生殖工程试管婴儿

1、关于生殖工程试管婴儿第一张，PPT共六十页，创作于2022年6月 生殖工程发展简史200年前，John Hunter用注射器将一位尿道下裂的丈夫的精液注入妻子的阴道内怀孕。1953年，第一例冷冻精子人工授精成功，但人工授精技术一直到70年代才广泛应用于临床1983年，我国首个利用冷冻精子人工授精婴儿出生。1984年，美国William Pancoast首例报道供精人工受孕.1978年，世界第一例试管婴儿Louis Brown在英国剑桥大学诞生，开创体外授精治疗不孕新的里程碑。1988年，我国第一例试管婴儿出生第二张，PPT共六十页，创作于2022年6月第一节 人工受精人工受精：收集丈夫或自愿献

2、精者的精液，由医师注入女性 生殖道以达到受孕目的的一种技术。解决男性不育的主要方法必须具备的三个条件： 足够数量和活力的精子 正常的排卵 至少一条输卵管通畅和功能正常第三张，PPT共六十页，创作于2022年6月一、分类 依据精液来源分为：夫精人工授精（AIH）：使用丈夫精子供精人工授精（AID）：自愿献精者的精子 依据操作方法：子宫人工授精：宫腔内授精、宫颈内授精、阴道内授精输卵管内精液灌注：是人工授精的一种新方法第四张，PPT共六十页，创作于2022年6月二、接受人工授精妇女的条件 有规则的月经周期 有正常排卵 输卵管必须通畅 生殖器官无严重疾患三、AID供精者的选择 挑选体力和智力俱佳的已

3、婚青壮年男性 仔细检查精液质量，排除一切遗传病和性传播性疾病 供方与受方不相识 兼顾供者血型、身高、肤色及头发颜色是否与患者丈夫一致第五张，PPT共六十页，创作于2022年6月五、人工授精治疗程序（一）精液的采集和处理逆行射精者：采精前每4小时服碳酸氢钠1克，使尿液pH值达 到7.27.7，排空尿液，冲洗膀胱，诱导排精， 取膀胱内容物，离心浓缩至1ml立即进行人工 授精 精液量及精子少的患者：多采集几次浓缩后进行人工授精精液不液化：授精前加糜蛋白酶或胰蛋白酶使之液化精子活力差：加入咖啡因，终浓度为7.2mmol/L, 提高精子活 力，提高精子受精能力。第六张，PPT共六十页，创作于2022年6

4、月（二）人工授精的方法1、子宫人工授精宫腔内授精：处理过的精子直接送入宫腔宫颈内授精：将精液注入宫颈内阴道内授精：将精液注入子宫颈周围 将宫颈盖上宫颈杯，将精液注入杯中，杯留 放24小时2、输卵管内精液灌注原理：封闭子宫颈口后，向宫腔内注入4ml处理过精子悬液，利用子宫腔压力，使输卵管内口张开，精液进入输卵管。第七张，PPT共六十页，创作于2022年6月第二节：试管婴儿的培育方法第一代试管婴儿：体外受精-胚胎移植术 1978 英国 1988 中国 第二代试管婴儿：单精子卵细胞浆内显微注射授精技术 1992 比利时 1996 中国 第三代试管婴儿：胚胎种植前的遗传学诊断 1990 1999 中国

5、第四代试管婴儿：核移植技术 1997 英国 2002年 中国第八张，PPT共六十页，创作于2022年6月一、第一代试管婴儿技术 即常规的体外授精-胚胎移植(IVF-ET) 主要解决女性因素的不育。主要应用于： 双侧输卵管缺如或完全阻塞，估计治疗效果差或经治疗无效者； 行宫腔内人工授精3-6次未受孕者； 不明原因不孕者； 需要赠卵，并有受孕的其它基本条件者。此项技术于1976年创立于英国，世界和中国的第一例试管婴儿分别于1978年和1988年诞生。第九张，PPT共六十页，创作于2022年6月二、第二代试管婴儿技术 即单精子卵细胞浆内显微注射授精技术(ISCI)。 依靠显微注射系统，选择吸取单个活

