药监系统官方培训 2.体外诊断试剂校准品溯源质控品定值及不确定度研究 中国食品药品检定研究院

1、体外诊断试剂标准品溯源、质控品赋值及不确定度研究黄杰非传染病诊断试剂室中国食品药品检定研究院PPT大量采用了ISO17511（2015草案）和Miller教授培训PPT，也是学习体会报告内容标准物质基本概述溯源赋值、不确定度研究互通性、一致化研究中检院已发布标准物质2016年11月7日61个品种2017年11月1日113个品种参考品研制 生化项目：尿素尿酸总蛋白、K、Na、Cl等离子 传染性疾病产品评价参考品（HBV、HCV、HIV、HPV等） 遗传性疾病产品评价参考品（地贫、耳聋基因突变等） 血型检测相关的产品评价参考品（免疫学、分子生物学技术产品） 高通量测序技术相关产品评价参考品 测序仪

2、评价用基因组DNA参考品 外周血胎儿染色体非整倍体参考品 胚胎植入前染色体非整倍体参考品 肿瘤基因突变参考品研制 流式细胞技术相关产品评价参考品 人淋巴细胞参考品 激素检测相关的标准品 -NIBSC国际协作标定免疫试剂最多、检测方法最全面，被采纳数据最多促黄体生成素泌乳素2013201420152017C-肽游离前列腺特异性抗原总前列腺特异性抗原报告内容标准物质基本概述溯源赋值、不确定度研究互通性、一致化研究术语和定义计量学溯源性metrological traceability测量结果或标准的值通过连续的比较链与一定的参考标准相联系的属性，参考标准通常是国家或国际标准，比较链中的每一步比较都

3、有给定的不确定度。参考物质reference material，RM具有一种或多种足够均匀和很好地确定了的特性，用以校准测量装置、评价测量方法或给材料赋值的一种材料或物质。校准品calibrator校准物质calibration material其值在一个校准函数中用作独立变量的参考物质。应具有定值和已知的测量不确定度，其目的应是校准某一测量系统，从而建立此系统测量结果的计量学溯源性。ISO 17511(2015草案)ISO 17511(2015草案)Procedures foridentity andmass balancePrimary ReferenceMaterial(pure sub

4、stance)ReferenceMeasurementProcedurePureSubstanceCalibrator(e.g. Gravimetry)ReferenceMeasurementProcedureSecondaryReferenceMaterial(matrix)Panel ofPatientSamples(e.g. IDMS)ManufacturersInternalProceduresManufacturersProductCalibratorMedicalLaboratoryProcedurePatients SamplePatients ResultISO 17511(2

5、015草案)与ISO 17511(2003) 5.2 有一级参考测量程序和一级 5.1有原级参考测量程序和原级校准校准物，计量学溯源到SI的情况物情况:完整计量学溯源到SIUA项目的量值溯源图校准赋值物质程序实施不确定度SI单位ID/GC/MS法多家参考实验室SRM 913a选定方法(AACC 1982)参考实验室参考实验室计量学溯源校准品（-70保存）厂家常规测量程序多项生化校准品常规样本用户常规测量程序用户结果锂、钠、钾、镁、钙、氯复合电解质冰冻人血清国家标准品联合赋值单位锂钠钾镁钙氯A 离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法同位素稀释电感耦合等离子 离子色

6、谱法体质谱法B/CD/离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法原子吸收法 原子吸收法 原子吸收法 原子吸收法/ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003) 5.2有原级参考物质和参考测量程序(被测量由参考测量程序定义)并计量学溯源到SI的情况，如HbA1C 5.3有国际约定参考测量程序（非一级）和国际约定校准物，未计量学溯源到SIISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003)5.3 没有原级校准物,但有参考测量程序(它定义被测量)并计量学溯源到SI的情况 5.4 有国际约定参考测量程序（非一级）但无国际约定校准物，未计量学溯源到SI的情况酶类,

7、凝血因子参考测量程序二级参考物质(基质)病人样本盘生产商的内部程序生产商的产品校准品医学实验室程序病人样本病人结果ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(2003)5.5 有国际约定校准物（非一级），但无国际约定参考测量程序，未计量学溯源到SI的情况5.4 有符合ISO15194国际约定校准物,它定义被测量;无国际约定参考测量程序和原级校准品,未计量学溯源到SI的情况ISO 17511(2015草案) 5.5 有国际一致化方案支持的国际约定校准物;无国际约定参考物质和参考测量程序，未计量溯源到SI的情况当没有参考测量程序时溯源中止参考物质(基质)生产商内部程序生产商的产品校准品

