厚朴内生真菌的研究（Ⅰ）：菌种分离及其鉴定

1、厚朴内生真菌的研究：菌种别离及其鉴定【关键词】厚朴；,内生真菌；,多样性摘要：从两个不同来源的厚朴agnliaffiinalisRehd.etils.的茎中，别离获得内生真菌48株，经显微形态观察，鉴定为1纲、3目、6科、16属。不同来源的厚朴内生真菌的种群、数量及分布部位存在显著差异。关键词：厚朴；内生真菌；多样性StudynEndphytiFungiinagnliaffiinalisRehd.etils.:IslatinandIdentifiatinfEndphytiFungiAbstrat：48strainsfendphytifungiereislatedfrthestefagnliaf

2、fiinalisRehd.etils.Theyererphlgiallyidentifiedbelngingt16genera,6failies,3rdersand1lass.Theresultftheexperienthasshnthatquantity,speiesanddistributingftheendphytesvariedinagnliaffiinalisRehd.etils.fdifferenthabitat.Keyrds：agnliaffiinalisRehd.etils.；Endphytifungi；Diversity厚朴agnliaffiinalisRehd.etils.

3、是著名的川产道地药材,属国家二级保护的珍惜濒危药用植物。用于湿滞伤中，脘痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮咳喘等病症1。厚朴多以复方入药，用量较大；而厚朴原植物生长周期长，曾出现厚朴资源匮乏，采用环剥技术确保进展了枝皮剥除的植株能继续生长的方法来保存资源的现象。如今厚朴虽已进展大面积规模化种植，但从长远观点看，厚朴资源仍显缺乏。植物内生真菌可以产生与宿主一样或相似化学成分这一特性在一定程度上可以缓解植物资源短缺问题。厚朴内生真菌的研究未见报道。笔者对厚朴内生真菌进展了菌株别离、鉴定等工作。现将研究结果报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1来源采集四川峨眉山唐山安康植株的枝条；四川都江堰市虹口

4、乡安康植株的枝条作为样本。原植物经鉴定为厚朴agnliaffiinalisRehd.etils.。1.1.2培养基PDA培养基马铃薯培养基用于培养、PDA培养基青链霉素混和液用于别离、查氏培养基NaN3，K2HP4，Kl，gS4，FeS4，蔗糖用于鉴别、促孢培养基KH2P4，KN3，gS47H2，Kl，淀粉，葡萄糖，蔗糖用于鉴别。1.2方法1.2.1内生真菌的别离用自来水将新颖植物外表洗净，稍干后切成适宜长度的小段，在75酒精中浸泡35in，用无菌水冲洗34次，无菌滤纸吸干。然后用无菌刀片将组织表皮削去，分别取韧皮部、木质部和髓部切成551的小块贴放于别离培养基上，置2528恒温箱中培养320

5、d，待培养基上各植物组织周围长出菌丝后，采用尖端菌丝挑取法对所别离的内生真菌进展纯化，即得内生真菌。转贴于论文联盟.ll.1.2.2内生真菌的鉴定采用插片培养和点植法，对别离获得的银杏内生真菌进展显微形态特征的观察、分类鉴定。分类检索参照文献2,3。2结果与讨论2.1厚朴内生真菌种群多样性分析从厚朴中共别离出48株内生真菌，经显微形态观察，鉴定为1纲、3目、6科、16属。厚朴内生真菌种群组成见表1。表1厚朴内生真菌种群组成略由表1可以看出，厚朴内生真菌在种类上存在着极其丰富的多样性特征。在厚朴内生真菌中，从数量上看，以曲霉属Aspergillus、青霉属Peniilliu和镰孢属Fusariu

6、为优势种群，包含菌株分别占总菌株数的31.3，18.8，14.6。局部属种代表性显微形态特征参见图16。2.2不同采集地点厚朴内生真菌的分布从不同地点采集的厚朴植株中均别离到了一定数量、不同类群的内生真菌，说明内生真菌在厚朴体内广泛存在。不同采集地的厚朴中内生真菌的优势菌群不同。其中，采集于峨眉山唐山的厚朴优势菌群为青霉属Peniilliu；采集于都江堰市虹口乡的厚朴优势菌群为曲霉属Aspergillus。结果见表2。图1葡萄孢Btrytissp.显微特征略图2镰孢菌Fusariusp.显微特征略图3阜孢霉Papulariasp.显微特征略图4胶帚霉Gliladiusp.显微特征略图5曲霉As

7、pergillussp.显微特征略图6青霉Peniilliusp.显微特征略由表2可以看出，采集于峨眉山的厚朴植株中的内生真菌在种类上较之采自都江堰者显得丰富，两地植株中别离出的内生真菌数量相当。镰孢属Fusariu为不同来源厚朴植株的共有菌群，而两地植株的优势菌群也成为各自的特有菌群之一。表2不同采集地点厚朴内生真菌数量及种类分布情况略本次实验从两个不同来源的厚朴中共别离到48株内生真菌，经鉴定为1纲、3目、6科、16属，显示出该植物内生真菌在种类和数量上的多样性。采自不同地点的厚朴植株内生真菌种群差异较为明显，采集于峨眉山唐山的厚朴优势菌群为青霉属Peniilliu，而采自都江堰市虹口乡的厚朴优势菌群为曲霉属Aspergillus。镰孢属Fusariu是不同来源厚朴植株的共有菌群。采集于峨眉山的厚朴植株中的内生真菌在种类上较之采自都江堰者显得丰富。我们认为这与采集地的详细环境及厚朴的树龄有关。树龄较长的植株可以提供应微生物一个相对较长的与宿主之间的“磨合期，使一些致病菌转变成暂时不致病的内生菌，内生真菌的种类也就相对较多。这再一次说明，植物内生真菌的数量和种类与植物自身状况及其所处环境亲密相关。有关厚朴内生真菌中活性菌株的挑选研究，将在随后的文章中给予报道。参