6、精子，直接注入卵母细胞内进行人工授精，主要解决男性因素的不育。主要应用于： 严重的男性因素不育(严重少精症、弱畸精症、阻塞性无精症、精子成熟障碍)； 常规的体外授精周期中，卵子不受精或受精率低下，可用该技术作为补救手段。 此项技术于1992年创立于比利时，世界和中国的第一例第二代试管婴儿分别于1992年和1996年诞生。它对家畜的育种和珍稀动物的拯救也具有重要的应用价值。第十张，PPT共六十页，创作于2022年6月三、第三代试管婴儿技术 即胚胎移植前的遗传学诊断技术(PGD) 显微注射技术虽然提高了试管婴儿技术的成功率，但也加大了胎儿畸形的风险。在前两代技术的基础上，对植入前的胚胎进行筛选，选

7、择健康、正常、无遗传性疾病(优生)的胚胎植入子宫内。这一技术和显微注射技术的联合运用，被称为第三代试管婴儿技术。主要适应用于：遗传性疾病、遗传高危夫妇。 世界和中国的第一例第三代试管婴儿分别于1990和1999年诞生。第十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月四、第四代试管婴儿技术， 即核移植技术 通俗地讲，就是克隆人。但存在两个问题：操作时带入外源DNA、受体细胞线粒体遗传。另外，需要指出的是隆人已经不是传统意义上的试管婴儿，它只是男方或女方某一方的复制品，而不是精子和卵子结合的产物。 随着国外克隆羊(多利)的诞生，2002年2月中国诞生了克隆牛。现在，克隆人已经不存在技术问题，存在的只

8、是伦理道德问题。美国科学家于2001年10月首次成功克隆出早期人类胚胎，立即招来了许多抨击。目前，国际社会正准备讨论通过一项“关于禁止克隆人的国际公约”，公约将规定除非由于医治某种疾病(不孕症除外)，否则不能进行克隆人研究第十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月一、常规试管婴儿培养技术第一代试管婴儿 体外授精-胚胎移植术：体外让卵子与精子结合形成受精卵，在体外继续培养8细胞左右，再将胚胎重新移植到母亲子宫中，继续发育生长直至足月分娩。主要解决女性因素的不育。适应症： 双侧输卵管缺如或完全阻塞，估计治疗效果差或经治疗无效者； 行宫腔内人工授精3-6次未受孕者； 不明原因不孕者； 需要赠卵，

9、并有受孕的其它基本条件者。 第十三张，PPT共六十页，创作于2022年6月一、常规试管婴儿培养技术第一代试管婴儿 体外授精-胚胎移植术：体外让卵子与精子结合形成受精卵，在体外继续培养8细胞左右，再将胚胎重新移植到母亲子宫中，继续发育生长直至足月分娩。主要解决女性因素的不育。（一）主要适应症和禁忌症：适应症： 输卵管病变所致不孕：双侧输卵管缺如或完全阻塞； 行宫腔内人工授精3-6次未受孕者； 不明原因不孕者； 子宫内膜异位症不孕； 第十四张，PPT共六十页，创作于2022年6月适应症： 无排卵或黄素化卵泡未破裂综合征； 子宫颈病变，阻碍精子进入； 一方生殖细胞缺如； 子宫发育异常或缺如； 选择性

10、生育。禁忌症： 年龄：40岁以上不适于IVF； 过度肥胖者； 高催乳素血症造成的不孕； 严重的盆腔粘连者。 第十五张，PPT共六十页，创作于2022年6月（二）卵子的收集1、获得可受精卵的方法 自然周期法： 药物诱发超数排卵法： 诱发排卵常用药物及其作用机制克罗米酚、人绝经期促性腺激素（hMG）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）、FSH2、采卵的方法 腹腔镜手术取卵 超声波导向采卵第十六张，PPT共六十页，创作于2022年6月3、卵子成熟度的判定 从理论上讲，成熟的卵母细胞在排卵前已完成第一次成熟分裂，第一极体的排出是卵成熟的标志。经验性评估卵母细胞成熟度的方法 根据卵丘细胞的伸展度 依据卵泡的大

11、小 根据卵丘细胞内脂肪颗粒多少 根据卵-放射冠-卵丘复合体的特点 成熟型：直径35mm或更大，卵丘细胞之间距离大，放 射冠分散，透明带可见。 未成熟型：直径11.5mm，紧密放射冠，看不清透明带 第十七张，PPT共六十页，创作于2022年6月成熟的卵母细胞第十八张，PPT共六十页，创作于2022年6月未成熟卵母细胞第十九张，PPT共六十页，创作于2022年6月（三）精子的准备1、精液的采集与人工授精相同2、精液分析 形态、细菌、免疫、细胞遗传学关于精子受精能力的评价： 保持直线性向前运动能力的精子受精能力强 正常精子多而畸形精子少，受精能力强穿卵实验阳性，受精能力强3、精液的加工处理 目的：洗