8、医学实验室程序病人样本病人结果必须赋一个值生产商内部程序医学实验室程序生产商的产品校准品病人样本病人结果当没有参考测量程序时的赋值 任意设定的单位, e.g. U/L 使用一个指定的对比程序 使用所有程序的截尾均值通过公认的程序赋值是恰当的 实际浓度是未知的 通过追溯校准值至参考物质的值可以实现协调一致 可使用临床指南通过公认程序赋值的局限性所有测量程序应可追溯到同一参考物质 若有多家参考物质供应商，非等效性赋值的风险将被分配给参考物质 因此，存在导致临床样本结果不一致的风险ISO 17511(2015草案)与ISO 17511(20035.6.被测量只溯源到制造者内部确定/具有的校准物;无原

9、级校准物或参考程序;未计量溯源到SI的情况有制造商选定的测量程序，但既无国际约定参考测量5.6程序，也无国际约定校准物，未计量学溯源到SI的情况必须赋一个值生产商内部程序医学实验室程序生产商的产品校准品病人样本病人结果dPCR技术的溯源报告内容标准物质基本概述溯源赋值、不确定度研究互通性、一致化研究常规标准物质制备路线均匀性评价稳定性评价参考物质样本来源细胞模拟微球血浆分泌物血清样本细菌标准株基因组DNA片段化DNA组织病毒株CLSI C37可互换的冷冻人血清池 分装 冷冻-70C个体样本不适用室温下凝结3-4 小时使用剩余临床样本制备参考物质剩余临床样本去除分子添加分析物添加防腐剂混合，过滤

10、冷冻的个体样本解冻，混合，溶解，过滤分装并保存冻干或冷冻修改的C37指南：使用混合血样制备参考物质去除分子添加分析物添加防腐剂C37 方案混合，过滤分装并保存冻干或冷冻以血清为基质的参考物质添加小分子收集经抗凝的血液血清蛋白基质过滤，分装添加生物分子（人源或非人源）离心冷冻血浆解冻血浆添加防腐剂以液体，冰冻状或冻干状态储存通过添加钙离子和凝血酶转换成血清离心，透析，浓缩恢复血清蛋白基质Miller, et.al. Clin Chem 2011;57:1670-80.标准物质的制备生产制备冻干赋型剂1#、5#、7#和9#瓶子里为F公司FSH抗原，稀释液中甘露醇浓度分别为1%、2%、5%和10%2

11、#、6#、8#和10#瓶子里为M公司FSH抗原，稀释液中甘露醇浓度分别为1%、2%、5%和10%单克隆抗体类国家标准品赋形剂配方配方1（原配方）配方2配方4配方3成分每L含量蔗糖海藻糖乳糖50g100g50g50g/50g/50g激素类国家标准品赋形剂配方配方9（原配方） 配方2（10） 配方3（11） 配方4（12）成分每L含量1g人血清白蛋白1g5g1g50g乳糖10g10g20g0.63g甲酸铵0.63g0.63g0.63gC-P冻干赋形剂的选择稀释基质配制基质各厂家稀释标示123301526.0213.036.553.431.800.9526.2812.916.563.421.790.

12、9429.9414.947.533.842.011.1223.6111.976.063.121.650.8925.7414.487.283.341.650.8423.8512.916.363.141.630.8去激素人血清，200ng/ml7.53.751.8750.937530157.5缓冲稀释液，200ng/ml3.751.8750.9375储存条件配制基质对照（-20）37 10d信号值室温4h信号值标示信号值浓度值39.8243.4216.5716.157.66浓度值50.4643.8416.7516.677.45浓度值38.5240.5016.1516.887.74210052170

13、2150137331466495351445192748151702722301313521554993914754928014716963379319023208084646211043379144477679148180812823355697968112833674633334023381196070812124549413919530157.5去激素人血清，200ng/ml811537097.63796353417.487.49346795243.76355898613.833.683.75347826833.76355079953.823.66123039471.9512571388

14、1.981.921.8750.937530128343052.00122935751.951.9442117561.0640588371.041.051.054310620198200689202061484143631775145411185780300327674225433281636331281661182974611587350393197137635071.0832.8834.9215.9816.337.337.213.653.641.911.891.021.00417226620452295720279948513526695813766201273522700749095543

