分子印迹技术

1、印迹技术（blotting）将各种生物大分子从凝胶转移到一种固定基质上的过程称为印迹技术（blotting）。中文名分子印迹技术提出者Southern时间1975年解释将大分子从凝胶转移到固定基质基本概况Southern在1975年首先提出了分子印渍的概念。他将琼脂糖凝胶电泳分离的DNA片段在凝胶中进行变性使其成为单链，然后将一张硝酸纤维素（nitrocellulose,NC）膜放在凝胶上，上面放上吸水纸巾，利用毛细管作用原理使凝胶中的DNA片段转移到NC膜上，使之成为固相化分子。载有DNA单链分子的NC膜就可以在杂交液与另一种带有标记的DNA或RNA分子（即探针）进行杂交，具有互补序列的RN

2、A或DNA结合到存在于NC膜的DNA分子上，经放射自显影或其他检测技术就可以显现出杂交分子的区带。由于这种技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹，因此称为botting”，译为“印迹技术”。分子印迹技术生物大分子印迹技术发展极为迅速，己广泛用于DNA、RNA、蛋白质的检测。通常将DNA印迹技术称为Southernblotting,将RNA印迹技术称为Northernblotting,将蛋白质印迹技术称为Westernblotting,将不经凝胶的印迹技术称为斑点印迹（Dotblotting）。利用表面分子印迹技术选择性检测兽药残留物当模板分子（印迹分子）与聚合物单体接触时会形成多重作用点，通过聚合

3、过程这种作用就会被记忆下来，当模板分子除去后，聚合物中就形成了与模板分子空间构型相匹配的具有多重作用点的空穴，这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别特性。1在一定溶剂（也称致孔剂）中，模板分子与功能单体依靠官能团之间的共价或非共价作用形成主客体配合物；2加入交联剂，通过引发剂、光或热等引发单体聚合，使主客体配合物与交联剂通过自由基共聚合在模板分子周围形成高联的刚性聚合物；3.将聚合物中的印迹分子洗脱或解离出来。这样在聚合物中便留下了与模板分子大小和形状相匹配的立体孔穴，同时孔穴中包含了精确排列的与模板分子官能团互补的由功能单体提供的功能基团，如果构建合适，这种分子印迹聚合物就象锁一样对此

4、钥匙具有选择性。这便赋予该聚合物特异的记忆”功能，即类似生物自然的识别系统，这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别特性。分类目前，根据模板分子和聚合物单体之间形成多重作用点方式的不同，分子印迹技术可以分为两类：1共价键法（预组装方式）聚合前印迹分子与功能单体反应形成硼酸酷、西夫碱、亚胺、缩醛等衍生物，通过交联剂聚合产生高分子聚合物，用水解等方法除去印迹分子即得到共价结合型分子印迹聚合物。2非共价键法（自组装方式）非共价键法是制备分子印迹聚合物最有效且最常用的方法。这些非共价键包括静电引力（离子交换）、氢键、金属鳌合、电荷转移、疏水作用以及范德华力等。其中最重要的类型是离子作用，其次是氢键

5、作用。1预定性，即它可以根据不同的目的制备不同的MIPS,以满足各种不同的需要。2识别性，即MIPS是按照模板分子定做的，可专一地识别印迹分子。3.实用性，即它可以与天然的生物分子识别系统如酶与底物、抗原与抗体、受体与激素相比拟，但由于它是由化学合成的方法制备的，因此又有天然分子识别系统所不具备的抗恶劣环境的能力，从而表现出高度的稳定性和长的使用寿命。应用举例：1用于化学仿生传感器由于MIPS对于印迹分子的高选择性，故可以作为仿生传感器的分子识别元件；这种分子识别作用可以通过信号转化器（压电晶体、电极、电阻等）输出，然后通过各种电、热、光等手段转换成可测信号，可定量分析各种小分子有机化合物。2

6、色谱分离MIPS最广泛的应用之一是利用其特异的识别功能去分离混合物，近年来，引人瞩目的立体、特殊识别位选择性分离已经完成。其适用的印迹分子范围广，无论是小分子（如氨基酸、药品和碳氢化合物等）还是大分子（如蛋白质等）已被应用于各种印迹技术中。3固相萃取通常，样品的制备都包括溶剂萃取，由于分子印迹技术的出现，这可以用固相萃取代替，并且可利用分子印迹聚合物选择性富集目标分析物。由于印迹聚合物既可在有机溶剂中使用，又可在水溶液中使用，故与其他萃取过程相比，具有独特的优点。4天然抗体模拟。MIPS与印迹分子之间作用的强度与选择性在一定程度上可以和抗原与抗体之间的作用相媲美，因而可用于抗体模拟这种模拟抗体制备简单、成本低，在高温、酸碱及有机溶剂中具有较好的稳定性，此外还可以重复使用。5模拟酶催化。例如