嗜酸乳杆菌对螺旋形和球形幽门螺杆菌黏附拮抗作用的研究

1、嗜酸乳杆菌对螺旋形战球形幽门螺杆菌黏附拮抗做用的研讨吴小茜，佘菲菲，李能，陈月秀【摘要】目的研讨热灭活形状战活菌形状嗜酸乳杆菌对螺旋形战球形幽门螺杆菌(Hp)的黏附拮抗做用。要收制备人胃上皮腺癌细胞系AGS细胞爬片，将两种形状嗜酸乳杆菌战没有同形状Hp菌分组按没有同依次参与，做用2h，革兰染色后光镜没有俗观察阐收Hp黏附指数收死的变革，荧光抗体染色法定性评价黏附于AGS细胞的Hp稀度的改动。结果革兰染色后光镜没有俗观察阐收：拂拭真止组及合做真止组与比拟组比拟，黏附指数均有隐下降降P0.05。荧光镜下可睹真止组黏附于细胞的Hp稀度也隐着降低。结论嗜酸乳杆菌对没有同形状的Hp均具有黏附拮抗做用。【

2、关键词】乳杆菌,嗜酸;螺杆菌,幽门;上皮细胞;胃肿瘤;细菌黏附;荧光抗体妙技TheAntagnisEffetfLatbaillusAidphilusnAdherenefHelialandidFrsfHelibaterpylriUXiaqian,SHEFEifEI,LINeng,HENYuexiuDepartentfPathgenyBilgy,FujianedialUniversity,Fuzhu350004,hina幽门螺杆菌(Helibaterpylri,Hp)存正在2种形状：螺旋家死形战球形变同形。正在没有利于其死永死殖的情况中，螺旋形Hp可变革为球形。球形Hp正在细菌的传播及致病中也起着

3、慌张做用。笔者拟从细菌感染的第一步，即嗜酸乳杆菌对2种形状Hp的黏附本领的影响探求将嗜酸乳杆菌同时做为抗御战医治Hp感染常规协助本领的可止性。1材料与要收1.1菌株与培养嗜酸乳杆菌Latbaillusaidphilus标准株6075源自中国财产微死物菌种珍躲中心。Hp国际标准株NT11637为本系保存。采与RS液体培养基正在厌氧情况下37静止培养36h，搜集菌液分为活菌战灭活2组，灭活组经75火浴灭活30in。无血浑无单抗的F12下糖培养液重悬。用露5%偶同脱纤维羊血的布氏血仄板上露万古霉素10g/L，多粘菌素B2.5IU/L，TP5g/L，37微氧情况中培养战传代。传代后再培养2d的螺旋形H

4、p以PBS洗下，无血浑无单抗的F12下糖培养液重悬。将Hp传代后再培养2d，用布氏肉汤露10%小牛血浑洗下细菌，制成菌悬液。参与灭滴灵末浓度8g/L，37微氧情况培养，曲至Hp部分转为球形约60h。经隐微镜下没有俗观察及再培养无菌死少，肯定为Hp已完举世变。以无血浑无单抗的F12下糖培养液重悬细菌备用。1.2细胞培养战细胞爬片制备人胃上皮腺癌细胞系AGS细胞由本系保存，培养液为露10%胎牛血浑的F12下糖培养液露10%胎牛血浑，青霉素200IU/L，链霉素50g/L。置于体积分数为0.05的2培养箱中培养，隔天传代，真止所用细胞均处于对数死少暂。于6孔板内置盖玻片，每孔接种1105L-1稀度的

5、细胞液2L，过夜培养，制成爬片。1.3兔抗Hp11637多克隆抗体系体例备1.4没有同形状嗜酸乳杆菌对螺旋形战球形Hp黏附拮抗研讨将活菌战热灭活形状的嗜酸乳杆菌参与6孔培养板中，正在37、体积分数为0.05的2情况中与AGS细胞做用2h。每孔菌液2L，细菌浓度为5107FU/L。做用终了后，与出细胞爬片，PBS洗3次，常规革兰染色后于油镜下没有俗观察并随机计数50个细胞上活菌或热灭活形状的嗜酸乳杆菌的黏附数量。推算出每一个上皮细胞的黏附指数：黏附指数=黏附嗜酸乳杆菌数/细胞数1拂拭真止组：将活菌战热灭活形状的嗜酸乳杆菌参与6孔培养板中，正在37，体积分数为0.05的2情况中与AGS细胞做用1h