15、1483801310289081085398310822649371219634697891.0636.3235.3314.4814.896.927.043.513.481.821.810.990.954154897186233691 27.57196385090 31.98125335778 12.90127167265 13.17156438921064276122270842622676662088258888838797296544728623456.126.113.173.151.611.620.870.85C-P缓冲稀释液，200ng/ml7.53.751.8750.9375基本要

16、求CNAS-GL29标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法ISO Guide 35:2006电解质标准物质联合赋值电解质标准物质联合赋值 每个项目每次依次分别测定标准物质-质控物质-3个浓度待定值冰冻血清样本。每次每个样本至少测定6个有效数据 按表14中所列标准判定检测数据是否有效，不符合表14所列要求的无效实验室数据将被剔除，有效的实验室数据进行结果计算 将验证有效的数据进一步处理：全部实验室每批次数据的均值再取均值作为该定值样本的靶值电解质标准物质联合赋值电解质标准物质联合赋值AFP协作标定结果厂家（简称）效价比1.0281.1101.0331.0600.8881.0400.8311.

17、1401.1021.1181.0911.040930安图新产业科华艾康达瑞西门子（Centaur）西门子（IMMULITE）贝克曼罗氏索灵希森美康平均免疫活性/安瓿（IU）最终定AFP国家标准品候选品免疫活性为930IU/支（即1125ng/支）打印标签理论结果1234p.Lys1183Arg；p.Asp435Tyr；p.Asn1784ThrfsBRCA1:K1183R_1BRCA2:V2466A_2BRCA1:R1443STOP_3正确正确正确错误错误错误错误正确错误错误正确正确p.Val2466Ala；p.Ile2675Hisfsp.Arg1443Ter；p.Asn1784Thrfs；p.

18、Lys1691AsnfsBRCA2:p.T3030fs_4BRCA1:K1780_splic_5BRCA2:p.T582P_6p.Thr3033Leufs；p.Asn810Thrc.5277+1GA正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确错误正确正确正确正确正确正确正确正确p.Thr582ProBRCA2:p.R2318*_7p.Arg2318TerBRCA2:p.T3357R_8p.Thr3357ArgBRCA1:c.981_982delAT_9BRCA2:c.5718_5719delCT_10BRCA2:c.3109CT_

19、11BRCA1:c.3333_3333del A_12p.Cys328Terfsp.Leu1908Argfsp.Gln1037Terp.Glu1112AsnfsBRCA2:c.5171delT (p.Ile1724Lysfs) _13p.Ile1724Lysfsp.Tyr3092Cysfs正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确错误正确正确正确正确正确错误正确正确正确BRCA2:c.9274_9277delTATT(p.Tyr3092Cysfs) _14BRCA2:c.6445_6446delAT(p.Ile2149Terfs)_15p.Ile2149Terfs；p.Met18

20、Valp.Gln1295TerBRCA2:c.3883CT（p.Gln1295Ter）_16BRCA1:c.5470_5477delATTGGGCA(p.Ile1824Aspfs) _17p.Ile1824AspfsBRCA1:c.3800TG(p.Leu1267Ter) _18p.Leu1267TerBRCA:正常_19benign正确错误正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确正确BRCA2：c.988delA_20BRCA1:c.5156delT_21BRCA2:c.275dupA_22BRCA1:c.4013delA_23BRCA1:c.68

21、_69delCT_24p.Ile332Phefsp.Val1719Glyfsp.Ser93Ilefp.Lys1338Argfsp.Glu23Valfs;BRCA2:21-27号外显子杂合缺失_25EX21_27 Del正确扩增子方法不适用扩增子方法不适用正确肿瘤基因突变检测国家参考品研制捕获原理扩增原理life平台（NGS）illumina平台（NGS）BGI平台突变频率定值Bio-rad平台（ddPCR）平台（NGS）Thermo（ddPCR）肿瘤基因检测国家参考品研制EGFR/ALK/MET国家参考品盘MutationEGFR G719S阳性参考品1-EGFR-G719S-24%2-EGF

22、R-G719A-48%3-EGFR-G719C-20%4-EGFR-L858R-22%5-EGFR-L861Q-13%5%检测限参考品18-EGFR-G719S-5%19-EGFR-G719A-5%20-EGFR-G719C-5%21-EGFR-L858R-5%22-EGFR-L861Q-5%23-EGFR-T790M-5%24-EGFR-S768I-5%2.5%检测限参考品37-EGFR-G719S-2.5%38-EGFR-G719A-2.5%39-EGFR-G719C-2.5%40-EGFR-L858R-2.5%41-EGFR-L861Q-2.5%42-EGFR-T790M-2.5%43-

