草珊瑚总黄酮提取及含量检测

1、草珊瑚总黄酮提取及含量检测【摘要】目的研究草珊瑚总黄酮的提取工艺。方法以草珊瑚为原料，用乙醇为溶剂，利用超声波辅助提取和水浴法提取草珊瑚总黄酮，利用L933正交实验方法优化总黄酮提取工艺，采用单因素实验，测定了乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度等单因素实验，考察总黄酮提取率与各因素的关系。根据单因素实验得出的显著条件进展正交设计，确定最正确工艺条件。结果超声波法的最正确工艺条件为乙醇浓度50%、料液比115、提取时间45in，根据确定的最正确工艺条件，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量为69.25g/g。水浴法的最正确工艺条件为乙醇浓度50%、料液比120、提取温度80、提取时间2h，按

2、实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量49.60g/g。结论超声波提取不仅在时间上比水浴提取大大缩短，而且实验过程易于控制，黄酮提取率也比水浴提取进步28.38%。【关键词】草珊瑚；总黄酮；提取工艺；含量AbstratbjetiveTptiizetheextratinpressftheflavnidsfrsarandraglaber.ethdsUsedsarandraglaberasraaterials，tkethanlextratinethdsandusedultrasniaterbathtextrattheflavnids，thenusedL933Keyrdssarandraglaber；f

3、lavnids；extratinpress；ntent随着草珊瑚在医药、兽药、保健食品及保健用品领域中的应用越来越广泛，对其有效成分的提取别离显得越来越重要。黄酮类化合物是草珊瑚中含量最多、最主要的活性成分之一。目前，对草珊瑚总黄酮的提取别离工艺技术研究尚未见有详细报道，本学位论文拟对草珊瑚总黄酮提取别离工艺技术进展较系统的研究并挑选最正确新技术新工艺。采用正交实验方法考察沸水提取法及乙醇提取法对草珊瑚总黄酮提取效果的影响；采用中药高新工程技术大孔吸附树脂对草珊瑚总黄酮进展别离纯化研究，以确定草珊瑚总黄酮最正确提取别离工艺条件及方法。以确定的草珊瑚总黄酮最正确提取工艺对不同季节采收的草珊瑚中总

4、黄酮含量的动态变化，草珊瑚自然存放时间不同对总黄酮含量的影响，贵州草珊瑚根、茎、叶中总黄酮的不同含量进展动态变化研究，以确定草珊瑚原料的最正确利用时机。从而为消费中最有效的开发利用草珊瑚，获得草珊瑚总黄酮的最大提取率，发挥草珊瑚的最大经济效益提供实验根据及指导，以到达提升草珊瑚药、食用产品的质量档次，使其更具三效高效、速效、长效，三小剂量孝毒性孝不良反响小，三便便于贮藏，便于携带，便于服用的特点，使其产品能走出国门、出口创汇，有着重要的经济和社会意义1。1材料与方法1.1实验材料原料：草珊瑚购于贵阳花果园药材市场；NaN2固体重庆北碚精细化工厂；95%的乙醇溶液分析纯遵义国营化学试剂厂；AlN

5、33固体汇源化工；NaH固体天津市化学试剂六厂三分厂。1.2实验器材HH-S2s型恒温水浴锅金坛市环保仪器厂；UV2755B紫外可见分光光度计上海分析仪器总厂；抽滤机金宇机械；JY8896-IIN型数控超声波细胞粉碎机宁波新芝生物科技；FA1004型电子分析天平上海天平仪器厂。1.3实验方法参加乙醇，放入准备好的烧杯中，超声波提取，抽滤液体，取0.3l参加25l容量瓶中，再在25l容量瓶中参加1l5%的NaN2溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中参加0.5l5%的AlN33溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中参加10l5%NaH溶液，并参加60%乙醇溶液定容。等待15in后在500n处检测

