蛋白质抗体芯片

1、蛋白质抗体芯片蛋白质抗体芯片第1页蛋白质芯片是指固定于支持介质上蛋白质组成微阵列。蛋白芯片技术基础原理: 将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上，然后，用标识了特定荧光蛋白质或其它成份与芯片作用，经漂将未能与芯片上蛋白质互补结合成份洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描技术，测定芯片上各点荧光强度，经过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用关系，由此到达测定各种蛋白质功效目标。固定在芯片上蛋白能够是：抗原、抗体、小肽、受体和配体、蛋白质-DNA和蛋白质-RNA复合物等。蛋 白 芯 片蛋白质抗体芯片第2页 分类： 蛋白功效芯片-天然蛋白点加在基片上，了解体 系中哪种蛋 白能与已

2、知某种蛋白结合，用于天 然蛋白活性及分子亲和性研究。 蛋白检测芯片- 将含有高度亲和特异性探针 分子（如单克隆抗体）固定在基片上，用于识别复 杂生物样品中目标蛋白/多肽。蛋白质抗体芯片第3页蛋白芯片较之传统分析方法主要有以下优点:(1)蛋白芯片上能够实现成千上万个蛋白质样品高通 量平行分析, 一次试验可提供大量数据-高通量;(2)有高信噪比，高准确性、高灵敏度;(3)所需样品量极少-微量化;(4)在整个基因组和蛋白质组水平将序列信息与 蛋白质产物直接联络起来。(5)快速、微型化和自动化。 蛋白质抗体芯片第4页应用：1.基因表示产物筛选德国Lueking2.病变细胞中分子标识蛋白研究 对病原微生

3、物检测 Rowe 对肿瘤诊疗 Englert 3.分子相互作用研究： 抗原/抗体相互作用研究， 酶与底物相互作用研究， 、及小分子与蛋白质相互作用研究 蛋白质抗体芯片第5页蛋白芯片平台包含：芯片制造、处理、表面化学、检 测试剂、扫描和分析该系统适合用于各种蛋白检测，包含：多样品微量免疫测定、蛋白质-抗体、抗体-蛋白质、抗体-抗原、蛋白质-蛋白质和蛋白质-药品检测。生物芯片技术关键是生物芯片制备及反应信号检测。蛋白质芯片制作原理有各种,片基可采取尼龙膜、聚丙烯酰胺凝胶、玻片、硅片和金片等蛋白质抗体芯片第6页芯片制作系统蛋白质抗体芯片第7页芯片制作系统主体蛋白质抗体芯片第8页4针机械手从384孔板

4、中取样蛋白质抗体芯片第9页48针机械手进行点样（48针机械手能够在6小时内对50个含有1,000点样点芯片进行点样）蛋白质抗体芯片第10页针状点样枪头：蛋白质抗体芯片第11页点样针点样示意图蛋白质抗体芯片第12页操作控制板蛋白质抗体芯片第13页洗涤/干燥台 蛋白质抗体芯片第14页信号检测系统蛋白质抗体芯片第15页扫描软件主操作界面蛋白质抗体芯片第16页抗体芯片抗体芯片称谓起源于免疫学角度,因为其在微生物感染检测中巨大潜在应用价值而引发大家广泛兴趣,是蛋白质芯片研究中进展速度较快一个分支。抗体芯片：生物样品蛋白表示抗体芯片完整系统作用是用于比较两个生物样品，检测二者蛋白表示相对差异。抗体芯片由数

5、百个按一定次序共价结合在载玻片上单克隆抗体组成。由细胞单克隆产生单一构型蛋白，这些抗体能够大量产生，而且对能够在细胞表面发觉特定目标抗原含有特异亲和力，这些抗原往往是恶性。蛋白质抗体芯片第17页抗体芯片优点：1.能够经过同时比较数百种蛋白，使特定蛋白与咱们感 兴趣生理和病理过程发生关系。2.使用单克隆抗体准确性高，敏感度高，专一性强。3.单克隆抗体使用时芯片制作只需知道其DNA序列。4.通用性。抗体芯片应用： 不一样蛋白表示测定 ； 毒性检测； 疾病研究，诊疗筛选； 癌症研究； 药品开发等。蛋白质抗体芯片第18页蛋白质抗体芯片第19页Ab Microarray 380(Cat.No.K1847

6、-1)-Clontech企业第一个商业化抗体芯片蛋白质抗体芯片第20页特点:* 整个分析过程能够在一天内完成* 用荧光分析方法比较两个样品之间378个蛋白质相 对丰度* 适合用于包含组织、细胞系、体液在内各种生物样品* 试剂盒提供完整样品抽提制备、标识、孵育所需 Buffer，尤其设计样品制备过程能保持样品完整 性和溶解性，确保制备样品含有代表性和一致性。* 芯片上抗体包含针对信号传导、癌症、细胞周期调控、 细胞结构、凋亡和神经生物学等广泛生物功效相关 蛋白，跨度大、适用范围广。* 芯片上抗体分别经过特异性抗原、细胞系和组织检 测，灵敏度高达pg/ml* 开放性芯片平台设计，能够用各种型号DN

7、A芯片荧 光扫描仪进行检测。 蛋白质抗体芯片第21页Ab Microarray 380上抗体，包括信号传导、肿瘤发生、细胞周期调控、细胞结构和神经生物学等广泛领域，不但能够识他人源蛋白而且对小鼠和大鼠样品一样有效。蛋白质抗体芯片第22页 抗原标识方法： 同位素标识 荧光标识 化学发光标识 荧光标识类型： A 直接荧光标识 B 半抗原标识 C 抗体夹心法标识蛋白质抗体芯片第23页 蛋白质抗体芯片第24页抗体芯片操作原理示意图蛋白质抗体芯片第25页整个操作流程包含：1.从50200mg组织或细胞、体液中进行蛋白质抽提；2.用Cy5和Cy3两种不一样颜色荧光分子分别标识两个样 品；3.洗去多出标识分

8、子；4.与芯片杂交孵育；5.扫描分析结果。整个过程从样品制备到结果分析只要一天即可完成，操作者只要准备好样品、荧光染料、脱盐纯化柱（处理体液样品时用）和荧光扫描仪，其它试剂全部由试剂盒提供。 蛋白质抗体芯片第26页注意： 1.抗原抗体结合效率差异 2.不一样荧光分子标识效率差异（Cy5 标识样品信号偏高） 内源标准化处理内源标准化处理是指对两个样品（A、B）中分别用两种荧光标识分子（Cy3和Cy5）标识，并交叉与芯片杂交（A-Cy5和B-Cy3一组,A-Cy3和B-Cy5一组分别和芯片杂交） 蛋白质抗体芯片第27页 蛋白质抗体芯片第28页 结果分析： 抗体芯片荧光扫描仪扫描软件处理内源 标准化信噪比（Internally Normalized Ratio ，INR） 原理： 芯片1 Ratio 1 = A-Cy5/B-Cy3 芯片2 Ratio 2 = B-Cy5/A-Cy3 INR 蛋白质抗体芯片第29页蛋白质抗体芯片第30页当INR值1, 说明某抗原在A样品中量大于其在样品B中量，当INR值 1, 说明某抗原在A样品中量小于其在样品B中量。尽管INR