23、EGFR-S768I-2.5%浓度（ng/l）体积(l) 样本类型1010101010101012121212121212DNADNADNADNADNADNADNAEGFR G719AEGFR G719CEGFR L858REGFR L861QEGFR T790MEGFR S768I6-EGFR-S768I-9%7-EGFR-E746_A750-50%（COSM6225）EGFR E746-A750COSM622525-EGFR-E746_A750-5%（COSM6225）44-EGFR-E746_A750-2.5%（COSM6225）1012DNAEGFR E746-A750COSM6223

24、26-EGFR-E746_A750-5%（COSM6223）45-EGFR-E746_A750-2.5%（COSM6223）8-EGFR-E746_A750-45%（COSM6223）10101212DNADNAEGFR L747_T751EGFR E746_T751AEGFR E747_T753SEGFR L747_A750P9-EGFR-L747_T751-10%10-EGFR-L746_T751A-6%11-EGFR-E747_T753S-39%12-EGFR-L747_A750P-28%27-EGFR-L747_T751-5%46-EGFR-L747_T751-2.5%28-EGFR-

25、L746_T751A-5%29-EGFR-E747_T753S-5%30-EGFR-L747_A750P-5%47-EGFR-L746_T751A-2.5%48-EGFR-E747_T753S-2.5%49-EGFR-L747_A750P-2.5%101010121212DNADNADNAEGFR E746_S752VMET扩增13-EGFR-E746_S752V-65%14-MET扩增-14拷贝15-ALK（E13-A20）-18%16-ALK（E6-A20）-8%31-EGFR-E746_S752V-5%32-MET扩增-4拷贝50-EGFR-E746_S752V-2.5%10121212

26、1212DNADNADNADNADNA10ALK（E13-A20）ALK（E6-A20）ALK（E14-A20）Mutation33-ALK（E13-A20）-5%34-ALK（E6-A20）-5%35-ALK（E14-A20）-5%检测限参考品51-ALK（E13-A20）-2.5%52-ALK（E6-A20）-2.5%53-ALK（E14-A20）-2.5%检测限参考品101010阳性参考品浓度（ng/l）体积(l) 样本类型ALK（E13-A20）54-ALK（E13-A20）-100拷贝/30ng101212RNARNAALK（E20-A20）Mutation阴性17-ALK（E20-

27、A20）-500拷贝/30ng阴性参考品36-ALK（E20-A20）-400拷贝/30ng55-ALK（E20-A20）-100拷贝/30ng10浓度（ng/l）体积(l) 样本类型56-阴性-1101010101010121212121212RNADNADNADNADNADNA阴性57-阴性-1阴性58-阴性-2阴性59-阴性-3阴性60-阴性-4阴性61-阴性-5肿瘤基因检测国家参考品研制SNV检测结果 （TE+野生型稀释/DNA样本）NGSddPCRMutationCOSMIC IDddPCR Ave AF（bio-rad）ddPCR Ave AF（thermo）均值illum Ave

28、 AFlife Ave AFBGI Ave AFBRAF V600E(T)EGFR G719AEGFR L861QKRAS G12V(T)KRAS Q61HCOSM476COSM6239COSM6213COSM520COSM554COSM763COSM775COSM521COSM520COSM516COSM522COSM522COSM532COSM554COSM583COSM775COSM625325.83%41.40%13.40%17.18%14.49%16.00%17.47%17.10%9.51%29.65%56.12%13.68%18.72%17.05%18.23%23.18%28.56

29、%27.18%21.25%24.63%68.52%39.03%14.29%54.44%30.53%29.93%22.88%45.01%13.37%17.01%14.96%15.63%17.84%16.12%9.38%19.60%47.60%13.23%19.73%22.03%49.36%11.59%19.39%16.66%18.54%21.98%26.41%21.83%19.58%21.62%67.05%32.86%14.54%24.00%47.90%13.05%18.41%15.79%17.51%20.12%16.61%9.45%PI3KCA E545KPI3KCA H1047RKRAS G

30、12D19.17%27.23%21.50%19.37%18.70%64.17%34.70%KRAS G12V(T)KRAS G12C14.90%9.89%12.62%11.39%34.85%12.85%3.85%13.76%10.64%33.23%13.24%3.52%KRAS G12AKRAS G12A31.61%13.63%3.20%KRAS G13DKRAS Q61HNRAS Q61L26.18%12.03%17.56%23.00%11.98%20.42%24.59%12.00%20.59%PI3KCA H1047REGFR G719C23.83%23.79%工作校准品的赋值-参考血清组

