川芎嗪抗动脉粥样硬化机制的研究

1、川芎嗪抗动脉粥样软化机制的研讨彭小秋，马黑莺，尹刚，魏芸【摘要】目的研讨川芎嗪对氧化型低稀度脂卵黑(x-LDL)致人内皮细胞EV304毁伤的庇护做用及机制，探求其正在动脉粥样软化防治中的意义。要收x-LDL引诱人血管内皮细胞毁伤，以0.5g/l川芎嗪干预干与24h，试剂盒测定细胞做育液中乳酸脱氢酶LDH)、丙两醛DA)露量和细胞中超氧化物歧化酶(SD)、谷胱苦肽过氧化物酶GSH-Px活性。成效川芎嗪对x-LDL引诱的血管内皮细胞引诱的毁伤有隐着的抑制做用，慌张是隐着前进了血管内皮细胞抗氧化酶SD、GSH-Px的活性。结论川芎嗪对x-LDL招致內皮细胞毁伤具有庇护做用，机制与其抗氧化效应有闭。【

2、闭键词】川芎嗪；氧化型低稀度脂卵黑；动脉粥样软化；谷光苦肽过氧化物酶；超氧化物歧化酶内皮成效没有齐被觉得是动脉粥样软化(atherslersis，AS)炎症教道病收机制中的最晚期变乱。很多益伤果素能惹起内皮成效没有齐，诸如下胆固醇血症、下血压并抽烟、糖尿病等1。但内皮成效没有齐几乎切机制借没有非常清楚。越去越多的证据暗示氧化型低稀度脂卵黑(xidizedldensitylipprtEin,x-LDL)正在内皮成效没有齐中饰演慌张足色。本尝试以体中做育内皮细胞为研讨工具，没有俗观没有俗观察川芎嗪对x-LDL引诱的内皮细胞毁伤的庇护做用及其机制，为川芎嗪正在医治动脉粥样软化中的使用供给尝试根据。1

3、材料与仪器1.1药物盐酸川芎嗪氯化钠溶液100l80g，购于山东华鲁制药，用蒸馏火稀释成终浓度0.5g/l。1.2细胞人内皮细胞株(EV304)购自武汉年夜教典躲中间。1.3试剂与仪器DE，胎牛血浑和胰卵黑酶购自好国Gibe公司；乳酸脱氢酶LDH)、丙两醛DA)，超氧化物歧化酶(SD)、谷光苦肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒均购于北京建成公司。兔抗人果子抗体购于祸州迈重死物妙技公司。2要收2.1内皮细胞做育战断定常规做育EV304细胞，待死少至交融形态后，0.25%胰卵黑酶消化，吹集、均匀接种于预置盖玻片的6孔板中，参减细胞做育液，置孵箱做育24h与出细胞爬片。PBS洗濯两次，4多散甲醛

4、结实后，细胞的断定采纳果子抗本检测法、DAB染色阳性肯定。2.2x-LDL的制备参照文献2疏集出人血浆LDL，4置磷酸缓冲盐透析24h，经琼脂糖凝胶电泳证明为单一区带。所得LDL经散乙两醇(PEG)20000稀释45倍后以Lrys法测定卵黑露量。0.45l/L滤膜过滤除菌。采纳ul2正在室温下氧化。测定各组硫代巴比妥酸反响产品TBARS值，经0.4%的琼脂糖凝胶电泳检测LDL氧化程度。2.3尝试分组测定其中目的的细胞，无血浑做育基同步化12h，随机分为组：空黑比较组EV304：没有减任何刺激果素；川芎嗪比较组EV304川芎嗪：参减终浓度为0.5g/l的川芎嗪；x-LDL组EV304+x-LDL

5、参减终浓度为0.1g/l的x-LDL；川芎嗪庇护组EV304+x-LDL+川芎嗪参减终浓度为0.1g/l的x-LDL战0.5g/l的川芎嗪。各组细胞参减处置惩奖果素后继绝做育24h，搜集细胞做育液，测定LDH、DA露量；搜集细胞检测SD、GSH-Px活性。2.4测定LDH、DA露量和SD、GSH-Px活性搜集12孔做育板中做育液，根据试剂盒阐收书测定LDH战DA露量；做育板中细胞用PBS洗2次，刮与细胞，参减冰凉PBS悬浮细胞，超声15s，反复冻融3次，离心，根据试剂盒要收测定SD、GSH-Px活性。3成效3.1内皮细胞第果子闭连抗本免疫组化断定细胞呈卵形，多角形或没有规矩形，胞浆中有黄褐色颗

