非霍奇金淋巴瘤患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞研究

1、非霍奇金淋巴瘤患者外周血CD4+CD25high调治性T细胞研究刘莉，姚军霞，丁乾，黄士昂【摘要】本研究阐发B细胞非霍奇金淋巴瘤B-NHL患者外周血T细胞亚群及D4+D25high调治T(Tr)细胞比例及其变革纪律，开端探究B-NHL免疫按捺机制，以及化疗对此免疫按捺成效的影响。接纳流式细胞术检测42例初治B-NHL患者、36例化疗后达R/PR患者及15例正常康健者比较组外周血D3+、D4+、D8+和D4+D25highT细胞的比例。结果表现：B-NHL患者D3+及D4+T细胞比例、D4/D8比值均低于正常比较组，它们依次为68.3315.27%，比较(72.069.26)%；(34.4712

2、.84)%，比较(42.459.2)%；1.360.26，比较1.920.20，但D4+D25highTr细胞比例显着高于正常比较组，为4.101.21%，比较(2.041.03)%，P0.001。化疗后组D4/D8比值低于化疗前组P0.05；而外周血D4+D25highTr细胞比例，明显高于化疗前组和比较组P0.01。结论：B-NHL初治化疗前及化疗后患者外周血D4+D25highTr细胞比例都明显升高，提示D4+D25highTr细胞大概是B-NHL患者免疫按捺的紧张缘故原由之一。【关键词】非霍奇金淋巴瘤D4+D25highRegulatryTellsinPeripheralBldfPat

3、ientsithBellNn-HdgkinsLyphaKeyrdsnn-Hdgkinslypha；T-ellsubset；hetherapy/raditherapy；D4+D25highregulatryTells近期动物实行创造一个有奇特免疫调治成效的细胞亚群:D4+D25+调治性T(Tr)细胞，它不但能按捺自身免疫性疾病产生，还大概到场肿瘤免疫的调治；该细胞通过与细胞直接打仗发挥作用，而不依靠于其排泄的细胞因子。肿瘤情况中D4+D25+调治性T细胞比例增长，导致肿瘤免疫失调1。而正凡人外周血中重要是表达高程度的D25的D4T细胞D4+D25high，后者具有与小鼠体内D4+D25+调治性细

4、胞免疫调治的作用2。本研究接纳流式细胞术阐发初治化疗前及多程化疗后B细胞非霍奇金淋巴瘤B-NHL患者外周血D4+D25highTr细胞比例及其变革的特点，开端探究其与肿瘤产生、生长的干系及其临床意义。质料和要领临床病例本组78例B-NHL均为2002年10月-2022年2月在华中科技大学协和病院肿瘤中央及协和病院血液病研究所门诊/住院患者，均经病理学确诊。此中初治化疗前患者42例，经46周期HP方案化疗达R/PR患者36例。全部患者3月内未担当输血和其他治疗，PS状态1。比较组为我院体检康健者15例，男9例，女6例，年事26-68岁，均匀48.212岁表。Table1.linialharate

5、ristisfB-NHLpatientsandhealthyntrls略重要试剂PE标识表记标帜的鼠抗人D4、D8抗体，FIT标识表记标帜的鼠抗人D25、D3抗体，同型比较别离为PE标识表记标帜的鼠抗人IgG1免疫球卵白，FIT标识表记标帜的鼠抗人IgG1免疫球卵白，均为美国BetnDikinsn公司产物。要领全部不雅察工具均于清早空腹抽取静脉血2l，EDTA抗凝。应用荧光直接标识表记标帜法及流式细胞仪检测外周血单个核细胞PBN膜外貌D3、D4、D8、D25。取差异荧光标识表记标帜的单克隆抗体各20l，别离参加100l肝素抗凝的外周血中，室温下孵育15分钟，参加红细胞裂解液，用PBS洗涤2次，

6、用流式细胞仪BetnDikinsn公司，FASalibur检测，ellquest软件阐发数据，记载阳性细胞百分率，减去非特异比较值。统计学处置惩罚SAS软件举行单因素方差阐发比力化疗前组、化疗后组、正常比较组外周血T细胞亚群的差异。以P0.05界说为有统计学意义。结果B-NHL化疗前组外周血调治T细胞比例化疗前组患者D3+、D4+T细胞及D4/D8比值低于正常比较组，但其D4+D25highTr细胞比例显着高于正常比较组表2。D4+D25highTr细胞D45RA-，D69-流式细胞图见图1。B-NHL患者外周血D4+D25+highTr细胞特点与小鼠体表里周血D4+D25+highTr细胞程