31、参考血清组的准备 要求5个梯度的新鲜混合血清组，血清中的分析物浓度尽可能分布于整个相应的检测范围内，分装后冰冻于-70。定期检查其稳定性，混合血清的参考值最多被认可6个月，需要重新用于参考标准化时，应重新测定。工作校准品的赋值-参考血清组参考实验室的选择 运行参考方法的参考实验室应满足以下条件：（1）参考实验室应采用JCTLM推荐的参考方法，参考实验室的环境条件应符合相应的国标规定。（2）应定期参加IFCC组织的RELA国际室间质评计划，且评价结果比较理想。工作校准品的赋值-参考血清组 参考方法的验证用参考方法对血清定值前，首先要进行参考方法的准确度验证。参考实验室用JCTLM推荐的参考方法连

32、续测量CRM不少于3次，若每次测量值均在靶值扩展不确定度（k=2）范围内，并且CV1%，则说明该室参考方法测量准确度良好。若测量值在靶值扩展不确定度（k=2）以外或CV1% ，则需检查原因，直至符合该要求为止。工作校准品的赋值-参考血清组 新鲜混合血清组的定值建议每个参考实验室用参考方法对新鲜混合血清组进行3个批次测量，每个批次测量次数不少于5次，测量次数不少于15次。样本测定前后均需进行质控物质的测量。所有参考实验室测量均值的未加权平均数即为该参考血清的定值。工作校准品的赋值-不确定度评定 参考血清组的不确定度评定测量不确定度过程按照CNAS-GL06化学分析中不确定度的评估指南步骤：将现有

33、鉴定不确定度来源数据所能包括的分量分组转化分量为标准差合成标准不确定度计算扩展不确定度规定被测量按组量化分量不确定度的主要来源：实验室间复现性、参考血清均匀性、参考血清稳定性工作校准品的赋值-不确定度评定 A类评定 B类评定参考血清组的均匀性和稳定性按照CNAS-GL29标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法进行不确定度评定。 合成标准不确定度 扩展不确定度(k=2, 95%的置信水平）工作校准品的赋值-实验设计3台同品牌仪器同一批工作校准品同一批试剂5次独立批次5次重复测定1 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 51 2 3 4 5离群值检

34、查所有运行批次有效的平均值工作校准品的赋值参考系统新鲜血清常规系统常规结果参考结果方法学比对工作校准品的赋值1. 赋值2. 校准参考方法常规方法工作校准品3. 测定4. 测定参考血清组常规结果5. 方法学比对、调值参考结果工作校准品定值判断标准：R20.99, a = 1.00 0.02，b 0工作校准品的赋值采用选定的检测系统和具有初步赋值的校准品校准品初步赋值为309.9通过方法学比较发现斜率不符合相关规定。通过回归方程调整校准品的值为331.9，重新检测。通过方法学比较，满足相关规定要求。确定校准品的值为331.9。工作校准品的赋值-不确定度的评定 A类评定 B类评定均匀性和稳定性按照C

35、NAS-GL29标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法进行不确定度评定。工作校准品的赋值-不确定度的评定 合成标准不确定度 扩展不确定度(k=2）产品校准品的赋值-实验设计4个同品牌仪器同一批工作校准品同一批试剂7次独立批次7次重复测定1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 71 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7离群值检查所有运行批次有效的平均值产品校准品赋值-均匀性检查多项生化校准品-LDH赋值 随机抽取15个样品，每个样品重复测定3次，分析如下：方差分析结果-LDH差异源组间SSdfMSFP-valu

36、e0.0095F crit2.037235.56182.51418.0714 16.8262.77组内30446.084总计方差分析结果F值为2.77小于10，产品校准品LDH瓶间均一性较好，符合赋值要求。产品校准品赋值 每天按如下顺序进行测定： 测定两个水平质控（MK1, MK2)各3次，测定上一批校准品（CO）、待赋值校准品（CN）、两个水平混合血清(P1, P2)各7次，测定两个水平质控品(MK1, MK2)各4次。产品校准品赋值-离群值检查 离群值检查仪器01仪器02仪器03仪器04质控水平1（MK1）质控水平2（MK2）上一批校准品（CO）产品校准品赋值-离群值检查仪器01仪器02仪

