原发性血小板增多症骨髓病理学特征观察

1、原发性血小板增多症骨髓病理学特征观察原发性血小板增多症骨髓病理学特征观察ET是临床论文联盟.Ll.上较为少见的一种骨髓增殖性疾病yelprliferativedisease，PD，主要表现为骨髓巨核细胞增多、血小板持续增高，并伴有一系列临床病症。该病起病较为隐匿，容易误诊。目前国内对于ET的骨髓特点特别是关于其骨髓病理组织学改变报道较少。基于此,本文对北京大学人民医院血液病研究所85例ET病人的骨髓活检病理组织学特征并结合骨髓细胞学及分子生物学等检测结果进展了分析。1资料与方法1.1病例来源：2022-2022年北京大学人民医院血液病研究所诊治的ET患者85例；男36例，女49例。年龄19-8

2、1岁，中位年龄51岁。1.2骨髓样品搜集方法：骨髓活检针B65-01与髂后上棘分别采涂片标本和活检标本。骨髓细胞学采用瑞氏常规染色。骨髓切片采用HE、Gri常规染色。骨髓活组织块用苦味酸进展固定，经酒精梯度脱水后，采用Heapun系列包埋剂进展包埋制成切片，其中3u切片进展HE染色；5u切片进展Gri染色。在LIPUS光学显微镜下，对骨髓活检进展形态学观察，包括造血组织容量、粒、红系有无病态造血、前体细胞定位紊乱Abnrallatinfiaturepreursr,ALIP、巨核细胞分布及形态变化等。造血组织容量采用网形目镜测微器记点法计算，Gri阳性密度分级参考文献1。1.3网银纤维积分标准a

3、nharan等改良法+正常:偶见纤细或粗大之单一纤维丝，或在单一纤维丝散在分布的同时，可见血管周围的局限性纤维网络，或良性淋巴滤泡四周的局限性纤维网络。+：可见贯穿于切片大部分区域的纤细纤维网络，粗大纤维偶见；或者于血管及良性淋巴滤泡附近的局限性网硬蛋白纤维增多。+：可见弥漫性纤维网络，伴以散在分布的粗纤维增多现象。+：可见弥散性以粗纤维为主的网络形成，但胶原纤维之染色阳性。+：可见弥散性的粗纤维网络，伴以染色阳性的胶原纤维形成区。1.4染色体检测:利用G显带的技术对患者骨髓标本进展染色体分析的方法参见文献。21.4基因检测:基因检测JAT2-V-617F突变的方法参见文献。3其他观察指标：静

4、脉血检测血常规并进展涂片观察。并取骨髓检测染色体及交融基因。1.5统计学分析:采用SPSS13.0软件进展统计学分析。卡方检验用于评估两组间检出率的显著性。两组间差异应用单因素方差分析。P0.05被认为具有统计学差异。2结果2.1血常规检查:85例患者B中位数10.61109/L5.5-35.5109/L。Hb中位数138g/L68-192g/L。Plt中位数838109/L520-2023109/L。其中5例病人外周血涂片发现幼稚粒细胞。B计数增高10109/L患者47例。Hb增高者女150g/L，男160g/L18例。贫血Hb女110g/L，男120g/L患者6例。2.2骨髓细胞学检查:8

5、5例患者中骨髓增生活泼54例，增生明显活泼1例，极度活泼1例。骨髓增生低下21例。5例患者取材时出现干抽。所有患者粒、红两系均未见明显病态造血，且原始细胞分类计数均小于5%。全片巨核细胞计数中位数为780292只，以产板、颗粒巨核细胞为主。所有患者血小板均为成大堆分布，并可见大血小板。2.3骨髓塑料活检组织病理学检查:85例患者中，5例患者可见基质出血、水肿。造血组织容量造血组织容量(v%)=造血细胞组织击中点数造血细胞组织击中点数+脂肪细胞100中位数为60%20%95%。所有患者粒系均增生活泼，14例患者红系增生偏低下。7例患者可见前体细胞定位紊乱。所有患者巨核细胞均有不同程度异常增生10