6、吸光度，然后记录数据做空白比照的不加AlN33。超声波提取过程：1称取草珊瑚5g分别装入准备好了的烧杯中，在烧杯上填上编号，并记录好数据。2用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中。3根据以上配置好的原料，放入超声波仪器中进展提龋4将以上提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。参加乙醇，放入锥形瓶中，水浴锅加热，抽滤液体，取0.3l参加25l容量瓶中，再在25l容量瓶中参加1l5%的NaN2的乙醇溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中参加0.5l5%的AlN33的乙醇溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中参加10l5%Na

7、H的乙醇溶液，并参加60%乙醇溶液定容。等待15in后在500n处检测吸光度，然后记录数据作空白比照的不加AlN23。水浴提取的实验过程为：1称取草珊瑚5g分别装入准备好了的锥形瓶中，在锥形瓶上填上编号，并记录好数据；2用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中，并用保鲜膜密封好；3把锥形瓶放入已准备好的一定温度的水浴中加热，2h后取出抽滤液体转入干净的烧杯中，并用保鲜膜密封好；4将以上的提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。2实验结果与讨论2.1标准曲线的制备见图1。从芦丁对照储藏液中分别汲取1l，放入1号、2号容量瓶中

8、25l，各加60%乙醇至5l，加5%NaN2溶液1.0l，摇匀放置6in，再加10%AlN33溶液0.5l空白对照不加，摇匀再放置6in，加4%NaH溶液10l，摇匀放置15in，从400600n处测吸光值：可得出芦丁在500n处存在最大吸收峰。回归方程：A=0.0095+0.0016,线性范围为059.82g/l，相关系数R2=0.9991图1标准工作曲线N33溶液0.5l，摇匀再放置6in，加4%NaH溶液10l，摇匀放置15in，在500n波长处测定吸光度值，以同法配制空白不加硝酸铝对照。显色剂的配置：含量测定，标准曲线的绘制。所用试剂均为分析纯，4%NaH乙醇溶液200l：称取8gNa

9、H置入烧杯中，用200l60%乙醇溶解。10%AlN33乙醇溶液25l：称取2.5gAlN33置于烧杯中，用25l60%乙醇溶解。5%NaN2乙醇溶液50l：称取2.5gNaN2置于烧杯中，用50l60%乙醇溶液溶解2。2.2黄酮提取过程1超声波提取：精细称取枯燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于烧杯中，按实验要求的料液比参加乙醇溶液浸泡，然后用超声波提龋2水浴法提取：精细称取枯燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于锥形瓶中，按实验要求的料液比参加乙醇溶液浸泡并用保鲜膜密封好，然后放在水浴锅上加热2h，滤去残渣。参加60%的乙醇6l，再参加5%NaN21.0l，摇匀放置6in，参加10%AlN330.5l做空白

10、对照的不加，摇匀放置6in，参加4%NaH10.0l，参加60%的乙醇定容至刻度。摇匀放置15in在500n处测吸光度，利用标准回归方程计算出浓度。得到标准曲线回归方程：A=0.0095+0.0016，相关系数R2=0.9992，根据标准方程可以推导出=A-0.0016/0.0095，为物质浓度单位为g/l，提取黄酮的质量g=25/310V10-3,提取总黄酮含量=提取黄酮的质量g/原料草珊瑚质量g。2.3超声波法提取黄酮的单因素实验设计及正交实验数据处理说明：随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但是当乙醇浓度超过60%的时候，黄酮的提取率反而降低，是因为随着乙醇浓度的增大，会使提取粗

11、品中杂质含量增加，黄酮成分含量反而降低。表1乙醇浓度对草珊瑚黄酮提取的影响别离，因此选择浸提固液比在115较为适宜。到达一定时间后，提取率增加缓慢或呈下降趋势的原因可能是在长时间超声作用下，提取率逐渐向极限值靠近，致使提取率增幅降低。同时超声作用时间太长，会使提取粗品中杂质含量增加，有效成分含量反而降低，影响提取物有效含量。故45in提取时间是最好的工艺条件。由以上单因素实验可得出几个在实验过程中，对实验结果有显著作用的因素，他们分别是乙醇浓度50%、60%、70%，料液比110、115、120，提取时间15in、30in、45in，运用这些条件做出提取工艺参数设计表表4，为下面的正交实验做好