37、器03仪器04待赋值校准品（CN）混合血清水平1（P1）混合血清水平2（P2）产品校准品赋值-精密度评价 重复性 Verror MSSRerrorMSDay MSS V Verror MSerrorWLdayerrornrep 仪器内精密度MS MS MS MSS V V VsitedayDayerror MSerrorREPsitedayerrorn nnrepdayrep 复现性产品校准品赋值-精密度评价重复性仪器内精密度复现性平均值(U/L)SDCV%3.5%1.7%2.5%1.8%2.7%1.3%SDCV%SDCV%3.9%2.0%2.6%2.1%3.1%1.6%样本MK1MK2COC

38、N184.8369.0330.3322.7217.6568.66.386.458.405.905.907.586.047.128.106.506.508.903.3%1.9%2.5%2.0%3.0%1.6%7.237.368.556.736.739.35P1P2产品校准品赋值-精密度评价产品校准品的赋值-不确定度评定 A类评定A类评定主要指由测量产品校准品而生成的不确定度（uchar）。根据ISO Guide 35，计算以多个仪器测量产品校准品时产生的测量不确定度，其公式：sREPucharn式中：uchar 测量工作校准品时，产生的不确定度SREP 复现性n 仪器数产品校准品不确定度计算 A

39、类评定差异源天间仪器误差总计SSdfMSFP-valueF crit4183.439693.09165013.7389890.26948387.15498231.030534.817632.5031866.6354481.49E-050.0003141.4459252.667443144195sS V V Vsite day error6.73REPu 3.365REPMS MS MS MScharn4sitedayDayerror MSerrorn nnrepdayrep231.0387.15 87.1534.82 34.82 6.73777产品校准品赋值-不确定度评定 工作校准品的不确定度

40、 均匀性引起的标准不确定度 稳定性引起的标准不确定度产品校准品赋值-不确定度评定均匀性引起的标准不确定度MS瓶间 MS瓶内u s n0bbbb 式中：n 为有效测量次数, n =3。0016.826 6.084u 1.892bb3产品校准品赋值-不确定度评定长期稳定性引起的标准不确定度n X X Y Yii 46.494b1 i1n 0.151308 2X Xii1式中：Y 322.12X 308截距由下式计算：b Y b X 322.12 (0.151308) 323.3301产品校准品赋值-不确定度评定 直线的标准偏差可由下式计算：nY b b x)2(i01i144 .665s2 28

41、.93i 1n 2l 取其平方根s=5.379 U/L，斜率的不确定度用下式计算：s5.379308s(b1) 0.3165n(Xi X )i1产品校准品赋值-不确定度评定 自由度为n-2和p=0.95（95%置信水平）的学生分布t因子等于2.015。 由于l 故斜率是不显著的。因而未观测到不稳定性。l 有效期t=20个月的长期稳定性的不确定度贡献即成为：s s t 0.316520 6.330U / Ltb产品校准品赋值-不确定度评定合成标准不确定度类别值ucharum-calubbultsusts3.3659.131.8926.3300u u2 u2 u2 u2 u 2ccharmcalb

42、bltssts2 3.365 9.13 1.892 6.330 02 2 2 11.76 选定的运输条件无需考虑运输不稳定性造成的附加不确定度， 因此usts0产品校准品赋值-不确定度评定仪器仪器01 仪器02325.3 323.1仪器03仪器04赋值结果(U/L)平均值(U/L)322.0320.1322.7扩展不确定度(U)U= uc2 = 11.762=23.52 U/L因此,产品校准品MKD(批号160803) LDH项目在日立系列全自动生化分析仪上的赋值为322.723.52 U/L(k=2)。标准物质均匀性要求4.1标准物质均匀性检验4.1.1 均匀性是标准物质的基本属性，它是用来

43、描述标准物质特性空间分布特征的。4.1.2 均匀性初检 对特性量不易均匀的标准物质，在制备过程中除采取必要的均匀措施外，还应进行均匀性初检。4.1.3 均匀性检验不论制备过程中是否经过均匀性初检，凡成批制备并分装成最小包装单元的标准物质，必须进行均匀性检验。对于分级分装的标准物质,凡由大包装分装成最小包装单元时,都需要进行均匀性检验；检验的目的是来判定单元间的变动性在统计学上是否显著。4.1.6 均匀性检验方法的选择应选择有代表性的和不容易均匀的待测特性量值进行均匀性检验，选择不低于定值方法的精密度和具有足够灵敏度的测量方法，在重复性的实验条件下做均匀性检验。均匀性检验并不要求给出特性量值，只