7、度差异，正凡人外周血高表达D25+的D4+T细胞D4+D25+highTr细胞仅占全部D4+T细胞的(2.041.03)%，呈尾状，染色较淡，与外洋文献报道的1%-2%同等2。B-NHL患者外周血D4+D25+highTr细胞比例显着升高。统计学有极明显差异P0.01。B-NHL病人和正凡人的D4+D25+highTr细胞的流式细胞图见图2。Table2.parisnftheTellsubtypesbeteenthegrupfbefreandafterhetherapy，andhealthyntr略B-NHL化疗后组外周血调治T细胞比例化疗后组患者D3+、D4+T细胞及D4/D8比值均低于化疗

8、前组和正常比较组P0.05，但其D4+D25highTr细胞比例显着高于化疗前组和正常比较组P0.01表2。讨论B-NHL患者普及存在着免疫按捺，研究淋巴瘤患者的免疫按捺程度对付订定更公正的综合治疗方案具有紧张的引导意义，但是如今尚无抱负的免疫评估指标能正确地反响机体的免疫成效状态。D4+D25+Tr细胞是比年创造的一种新型免疫按捺细胞，1995年由Sakaguhi等3初次报道，其免疫按捺机理如今尚不完全明晰。如今以为，自然D4+D25+Tr细胞泉源于胸腺，但也可以在连续性抗原刺激及IL-10等细胞因子条件下在外周血中诱导产生4。胸腺选择使D4+D25+Tr细胞具有免疫无能性和免疫按捺性两大成

9、效1，通过与细胞直接打仗发挥其免疫按捺作用，如按捺D4+和D8+T细胞的活化和增殖，按捺D4+D25-T细胞、NKT细胞的增殖及排泄IL-2的成效，按捺D8+影象性T细胞的反响本领，下调D的外貌共刺激分子的表达，低落抗原递呈的服从等5-7。转录因子NFAT2和NFAT3在D4+D25+Tr细胞按捺D4+T细胞中发挥紧张作用8。在癌症患者中，很多由自体同源T细胞识别的肿瘤相干抗原已被证明是正常的自体身分，而不是突变基因的非常产物，这表白肿瘤免疫在必然程度上也是一种自身免疫4。因此，D4+D25+Tr细胞大概具有按捺肿瘤免疫的作用。它的断定被以为是比年免疫学范畴的庞大打破，也是如今免疫学范畴的研究

10、热门之一。随着研究的深化，比年创造在人类D4+D25highTr细胞发挥强盛的免疫调治成效2，并且具有高度均一性，98%以上的D4+D25highTr细胞表达D45R，不表达D45RA9。关于D4+D25+Tr细胞在肿瘤患者免疫按捺方面的临床研究外洋已有报道，如在卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌等多种肿瘤患者的外周血和肿瘤局部中D4+D25+Tr细胞身分增长11-13。但是，关于D4+D25highTr细胞在肿瘤患者免疫按捺方面的临床研究如今尚未见报道。本课题组研究结果表现：正凡人外周血中D4+D25+highTr细胞占全部D4+T细胞的(2.041.03)%与外洋文献报道同等(1%-2%)2。4

11、2例B-NHL患者外周血的D4+D25highTr细胞比例增长，D3+及D4+T细胞比例显着低于正常比较组，造成B-NHL的细胞免疫成效按捺。但是本研究未创造B-NHL患者外周血中D4+D25highTr细胞比例与患者PS状态、临床分期、病理范例之间存在显着相干性，这大概与病例数较少有关。本实行从细胞免疫方面研究创造，化疗后D4+T细胞淘汰、D8+T细胞升高、D4+/D8+比值落落及D4+D25highTr细胞增高等，说明化疗对B-NHL患者免疫体系有显着按捺作用。D4+D25highTr细胞比例的升高大概是化疗后免疫机制进一步受按捺的重要机制之一。D4/D8比值是如今临床上最常用的反响免疫成

12、效状态的指标，但很多研究报道，该指标与患者的分期、肿瘤负荷、PS状态及患者的保存之间没有很好的相干性13。另一方面由于D4+T细胞和D8+T细胞各自包罗了很多成效各异的细胞群体，因此D4/D8比值不成能全面反响机体的免疫成效状态。本研究创造，D4+D25highTr细胞比例与临床不雅察结果更具有较好的同等性。因此，D4+D25highTr细胞比例大概是一个较好的反响细胞免疫成效状态的参考指标，有望在临床上用于免疫成效的监测。由于D4+D25highTr细胞在人类肿瘤免疫按捺中的紧张性，它在人类肿瘤治疗中的代价也日益受到存眷。动物实行已证明，应用抗D25抗体按捺D4+D25+Tr细胞成效可进步肿瘤免疫成效；体外实行表白，应用IL-2刺激前从外周血中去除D4+D25+