12、涤精子、去除精浆、增强精子活力、精子获能第二十张，PPT共六十页，创作于2022年6月穿卵实验阳性第二十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月（四）体外授精及体外培养1、孵育卵细胞：使卵母细胞在体外进一步成熟2、检查精子活力，调节精子浓度3、人工授精：向孵育好的卵细胞中加入适量精子 510万4、换液培养：人工受精后1416h观察，如出现雌、雄原核，卵周隙有第二极体，表明受精成功，随后将受精卵转移到生长培养基中继续培养，使其卵裂并发育，以便适时施行胚胎移植。第二十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月（五）胚胎移植与妊娠监护 ET是试管婴儿试验中的最后一步，也是最重要一关1、胚胎的移植：

13、216细胞（卵裂球）时移植；24胚胎/次2、妊娠监护：放射免疫方法检测血、尿中hCG 6天：血中hCG升高，8天：尿中hCG升高 3周：超声检查胚囊位置，5周：胚胎大小和胎心波动3、影响ET的因素： 移植时，母体子宫内膜与胚泡发育不同步； 穿刺取卵时黄体受损，使黄体功能不足； 移植过程中，胚泡损伤或子宫内膜损伤第二十三张，PPT共六十页，创作于2022年6月4、提高受精率，卵裂率，早期胚胎率 关键在于不断提高体外配子及胚胎培养技术 共培养技术提高受精卵、胚胎质量及妊娠率。 共培养：指卵子和精子体外受精后，置于一定浓度共培养细 胞的条件培养基中共同培养。共培养细胞：自体细胞或异体细胞 子宫内膜细

14、胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞第二十四张，PPT共六十页，创作于2022年6月（六）“试管婴儿”的成功率 1、成功率：体外受精率：85%90% 卵裂率（体外培养成功率）：80% 胚胎移植后妊娠率：20%25%2、畸形发生率：19871991年总计出生6248例试管婴儿，有 某种畸形的新生儿187例，占总数的2.8%。 这与自然妊娠分娩的新生儿畸形发生率相当。 第二十五张，PPT共六十页，创作于2022年6月二、显微授精第二代试管婴儿 主要目标：帮助精子穿过透明带 显微授精技术 透明带钻孔技术（PZD） 透明带下授精（SUZI） 卵胞浆内单精子显微注射（ICSI） 针对男性少、弱、畸精症或阻塞性无

15、精症第二十六张，PPT共六十页，创作于2022年6月（一）显微授精技术发展简史1962年 Hiramoto 首次将海胆精子直接注入海胆卵中1966年Graham将青蛙精子注入未受精的蛙卵中，PN 形成1988年第一个通过精子微注射受精的子代动物（小鼠）诞生1988年lanzendorf等人首次报道人精子直接注入卵胞浆中PN形成1992年Palermo等人报道卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）婴儿诞生1996年我国首例ICSI在中山医科大学获得成功（庄广伦） 第二十七张，PPT共六十页，创作于2022年6月（二）Intracytoplasmic Sperm Injection(ICSI)定义：指

16、用显微操作术将单个精子注入卵胞浆的过程适应症： 严重精子质量异常 既往常规IVF失败患者 严重的抗精子抗体患者 无精子症患者 未成熟卵以及冷冻保存的卵母细胞 常规IVF失败未受精卵母细胞第二十八张，PPT共六十页，创作于2022年6月ICSI操作程序促排卵和卵子的采集卵子体外培养精子的采集及处理显微注射 精子制动 卵胞浆内精子注入 放开卵母细胞，培养1624 h 48-细胞或囊胚后，移植母体子宫中第二十九张，PPT共六十页，创作于2022年6月第三十张，PPT共六十页，创作于2022年6月第三十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月第三十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月第三十三张

17、，PPT共六十页，创作于2022年6月影响ICSI 成功的主要因素ICSI 成功与否主要看受精、卵裂及妊娠率，除技术因素外，径自、卵子状态及卵子激活等都直接影响其成功。 显微操作技术对ICSI 的影响 体外操作过程不超过5分钟 注射针内径58微米之间 固定针外径120微米，内径1540微米 精子状态对ICSI的影响第三十四张，PPT共六十页，创作于2022年6月影响ICSI 成功的主要因素 卵子对ICSI的影响 卵子状态 卵母细胞成熟程度 女性年龄影响卵子质量 卵子激活 以放出第二极体、形成雌雄原核为标志并最终启动卵子代谢的一系列变化 第三十五张，PPT共六十页，创作于2022年6月ICSI的