44、是检验该特性量值的分布差异。4.1.7 均匀性检验结果的评价原则上通过统计学处理评价是否显著，用以检验单元内的均匀性；均匀性分析取样方式分装的初始，中间，终结阶段取样取样数目若计总体单元数为N，当总体单元数N1000时，抽取样品数不少于30个。对于均匀性好的样品，当N500时，抽取单元数不少于15个。候选品分装数量为1900支/水平。因此每个水平分别抽取30支检查瓶间均匀性样本测定采用精密度良好的日立7180全自动生化分析仪进行测定，每个样本测定3次统计方法单因素方差分析均匀性三水平的F值均小于F临界值，说明瓶间无显著性差异TSH均匀性分析结果准确性样品斜率截距相关系数t0.05（9）效价比t

45、0.94960.93830.92820.90010.93000.92734.45394.43964.39774.49494.47264.49870.99980.99980.99980.99930.99960.9992国际标准品候选品1候选品2候选品3候选品42.4472.4472.4472.4472.4470.93690.82330.96890.99271.05100.6801.3572.1210.9810.924候选品50.97770.91670.95314.38304.50124.41030.99920.99940.99992.4472.4472.4470.91321.02720.9086

46、1.1231.4840.247候选品6候选品7候选品8瓶间变异系数（CV）为7.7%标准物质稳定性要求4.2.3稳定性检验方法的选择选择不低于定值方法的精密度和具有足够灵敏度的测量方法进行稳定性检验，并注意保持与定值时操作及实验条件的一致。稳定性检验可以通过不同温度的加速稳定性以及实时稳定性进行。4.2.4稳定性检验数据结果判断及有效期限的确定按时间顺序进行的测量结果在测量方法的不确定度范围内波动，则认为该特性量值在试验的时间间隔内是稳定的,该时间间隔可作为标准物质的有效期,据此给出有效期限;若测量结果的变化大于测量方法的不确定度或标准物质的预期不确定度，则稳定性检验结果不合格或将变动性带来的

47、不确定度统计到标准物质总的不确定度内；有效期限的确定可以通过加速稳定性进行初步估算，采取实时稳定性检测盒期间核查的方式最终确定有效期限。4.3期间核查在标准物质发放期间要不断积累稳定性数据，以延长有效期，并通过期间核查进行标准物质稳定性考察。期间核查方法应选择不低于定值方法的精密度和具有足够灵敏度的测量方法。期间核查的间隔根据标准物质特性由研制人员确定。稳定性取样方式及取样数目在第1、2、3、5、7、12、20、30天8个时间点上，随机抽取，分别放在室温（20-25）、（2-8）、-20三种温度条件下，每个温度每个水平样本各3支，同一天内测定样本测定采用精密度良好的日立7180全自动生化分析仪

48、测定，每个样本测定3次统计方法一元线性回归分析稳定性TSH稳定性分析结果理论浓度稀释倍数8周7周6周5周4周3周0周5700175705.1119.0244.9186.7831706.0120.0146.1788.7435115.5019.7246.9490.1234364.6218.3544.9083.3831276.0521.9349.4893.2037005.1919.2444.1089.4933054.8720.4747.3794.143401/205010035返算浓度（IU/ml）相对偏差（%）-6.8%3.2%1.0%-8.1%8.8%-2.8%37放置3W、4W、5W、6W、7

49、W、8W后，与-20保存的标准品候选品（作为0周）的相对偏差绝对值在1.0%8.8%之间报告内容标准物质基本概述溯源赋值、不确定度研究互通性、一致化研究标准物质特性 互通性/互换性n 对于给定标准物质的规定量，由两个给定测量程序所得测量结果之间关系与另一个指定物质所得测量结果之间关系一致程度表示的参考物质特性。（ISO/IEC Guide 99:2007, 5.15）解释：互换性是指参考物质的理化性质与实际被测样品（天然样本）在二个测量程序间测量特性的接近程度与参考物质的制备有关使用具有互换性物质的进行校准1086与患者样本的检测结果具有等效性420临床样本参考物质作为校准品0246810测量

50、程序1使用非互换性物质进行校准1086与患者样本的结果不同42临床样本参考物质作为校准品00246810测量程序1对于大多数测量程序，肌酐是标准化的18139420032011表格源自: Killeen et al. Arch Pathol Lab Med 2013;137:496-502.美国国家标准与技术研究院分析证书标准参考物质冷冻人血清中的肌酐互换性研究肌酐参考物质的的互换性研究2006年，NKDEP的实验室工作组（LWG）在美国国家标准与技术研究院（NIST）的支持下进行了标准参考物质（SRM）967的互换性研究，针对于当时常见的市售可用的检测方法，确保该参考物质与天然血清样本具有互