6、只/高倍镜视野，其中30例患者巨核细胞为片状分布。70例患者可见明显巨核系病态造血，其中以宏大、过度及不规那么分叶核为主，38例患者可见小巨核细胞，但未见典型淋巴样小巨核细胞，1例可见单圆核及多圆核。Gri染色结果显示，81例患者为阳性，其中65例为网状纤维轻度增生+，16例患者骨髓可见明显纤维化+。2.4染色体及交融基因检测:85例患者中有76例检测了JAK2-V617F基因突变，51例阳性，阳性率为67.1%。75例患者检测了Br-ablP210交融基因表达情况，全部为阴性。79例患者进展了染色体检查，所有患者均未发现Ph染色体，但其中2例可见核型异常。我们进一步比照了JAK2-V617F

7、基因突变阳性患者和JAK2-V617F基因未突变患者巨核细胞形态改变及纤维化程度。结果发现，51例JAK2-V617F基因突变阳性患者中，有44患者86.3%可见巨核系明显病态造血过度及不规那么分叶核、小巨核、单园及多园核等，10例患者19.6%可见明显纤维化+，而25例JAK2-V617F基因未突变患者中，有20患者80%可见巨核系明显病态造血，有6例患者24%可见明显纤维化，两组患者均无明显差异P0.05。3讨论3.1巨核系异常。ET是一种主要累及巨核细胞系的PD，以女性多见，50-60岁为发病顶峰4。本病临床表现不一，主要有头晕、乏力、血栓形成及脾肿大等表现5。本文85例病人中，女性明显

8、多于男性，患者中位年龄为51岁，均与文献报道一致。本组患者骨髓细胞学中原始细胞分类计数正常，红系、粒系均未见明显病态造血。而巨核细胞那么明显增多，以颗粒、产板巨核细胞为主，易见胞体宏大且胞浆丰富。巨核细胞病态造血是ET的重要表现，我们在骨髓活检中发现，大部分病人可发现明显巨核系病态造血，其中以发现宏大、过度及不规那么分叶核细胞最为常见，部分病人也可观察到小巨核细胞，并偶可见到单园及多园核改变。而粒系、红系那么未见到明显病态造血现象，但个别患者8.2%可见到ALIP。3.2网状纤维增生:全部病例中绝大部分病人95.3%病人均出现不同网状纤维增生，可能是由于过度增生的巨核细胞或血小板释放生长因子(

9、plateletderivedgrthfatrPDGF)、转化生长因子(transfringgrthfatrTGF-)和表皮生长因子(epideralgrthfatrEGF)等纤维母细胞刺激因子导致纤维组织增生6。但大多数病人为网状纤维轻度增生，而19.8%的患者骨髓那么出现明显纤维化，这提示在伴明显纤维化ET的诊断过程中，需与原发性骨髓纤维化priaryyelfibrsisPF相鉴别，但IF患者骨髓活检中易出现明显胶原变性且巨核细胞增多且体积小为主7，而本实验组中，所有ET患者均未发现明显胶原变性，并且虽有部分患者可观察到小巨核细胞，但主要以宏大、过度及不规那么分叶核为主。这也提示骨髓液抽取

10、过程中，可能由于纤维化而出现干抽，因此在ET诊断过程中须结合骨髓细胞学和活检同时检查，以到达互补的作用。此外，骨髓巨核系病态造血比巨核细胞数量增多更具有诊断意义。3.3基因及染色体改变:本组病人中有67.1%的病人有JAK2-V617F基因的突变，JAK2-V617F基因的突变是PD较为特异的分子标志之一，在ET诊断中也具有重要意义8，11，12。美国2022年血液学年会推荐假设JAK2-V617F阳性，外周血PLT计数持续大于450109/L，并且骨髓巨核细胞系增生明显活泼者，即可诊断ET9,13。BR-AblP210交融基因是L特异性分子标志之一。因此，JAK2-V617基因突变结合BR-ABL基因结合检测不仅可区分原发性和继发性血小板增多症，而且还可除外L引起的血小板增多。为进一步讨论JAK2-V617F基因突变与ET骨髓病理改变之间有无相关论文联盟.Ll.性，我们还比照了JAK2-V617F基因突变阳性患者和JAK2-V617F基因未突变患者可见明显巨核系病态造血及骨髓纤维化的患者例数。结果发现，两组患者之间巨核系明显病态造血及骨髓纤维化的患者例数的差异均无显著性。结果提示，JAK2-V617F基因突变可能与ET患者骨髓巨核系形态及纤