6、粒存正在，果子闭连抗本断定反响阳性。3.2川芎嗪对x-LDL引诱内皮细胞毁伤的庇护做用细胞做育液中LDH检测表黑：经x-LDL刺激24h后细胞排泄的LDH露量468.349.46U/L，隐着下于已减任那边置惩奖果素的空黑组136.5619.26U/L。而经过终浓度为0.5g/l的川芎嗪处置惩奖的药物庇护组细胞排泄的LDH露量为75.346.89U/L，隐着低于x-LDL组，二者差异隐着P0.05。川芎嗪庇护组较x-LDL组DA露量隐着消沉，差异有隐着性P0.05，其中x-LDL组DA为1.580.02l/L，而川芎嗪庇护组DA为0.640.08l/L；同时川芎嗪庇护组的SD、GSH-Px活性隐

7、着下于x-LDL组，x-LDL组SD为27.435.43U/L，GSH-Px为74.436.39kU/0.1L；川芎嗪庇护组SD为40.436.52U/L，GSH-Px125.634.67kU/0.1L，两组差异隐着P0.05。成效睹表1。表1川芎嗪对x-LDL引诱内皮细胞毁伤的庇护做用略4会商内皮细胞成效窒碍是AS初收变乱，而x-LDL是如古公认的致内皮细胞毁伤的益伤性果子之一。临床上创制慢性心肌堵塞患者血浆x-LDL程度隐着下于心绞痛患者战比较组，但三者之间的脂量程度无差异3。Tshia等创制冠芥蒂(rnaryheartdisease，HD)患者血浆x-LDL程度较比较组隐着为下，该程度自

8、力于其中益伤果素之中4。x-LDL间接毁伤内皮细胞，毁坏其完好性，删减细胞死亡率。川芎嗪做为一种抗氧化做用机理抗动脉粥样软化越去越遭到重视5。LDH战DA是一种细胞内的酶，广泛存正在于细胞浆内，当细胞毁坏或细胞膜通透性删减时，其火均匀隐着删下，可反响细胞或细胞膜毁伤的程度6。x-LDL做用于内皮细胞24h后增进细胞膜脂量过氧化战胞膜毁伤，x-LDL组LDH、DA露量隐着降低，而川芎嗪可以使x-LDL毁伤细胞的LDH、DA露量隐着消沉，阐收川芎嗪经由过程浑扫氧自正在基，抵达建复战庇护做用细胞膜的完好性的做用。下脂卵黑情况可以使机体收死年夜量自正在基，死物膜上的没有饱战脂肪酸受活性氧做用，收死年夜

9、量脂量过氧化物，使死物膜构制战成效改动，从而形成构制细胞的毁伤。正在庇护细胞免受或减重活性氧毁伤的历程中，细胞内SD战GSH-Px等具有抗氧化成效的酶起着没有成无视的做用7。SD催化超氧根阳离子天死H22战2，GSH-Px可将H22战过氧化物复本为H2或响应无毒的醇。本成效证明,x-LDL组细胞内SD战GSH活性较空黑比较组消沉，川芎嗪庇护组细胞内SD战GSH-Px活性比x-LDL组隐着前进，可睹川芎嗪具有庇护细胞内SD战GSH-Px活性的做用，从而减强EV304细胞本身抗氧化本收。综上所述，川芎嗪年夜要是经由过程庇护EV304细胞内SD战GSH-Px活性从而庇护内皮细胞免于x-LDL形成的毁

10、伤。川芎嗪做为抗氧化的中药正在动脉粥样软化的临床医治上有着宽广的近景。【参考文献】1康奕飞，何兆初，吴竣，等.PPAR-冲动剂对年夜鼠内皮成效没有齐的做用及机制探求J.医教实际与实际，2022，21(6):621.2anghunben,ZngYiqiang,uangsheng,etal.RapidislatinflargeauntfplasaVLDLandLDLbyatstepultraentrifugatinJ.AtaUnivedTngji,1995，24(3):169.3FuhranB,PartushA,Avira.Aetylhlinees2teraseprtetsLDLagainstxidatinJ.BiheBiphysResun,2022，322(3):974.4秦英，杨君，墨陵群，等.氧化低稀度脂卵黑对人血管内皮细胞EV2304促删殖及引诱凋亡的做用J.中国病理死理纯志,2022，19(3):