51、换性。参考物质通常被用于建立或验证常规测量程序至较高级别的参考测量程序的校准追溯性。当一种参考物质被用于评估常规的临床方法，参考物质的互换性必须对该参考物质预期使用的所有常规方法进行验证。结果NIST新鲜冷冻的肌酐参考物质,SRM967（即2006年美国病理学家学会的准确性校准验证/线性调查LN24所用的物质）与经下列的生产商的试剂和仪器检测的天然临床血清样本具有可互换性。参考物质和临床样本是在规定的分析系统上以及按照NIST的LC/IDMS参考测量程序进行测量评估的。采用临床实验室标准化学会（CLSI）文档EP14-A2中的标准评估互换性。CAP认证中的准确性结果：基于肌酐调查使用获得美国病

52、理学家学会允许(2016)分析证书人血清质量浓度重组物质中的蛋白质CAP PT 调查方法间CV的改善：校准可溯源至ERM-DA470和不可溯源至ERM-DA470的方法校准不能溯源到ERMDA470校准可溯源到ERMDA470Johnson, et al. Arch Pathol Lab Med 2000;124:1496-1501参考物质用作校准品时互换性的重要性：以血浆铜蓝蛋白为例结论：ERM-DA470中的铜蓝蛋白是有完整文献支持的典型范例，该范例说明当缺少互换性时，使用通用材料作为校准品无法实现检测方法间的一致性的。血浆铜蓝蛋白:参考物质互换性评估非互换的互换的当前评价互换性方法CLS

53、I:C37-A (1999年) 可互换的冷冻人血清池的制备及验证EP14-A3 (2014年) 经处理样本的互换性评估(第一版2001年)EP30-A (2010年) 有互换性的参考物质的特征和评价CLSI EP14, EP3050403020100Deming回归线95% 预测区间可互换的可互换的非互换的天然临床样本参考物质05101520253035404550测量程序结果1 结果CLSI EP14, EP3050403020100Deming 回归线95% Prediction Interval在决定水平附近的不确定度不考虑天然临床样本参考物质05101520253035404550测量

54、程序1 结果CLSI EP14, EP3050403020100Deming 回归线95% 预测区间过多的相关性离散会使参考品不再具有互换性天然临床样本参考物质05101520253035404550测量程序1 结果在互换性评估中的临床样本的合格性1. 不应当包含非常见的干扰物质或将影响大多数测量程序的分析物形式2. 必须覆盖参考物质的浓度3. 优先选择单份样本4. 可能需要混合的样本来满足样本量的要求-混合样本必须经过验证5. 必须验证制备和储存条件偏差的差异性评估1. 评估两个测量程序对病人样本和参考物质检测的平均偏差2. 计算参考物质和患者样本检测平均偏差的差异3. 基于测量随机误差，评

55、估平均偏差的差异的不确定度4. 评估平均偏差对比固定标准的差异，该固定标准用于反映参考物质的预期用途平均偏差与固定标准的差异RM的均值 偏差差异的不确定度0.70.60.50.40.30.20.10.0-0. 1-0. 2标准临床样本的均值标准偏差RM1RM2 RM310RM4100RM511000平均浓度( x+z) / 2平均偏差与固定标准的差异3530252015105互通的: 偏差加不确定度在标准之内标准临床样本的均值0标准-5AB CDE-10050100150200250300Mean Concentration ( x+y) / 2平均偏差与固定标准的差异非互通的: 偏差加不确定

56、度超过标准22015105标准临床样本的均值0标准-5AB CDE-10050100150200250300Mean Concentration ( x+y) / 2平均偏差与固定标准的差异不确定的: 标准加不确定度与标度有重叠252015105标准临床样本的均值0标准-5AB CDE-10050100150200250300Mean Concentration ( x+y) / 2评估各种组合0.70.60.50.40.30.20.10.0-0.1-0.20.70.60.50.40.30.20.10.0-0.1-0.2RM1RM2 RM310RM41000.70.60.50.40.31Mean Concentration (x+0.70.60.50.40.30.20.10.0-0.1-0.2RM1RM2 RM310RM4100R0.20.11Mean Concentration (x+z)/0.0-0.1-0.2RM1RM2 RM310RM4100R0.70.60.50.40.30.20.10.0-0.1-0.21Mean