18、风险与出生缺陷与ICSI操作无关 卵巢过度刺激综合征、多胎妊娠、异位妊娠与ICSI操作有关 基因缺陷垂直传播 外源DNA污染第三十六张，PPT共六十页，创作于2022年6月三、细胞核移植技术-第四代试管婴儿（一）、概论什么是克隆？“clone”：单性生殖，本意是指通过无性形式由单个细胞产生的和亲代非常相似的后代。 动物克隆：指一个动物经无性繁殖或孤雌生殖而产生的 多个后代，克隆的所有成员遗传物质完全相同。第三十七张，PPT共六十页，创作于2022年6月人有无自然单性生殖？古代传说：轩辕黄帝之母“感电光绕头而有娠”，生黄帝1955年，Spuwary,相信人类有单性生殖至今尚无一例经得起严格的科学

19、检验生物进化证明：有性生殖是从无性生殖发展而来，刻意对人进行无性生殖意味着退化！第三十八张，PPT共六十页，创作于2022年6月细胞核移植是指将发育不同时期的胚胎或成体细胞核经显微手术和细胞融合方法移植到去核卵母细胞中，或将体细胞核直接注入去核卵母细胞中，重新组成胚胎并使之发育成子代个体。克隆技术之所以引人关注，是因为它在医疗和畜牧业方面有深远意义第三十九张，PPT共六十页，创作于2022年6月克隆研究大事记1938年，德国科学家Spemann首次提出动物细胞克隆设想1952年，美国学者Briggs和King首先在青蛙身上进行克隆实验1970年，克隆青蛙取得突破进展1981年，胚胎克隆鼠成功1

20、984年， 胚胎克隆羊成功第四十张，PPT共六十页，创作于2022年6月第四十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月克隆研究大事记1994年，用发育120个细胞阶段的胚胎细胞核移植成功，获得克隆牛1997年，英国Wilmut体细胞克隆羊成功 “多莉”1998年，英国PPL医疗公司，克隆牛“弗逊先生”1998年，克隆鼠克隆出克隆鼠1999年，美国克隆第一只雄性鼠2000年，美国牛耳皮细胞克隆6头牛2001年，美国克隆出第一个灵长类动物恒河猴第四十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月第四十三张，PPT共六十页，创作于2022年6月二、哺乳动物细胞核移植方法（一）重构卵的形成1、供体细胞和

21、受体细胞的选择和处理 供体细胞：即细胞核的来源 早期胚胎细胞、干细胞、体细胞 受体细胞：提供去除核后的只含有细胞质的 细胞 MII期卵母细胞、受精卵、融合后2细胞胚第四十四张，PPT共六十页，创作于2022年6月2、细胞核移植 包括受体细胞核去除和供体细胞核移入受体细胞核的去除移核 带下移植 胞质内注射第四十五张，PPT共六十页，创作于2022年6月第四十六张，PPT共六十页，创作于2022年6月细胞融合融合方法：化学融合、病毒融合、电融合 电融合：通过外加脉冲电场来改变细胞膜通透性，从而促进膜内外物质交换，当细胞膜紧密接触时，电击可以使接触膜上形成孔洞，导致细胞融合。融合液：0.27mol/

22、L蔗糖液、甘露醇溶液电融合方法第四十七张，PPT共六十页，创作于2022年6月（二）重构卵的活化处理一般电融合完成后，卵子因电刺激而被激活，但也有的核移植重构卵还需进一步充分激活才能发育。应用较多的化学激活剂有7%乙醇、离子霉素、星形孢菌素等第四十八张，PPT共六十页，创作于2022年6月第四十九张，PPT共六十页，创作于2022年6月（三）移核胚的体外培养和胚胎移植与IVF-ET相同体外培养一段时间观察发育能力将胚胎输入输卵管或子宫克隆动物诞生第五十张，PPT共六十页，创作于2022年6月第五十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月（四）影响核移植的一些因素受体因素 卵母细胞胞浆 卵母细胞活化时间 卵母细胞年龄：不成熟或老化 卵母细胞去核时去掉胞浆的多少第五十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月四）影响核移植的一些因素供体因素：供体核是克隆的主体，而受体无核胞浆只是提供发育的一个环境，因此供体细胞是影响核移植胚发育的更关键因素。供体细胞的种类、分化程度和其所处细胞周期均影响核移植胚发育。第五十三张，PPT共六十页，创作于