12、准备条件。见表5、6。由表5可看出R料液比R乙醇浓度R提取时间，所以本实验料液比作为主要因素，K1、K2、K3中数据最大者对应的程度为最正确程度，即转化率最高。本实验的最正确程度组合是A1B23，即最正确工艺条件为乙醇浓度50%、料液比115、提取时间45in。表4提取工艺参数设计表表5L933提取工艺条件正交实验结果表表6最正确工艺条件提取由表6可看出黄酮含量69.25g/g，比正交实验中的A1B22乙醇浓度50%、料液比115、提取时间30in所提取出的黄酮含量还高，证明本次正交设计实验结论是合理的。2.4水浴法提取黄酮的单因素实验设计及其正交实验数据处理表7。表7乙醇浓度对水浴法提取效果

13、的影响由表7可看出：随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但从60%70%，吸光度增长幅度变小即提取的黄酮含量增长幅度变小，当乙醇浓度超过80%的时候，黄酮的提取率反而降低，提取的黄酮含量变小，是因为随着乙醇浓度的增大，会使提取粗品中杂质含量增加，有效成分含量反而降低，影响提取物有效含量。表8。由表8可看出在乙醇浓度60%、料液比120的不变条件下，随着提取温度的升高，吸光度值也在不断的增长，6070的增长程度是最大的，吸表8提取温度对水浴法提取黄酮效果的影响光度增长最大，但随着温度的继续升高，吸光度的增长程度越来越小，是因为随着温度的增加，提取出来的黄酮参与了其他的反响，故提取的增长率

14、变小了温度也不易太高，体积将会大量减少。表9。表9料液比对水浴法总黄酮提取效果的影响表9可见，浸提固液比在115至120的范围内，吸光度最高，但随后增加溶剂的量对吸光度的变化不大，在实际操作中，当浸提固液比过小时，提取液偏少，不利于过滤别离，因此选择浸提固液比在120较为适宜。由以上单因素实验可得出几个在实验过程中，对实验结果有显著作用的因素，他们分别是乙醇浓度50%、60%、70%，料液比115、120、125，提取温度60、70、80，运用这些条件做出提取工艺参数设计表表10，为下面的正交实验做好准备条件，见表11、12。表10提取工艺参数设计表表11水浴法提取黄酮L933实验表表12最正

15、确工艺条件确定表由表11可看出R料液比R提取温度R乙醇浓度，所以本实验料液比作为主要因素，K1、K2、K3中数据最大者对应的程度为最正确程度，即转化率最高。本实验的最正确程度组合是A1B23，即最正确工艺条件为乙醇浓度50%、料液比120、提取温度80。由表12可看出黄酮含量49.60g/g，比正交实验中的A1B22乙醇浓度60%、料液比120、提取温度80所提取出的黄酮含量还高，证明本次正交设计实验结论是合理的。3结论本文是通过对两种不同的提取方法对草珊瑚进展总黄酮的提取的研究，以便为以后的提取研究找出适宜的实验条件及设计。两种不同的方法，同样的浸提试剂，所提取的黄酮量是超声波法提取的多于水浴法提取的，实验得出结果：超声波法的最正确工艺条件为乙醇浓度50%、料液比115、提取时间45in，根据确定的最正确工艺条件，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量为69.25g/g。水浴法的最正确工艺条件为乙醇浓度50%、料液比120、提取温度80、提取2h，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量49.60g/g。超声波辅助提取的优点有：1所用的提取时间较水浴法缩短了两倍多；2实验过程中不用像水浴法一样，要注意温度的控制3；3所提取的黄酮含量比水浴提取高了28.38%。提取黄酮量,超声波法提取的多于水浴法,分析