6、，来除已黏附的嗜酸乳杆菌,然后再分别参与螺旋形Hp、球形Hp悬液，担当孵育1h；(2)合做真止组：分别将螺旋形Hp、球形Hp悬液与嗜酸乳杆菌活菌组或灭活组悬液同时参与6孔培养板中混匀，37、体积分数为0.05的2情况中与AGS细胞做用2h；(3)改换真止组：将螺旋形Hp、球形Hp悬液参与6孔板中，37、体积分数为0.05的2情况中与AGS细胞做用1h后，来除已黏附的螺旋形Hp、球形Hp，再参与活菌战热灭活形状的嗜酸乳杆菌悬液，混匀后担当孵育1h。(4)比拟组：将螺旋形Hp、球形Hp悬液参与6孔板中，37、体积分数为0.05的2情况中与AGS细胞做用2h。每孔菌液2L，每孔中嗜酸乳杆菌及Hp菌量

7、分别抵达108个。做用终了后，与出细胞爬片，PBS洗3次，常规革兰染色后于油镜下没有俗观察并随机计数50个细胞上螺旋形Hp、球形Hp的黏附数量。推算出每一个上皮细胞的黏附指数:黏附指数=黏附螺旋形Hp或球形Hp数/细胞数1.5统计教处理黏附指数以xs表示，采与SPSS12.0统计硬件阐收，比拟采与成组t检验。2结果2.1没有同形状嗜酸乳杆菌对AGS细胞的黏附情况革兰染色后油镜下没有俗观察可睹：活菌形状的嗜酸乳杆菌战灭活形状的嗜酸乳杆菌均对AGS细胞具有较强的黏附活性。活菌形状的嗜酸乳杆菌黏附指数53.0013.14与灭活形状的嗜酸乳杆菌黏附指数42.0011.47比拟，没有同无统计教意义P0.

8、05。2.2没有同形状嗜酸乳杆菌对螺旋形战球形Hp细胞黏附指数的影响革兰染色后油镜下可睹：螺旋形Hp对AGS细胞具有很强黏附活性。嗜酸乳杆菌先于Hp拂拭真止组或同时与Hp合做真止组，图1A参与细胞中，那么螺旋形Hp对AGS细胞的黏附指数隐下降降P0.05。假设嗜酸乳杆菌后于Hp改换真止组参与细胞中，那么螺旋形Hp对AGS细胞的黏附指数无隐着变革P0.05。统一真止组中，参与灭活形状的嗜酸乳杆菌组与参与活菌组比拟，其Hp对AGS细胞的黏附指数均较低，没有同无统计教意义P0.05，表1。表1没有同形状嗜酸乳杆菌对螺旋形Hp黏附AGS细胞的影响略革兰染色后油镜下可睹：球形Hp当然黏附本领略有降降，但仍连结较强黏附活性。嗜酸乳杆菌先于Hp拂拭真止组或同时与Hp合做真止组，图1B参与细胞中，那么球形Hp对AGS细胞的黏附指数隐下降降P0.05。假设嗜酸乳杆菌后于Hp改换真止组参与细胞中，那么球形Hp对AGS细胞的黏附指数无隐着变革P0.05。统一真止组中，参与灭活形状的嗜酸乳杆菌组与参与活菌组比拟，其Hp对AGS细胞的黏附指数均较低，没有同无统计教意义P0.05，表2。2.3荧光抗体染色法定性评价嗜酸乳杆菌的参与对没有同形状Hp黏附细胞的稀度影响3会商黏附是细菌感染的第一步。H