取消含马兜铃酸中药在临床上的使用，既不可能，也不现实。中药的应用是以传统炮制和复方配伍为特色的。关于关木通的复方配伍降低毒性的研究目前有很多，但是用传统炮制方法是否能降低其毒性尚未见系统研究报道。为降低毒性，本实验以炒焦、滑石粉炒和麦麸炒这3种方法对关木通进展处理2，并采用HPL法测定了关木通药材及其炮制品中马兜铃酸A的含量，定量分析关木通炮制前后其马兜铃酸A的含量变化，从一个侧面讨论中药炮制

3、理论的根据。1仪器与试药日本岛津L-10ADVP高效液相色谱仪，岛津SPD-10AVP紫外检测器，H色谱工作站。甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂均为分析纯。马兜铃酸A对照品(中国药品生物制品检定所，批号110746-202206)；关木通药材经南京中医药大学药学院生药教研室王春根教授鉴定。2方法与结果2.1色谱条件采用Lihrspher-18柱4.6200，5,流动相为甲醇-0.1%冰醋酸溶液(7030)；流速1.0l/in；检测波长310n；柱温为30；进样20l。色谱图见图12。图1马兜铃酸A对照品的HPL图略图2关木通药材的HPL图略2.2溶液的制备2.2.1供试品及炮制品的制备取

4、关木通原药材，除去杂质，过40目筛。炒焦：称取关木通饮片100.0g，置炒制容器内，用中火加热，炒至外表焦黄或焦褐色，断面深黄色，有香气逸出，取出，晾凉，装至密封袋封口。滑石粉炒：称取关木通饮片50.0g，滑石粉20.0g。先将滑石粉至热锅内，用中火加热炒至灵敏状态时，投入关木通饮片，不断翻炒，炒至饮片外表颜色加深时，取出，筛去滑石粉，晾凉，装至密封袋封口。麸炒：称取关木通饮片100.0g，麦麸10.0g。先将锅烧热，撒入麦麸，用中火加热，待冒烟时投入关木通饮片，不断翻炒，炒至深黄色时，取出，筛去麦麸，晾凉，装至密封袋封口。2.2.2对照品溶液的制备精细称取在五氧化二磷枯燥器中真空枯燥至恒重的

5、马兜铃酸A对照品适量，加甲醇溶解，制成每毫升含1.025g的溶液，作为母液。精细汲取1.025g/l的母液4l，加甲醇定容至50l的量瓶，得0.082g/l的对照品溶液，备用。2.2.3供试品溶液的制备精细称取关木通样品粉末2g，置圆底烧瓶中，参加甲醇30l/20l，水浴加热回流提取2次，第1次2h，第2次1h，滤过,合并滤液，回收甲醇后，定容至25l量瓶中；取1l并定容至10l量瓶中，即作为药材供试品溶液。按该法制得“2.2.1项下3种炮制品的供试品溶液。每种供试品均按此法做3份。2.3线性关系考察精细汲取浓度为0.082g/l的对照品溶液1，2，3，4，5，6l，甲醇稀定容释至10l。在上

6、述色谱条件下进样20l进展测定。以浓度g/l为横坐标，以马兜铃酸A平均峰面积Y为纵坐标进展线性回归，得回归方程，=410-5Y-0.4665，r=0.9998，线性范围是8.249.2g，结果说明马兜铃酸A在8.249.2g范围内线性关系良好。2.4精细度实验精细汲取浓度为24.6g/l的对照品溶液20l，连续进样5次，测得马兜铃酸A峰面积值的RSD为1.11%,结果说明精细度良好。2.5稳定性实验精细汲取同一份药材供试液20l，分别于0，3，6，9，12，15h进样，记录峰面积,其RSD为1.15%，结果说明在15h内根本稳定。2.6重复性实验精细称取同一批关木通药材2g,共5份，用与“2.

7、2.3项下一样的方法制得供试液，测得的马兜铃酸A的含量RSD=2.80%，结果说明重复性良好。2.7加样回收率实验精细称取含量的关木通药材1g，共6份，分别置圆底烧瓶中，各精细参加一定量的马兜铃酸A对照，用与“2.2.3项下一样的方法制得供试液。结果见表1。表1马兜铃酸A加样回收率实验结果略2.8药材及炮制品的测定精细汲取各供试液20l，注入液相色谱仪，各进3针，样品色谱图见附图用外标一点法计算含量见表2。由关木通生药材和炮制品含量测定结果计算，生药材与各炮制品之间马兜铃酸A含量有显著性差异(P0.01)。表2关木通原药材及炮制品中马兜铃酸A的含量略3讨论稳定性实验结果说明，供试品溶液立即测定

8、与放置24h后测定的相对标准差在测定误差范围内，供试液在24h内是稳定的。马兜铃酸是3，4-次甲二氧基-10-硝基-1-菲酸的衍生物，具有羧基3。本实验供试品图谱中主成分峰前有一杂质峰，最初采用甲醇-水作为流动相，结果峰形对称性不好，峰形宽，理论塔板数低，别离度达不到1.5以上，同一份样品屡次进样重复性和稳定性差，参加冰醋酸后，别离度到达1.7，峰形可以得到改善，样品重复性好，稳定性好，随着甲醇的比例增大，保存时间缩短。本法简单，准确，快捷，可作为关木通药材中马兜铃酸A的含量测定方法。关木通在中国有悠久的用药历史和坚实的临床根底,常配伍使用,几乎不单独应用。本实验中考察了关木通炮制前、后马兜铃酸A煎出量的变化,结果说明,炮制后马兜铃酸A的煎出量较炮制前关木通药材明显降低,从一个侧面说明了通过炮制降低关木通毒性的合理性。另外,这3种炮制方法均是以药化的角度来考虑的，但是药理上是否一致，还需要进一步的实验研究。【参考文献】