复方脑得生中黄酮类成分的高效液相色谱指纹图谱研究

1、复方脑得生中黄酮类成分的高效液相色谱指纹图谱研究【摘要】目的采用高效液相色谱HPL法测定复方脑得生总黄酮的指纹图谱。方法采用D-101树脂别离纯化脑得生黄酮类成分。色谱柱为HypersilDS-184.6250，5；流动相为甲醇-乙腈-0.2磷酸水溶液，梯度洗脱；检测波长210n；流速1.0lin-1;柱温25；分析时间100in。结果指纹图谱中标示了23个共有峰，其峰面积之和大于总峰面积的90%，方法精细度、稳定性、重复性均符合指纹图谱有关规定。利用指纹图谱相似度测试软件，测定11批脑得生总黄酮指纹图谱相似度结果均在0.951.00之间。结论实验结果为脑得生制剂的质量控制提供了根据。【关键词

2、】复方脑得生黄酮类成分指纹图谱高效液相色谱法脑得生丸片收载于?中国药典?2022年版部，由三七、川芎、红花、葛根、山楂5味中药组成，具有活血化瘀、通经活络的成效。用于瘀血阻络所致的眩晕、中风，症见肢体不用、言语不利及头晕目眩；脑动脉硬化、缺血性脑中风及脑出血后遗症见上述证候者1。临床应用广泛,疗效确切。但其制备方法为传统消费工艺，质量可控性差，药物稳定性难以控制，因此对临床疗效和患者服用有较大的影响，不能适应现代临床用药要求。研究说明，脑得生的主要活性部位为黄酮类成分、三七总皂苷和川芎油2，其中葛根、山楂、红花所含黄酮类成分具有多种药理作用35。为保证制剂质量和临床疗效，前期进展了制剂中药材的

3、活性部位提取纯化的工艺研究。本研究以黄酮为主要分析对象，采用HPL法对脑得生总黄酮提取物进展了指纹图谱研究，为脑得生制剂的质量控制提供科学根据。1仪器与试药1100型Agilent高效液相色谱仪;BP211D电子天平sartrius公司。葛根素、羟基红花黄色素A对照品中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号分别为110752200209、111637202202；试剂均为分析纯，甲醇上海振兴化工一厂，乙腈国药集团化学试剂，磷酸武汉化学试剂厂；水为双蒸水。脑得生总黄酮提取物自制，批号070621，070630，070712，070719，070726，070703，070710，070717，

4、070724，070731,0708232方法与结果2.1色谱条件色谱柱HypersilDS-184.6250，5；流动相见表1；检测波长210n；流速1.0lin-1;柱温25。表1流动相梯度变化略2.2对照品溶液的制备称取葛根素、羟基红花黄色素A对照品适量，加40的乙醇配成浓度分别为0.081，0.147gl-1的溶液，即得。2.3脑得生总黄酮提取物的制备方法称取葛根、山楂和红花饮片共500g按处方组成，葛根山楂红花为26115791，70乙醇回流提取3次。第1次用乙醇5000l，回流提取2h；第2次用乙醇4000l，回流提取1h；第3次用乙醇3000l，回流提取1h。合并3次提取液，回收

5、乙醇至无醇味，放置过夜，滤过，溶液稀释至每毫升含生药0.1g，上D-101树脂柱1.5kg树脂，上样流速为2BVh-1，上样后先用5BV的蒸馏水冲洗，再用5BV40乙醇以3BVh-1流速洗脱，搜集乙醇洗脱液，浓缩至小体积，枯燥，即得。共制得11批。2.4供试品溶液的制备取脑得生总黄酮提取物约0.4g，精细称定，置50l量瓶中，加40的乙醇溶液超声溶解，定容至刻度，摇匀，即得。2.5测定方法分别精细汲取供试品溶液10l，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件操作，考察150in内供试品溶液的色谱别离情况，记录100in色谱图。结果见图1。2.6方法学考察2.6.1精细度与稳定性实验取同一供试品溶液批

6、号：070710，分别于0，2，4，6，8，10h进样测定。测定结果说明，其共有峰相对保存时间和峰面积比值的RSD均小于3，说明仪器的精细度良好，供试品溶液在10h内根本稳定。2.6.2重复性实验精细称取7号样品批号：0707106份，按上述供试品溶液的制备方法操作，进展测定，结果说明，各色谱峰的相对保存时间和相对峰面积比值的RSD分别为0.060.56，1.202.90，符合指纹图谱的要求。2.7指纹图谱及其技术参数2.7.1共有指纹峰的标定根据11个批次提取物的检测结果，比拟其色谱图。结果见图2。以相对保存时间标定其共有峰共23个，以8号峰为参照峰，测定各共有峰相对保存时间和相对峰面积的比

7、值，其RSD均小于3。转贴于论文联盟.ll.2.7.2非共有峰峰面积的比值计算非共有峰占总峰面积的比值。结果说明，其比值小于10，符合指纹图谱的要求。2.7.3主要色谱峰的鉴别在一样色谱条件下，测定葛根素对照品及羟基红花黄色素A对照品，并与样品指纹图谱中相应图谱峰进展比拟，发现样品指纹图谱中8号峰的保存时间与葛根素信号峰吻合，9号峰的保存时间与羟基红花黄色素A的信号峰吻合，故样品指纹图谱中8，9号峰鉴定为葛根素和羟基红花黄色素A。2.7.4强峰的标定根据指纹图谱技术要求，其强峰的总面积和占整个峰面积的70以上，且峰数占总峰数的1/51/3，比拟各批色谱图，其共有峰中的4，8S，9，10，11，

8、12号峰的总和占总峰面积的80%以上，故标定第4，S，9，10，11，12号峰为该指纹图谱的六强峰。2.8指纹图谱相似度评价采用药典委员会推荐得中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2022A)，对所得指纹图谱进展评价。结果见表2。表2不同批号提取物指纹图谱相似度评价略3讨论本研究按照?中药注射剂指纹图谱研究的技术要求?6采用HPL法对复方脑得生总黄酮提取物的指纹图谱及其技术参数进展了研究，获得了较满意的结果，标定了23个共有峰，方法学考察其精细度、稳定性、重复性均良好，说明所建立的复方脑得生总黄酮提取物HPL指纹图谱方法可行。运用指纹图谱相似度软件对复方脑得生总黄酮提取物HPL指纹图谱进展了相

9、似度计算，为客观评价其质量提供一定根据。实验中分别选用甲醇0.2磷酸水溶液、乙腈0.2磷酸水溶液、甲醇-乙腈0.2磷酸水溶液等系统进展梯度洗脱，结果选择甲醇-乙腈0.2磷酸水溶液进展梯度洗脱时，得到的色谱峰形较好，且较稳定。记录该色谱条件下150in色谱图，100in后无色谱峰出现，故色谱记录时间为100in。比拟了200400n所得的HPL图谱，结果在210n波长检测时，其HPL图谱中可见较多的色谱峰，同时各色谱峰别离度较好，故确定210n处波长为检测波长。11个不同批次提取物的指纹图谱具有较好的相似度、相对保存时间和相对峰面积的比值范围，从而为复方脑得生总黄酮提取物工艺稳定性提供重要根据，并为其产业化奠定基矗【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2022：572.2文莉，晏绿金，王光忠，等脑得生抗血栓挑选J.中国医院药学杂志，2022，284：281.3陈荔炟，陈树和，刘焱文.葛根资源、化学成分和药理作用研究概况J.时珍国医国药，2022，1711：