硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响

1、硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响马丽娜惠延年王雨生张乐王静波徐建峰马吉献【摘要】目的：探究必然巨细的乳化硅油小滴可否影响视网膜色素上皮retinalpigentepithelial,RPE细胞的吞噬本领。要领：将硅油挤压通过一种微孔滤膜制成巨细相似的小滴。用酞箐蓝标识表记标帜硅油小滴。造就的人RPE细胞与硅油小滴，伴或不伴有血清，配合孵育24h。被细胞内吞的小滴在显微镜下计数。丈量人RPE细胞在体外吞噬硅油小滴的数目。效果：挤压通过这种微孔膜制成的硅油小滴至少不变5d，硅油小滴的直径为4.250.77。乳化硅油浓度差异，RPE细胞吞噬硅油小滴的数目有显着剂量依靠性，随浓度增高，吞噬

2、数目也增长。加有血清的硅油小滴使RPE细胞的吞噬本领进一步加强。结论：硅油小滴能刺激RPE细胞的吞噬本领，含有血清时对RPE细胞的吞噬本拥有进一步的刺激作用。【关键词】色素上皮眼硅油乳化吞噬EffetsfvesilesfsilineilnphagytsisfhuanretinalpigentepithelialellsinvitrKEYRDS:pigentepitheliufeye;silineil;eulsifiatin;phagytsis0弁言硅油又称为聚二甲基硅氧烷，理化性子不变。没有生物毒性、透光和屈光性好、浓重度高、能限定玻璃体腔内的增生细胞和生化介质的挪动，大概限定增生性玻璃体视网

3、膜病变，而且具有机器性按捺增生膜的牵引作用，能有用关闭裂孔。如今硅油普及用于治疗庞大孔源性视网膜分开，特殊是庞大视网膜增殖性疾玻但眼内恒久安排硅油可引起很多并发症，此中硅油乳化是较严峻的一种。硅油乳化是指小而不变的硅油小滴与玻璃体内硅油大泡分散并扩散进入眼构造的一种历程。此时，乳化硅油对限定玻璃体腔内的增生细胞和生化介质挪动的本领低落，关闭裂孔的本领也低落。在视网膜外貌的一些地方，硅油小滴黏附精细，很难用机器的要领将其冲洗干净。张少冲等1对玻璃体腔注射硅油患者的这些部位举行了视网膜光学干系断层扫描(ptialherenetgraphy,T)，创造均有视网膜下膜的形成，视网膜色素上皮细胞也有增殖

4、。乳化硅油大概刺激膜形成和随后的增生性玻璃体视网膜病变prliferativevitreretinpathy,PVR反响。吞噬细胞大概被硅油小滴活化，即吞噬等本领加强，并吞噬必然巨细的小滴。因此我们在体外用人眼视网膜色素上皮RPE细胞阐发硅油小滴对其吞噬活性的影响。1质料和要领1.2要领RPE细胞系为原代造就人RPE细胞，由第四军医大学西京病院王静波博士惠赠。细胞清醒后，Eagle造就液(delbesdifiedEaglesediu,DE,Gib,USA)中参加100L/L新生牛血清四序青产物、青霉素100103U/L、链霉素100103U/L，造就箱中37，50L/L2通例造就，越日调换造就

5、液继承造就。选择36代细胞用于实行。将对数生恒久的细胞按5108个/L密度接种于预置有盖玻片88的24孔板中，接种24h后调换造就液，每孔参加2L造就液。实行分两组，第1组参加DE造就液，第2组参加加有100L/L新生牛血清的DE造就液。别离向2组细胞中参加硅油含量为010l/LPBS液，空缺比拟，12.5,25.0,50.0L/L的染色乳化硅油液100L，通例造就24h，取出爬片，10l/LPBS液充实冲洗3次，40g/L多聚甲醛结实0.5h，用吸管汲取多聚甲醛轻轻冲洗爬片上残留硅油小滴3次，10l/LPBS液漂洗3次，待测。光学显微镜下不雅察，每张爬片随机取3个视野，每个视野至少计数50个

6、细胞，用图象网罗阐发体系(IagePrPlus6.0)盘算细胞内吞的染色硅油小滴来阐发RPE细胞对硅油小滴的吞噬作用。每个浓度设3个复孔，重复实行3次。统计学处置惩罚：接纳数据软件SPSS11.5处置惩罚，接纳t查验，举行两样本均数比力，以及LSD查验，举行多组样本均数比力，数据表现为。2效果3讨论RPE细胞具有多种庞大的生化成效。吞噬消化光感觉器外节脱落的膜盘，对外节的更新和光感觉器的存活至关紧张5，是其紧张的成效之一。这种选择性吞噬作用称为特异性吞噬。别的，RPE细胞还具有非特异性吞噬成效，即能吞噬无特异性区分位点的物质，如聚乙烯微球、胎盘兰染料、玄色素小滴等。非特异性吞噬与RPE细胞膜上

7、的慢速摄取受体有关6,7。细胞骨架在RPE细胞非特异吞噬时起必然作用。此中肌动卵白有助于RPE对异物的摄取；内吞物在RPE细胞内挪动至低级溶酶体有赖于微管的到场8。在恒久硅油添补的患眼中，RPE细胞与硅油小滴打仗，非特异性识别、并吞噬，大概引起一系列RPE细胞生物学举动的改变。我们在体外用RPE细胞与硅油小滴共孵育，不雅察细胞吞噬硅油小滴，效果表现RPE细胞有较强的吞噬活性。我们用乳化硅油液与RPE细胞共孵育，RPE细胞内吞硅油小滴的数目随硅油浓度递增而增长，而且没有表现显着的饱和状态，大概与实行选用乳化硅油浓度稍低有关。别的，如选用纯的PBS液作为比拟组，并未参加其他RPE细胞可识别、吞噬的

8、物质，因此，与其他物质比拟，硅油小滴可否加强RPE细胞的吞噬本领，以及其他物质刺激RPE细胞吞噬是否呈浓度依靠性，还需进一步实行证实。血清能刺激RPE细胞的吞噬活性。ayersn等9的研究表现，在RPE吞噬历程中，识别和摄取是高度特异化的历程，血清在吞噬历程中至关紧张。在比力RPE细胞和巨噬细胞的吞噬机制时，Irshik等10创造血清能适度的增长RPE细胞对细菌的吞噬。这种刺激作用大概与血清中含有多种活性因子有关。ieli等11报道，在血清刺激RPE细胞吞噬外节时，玻璃体结合卵白起必然作用。Hall等12以为RPE细胞的吞噬作用必要血清的存在。而血清中的Gas6，一种维生素K依靠的血清卵白，在此历程中可以完全交换血清。同时还创造卵白质S，也是维生素K依靠的血清卵白，与Gas6布局高度相似，在血液中的作用与Gas6相似。别的，Edards13创造，血清刺激RPE细胞吞噬作用仅产生在RPE细