同济医院检验科ISO15189体系文件34.铁染色(Iron stain)

1、同济大学附属同济医院检验科血液组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ134第2版标题: 铁染色(Iron stain)第1章 第34节第 PAGE 3 页 共 3 页1目的:保证铁染色检测结果的准确、可靠。 2适用范围：铁染色检测 3项目名称：铁染色 4检测方法：化学染色法 5. 原理:细胞外含铁缺黄素和幼红细胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应,形成普鲁士蓝的亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。反应式如下： 4F3+3K4Fe(CN)6 Fe4Fe(CN)63+12K6. 试剂:6.1 品牌：低铁氰化钾 汕头光华化学厂浓盐酸 上海振兴化工厂沙黄 上海试剂三厂冰醋酸 上海化学试剂厂甲醇

2、上海试剂三厂6.2 货号：低铁氰化钾 13-001-1522-146II浓盐酸 13-001-0806-003II沙黄 13-2010278199冰醋酸 13-2010279002II甲醇 13-20102820II6.3 包装规格：低铁氰化钾 500g/瓶浓盐酸 500mL/瓶沙黄 50g/瓶冰醋酸 500mL/瓶甲醇 500mL/瓶6.4 内含物：自配酸性低铁氰化钾溶液: 200g/L低铁氰化钾溶液 5份(40ml) 浓盐酸 1份(8ml)将200g/L低铁氰化钾溶液置于染色缸或平皿中,缓缓滴入浓盐酸,直至先出现白色沉淀,以后白色沉淀开始消失为止。 5g/L沙黄溶液: 沙黄 0.5g 冰醋

3、酸 0.1ml 蒸馏水 100ml7 仪器：37水温箱，显微镜。8 操作步骤:8.1 骨髓片用甲醇固定。8.2 水洗，待干。8.3 浸入酸性低铁氰化钾溶液中，37水温箱中放置45分钟。8.4 取出涂片，水洗，待干。检查细胞外铁。8.5 用5g/L沙黄溶液复染5分钟。水洗，待干。8.6 检查铁粒幼红细胞。8.7 结果判断细胞外铁观察:先用低倍镜于骨髓小粒处,寻找细胞外铁,铁颗粒呈蓝色,深蓝色,然后在油镜下判断铁量.按铁量多少分成五级,分级标准如下: 细胞外铁的分级标准 分级 铁颗粒 铁小珠 铁小块 (-) 未见 未见 未见 (+) 少数 偶见少数 未见 (+) 较多 较多 未见 (+) 很多 很

4、多 少数 (+) 极多 极多 很多铁粒幻红细胞观察:用油镜观察,铁粒呈蓝色颗粒 ,位于幼红细胞的浆内.如幼红细胞浆内出现蓝色铁颗粒叫铁粒幼红细胞,而红细胞内出现蓝色颗粒叫铁粒细胞.用油镜计数100各幼红细胞,记录胞浆中有蓝色颗粒的铁粒幼红细胞的百分数,同时观察铁颗粒的数目,大小.根据所含颗粒的量和颗粒的大小可把铁粒幼红细胞分为四中类型:型:胞浆内可见,1个细小铁颗粒.型:胞浆内可见2个以上铁颗粒.型:胞浆内可见1-4个粗大铁粒.型:胞浆内可见5个粗大铁粒.环行铁粒幼红细胞的标准:幼红细胞浆内的铁颗粒6个以上.其中2/3以上铁颗粒围绕于核周围排列成环行。9 线性范围：无10 参考范围：10.1

5、细胞外铁:(+)-(+)10.2 铁粒幼红细胞:19-44%.大多为型和型.11 临床意义：11.1 诊断缺铁性贫血，细胞外铁减低，未见铁粒幼红细胞或铁粒幼红细胞明显减低。11.2 诊断铁粒幼细胞贫血，可找到含铁粒粗而多的幼红细胞，并能发现具有特征性的环铁粒幼细胞。11.3 能灵敏的反映机体内铁的贮存和利用情况：缺铁患者细胞外铁明显减低或消失，可出现在小细胞低色素贫血发生之前，甚至在血清铁含量下降以前。细胞内铁、外铁均消失则表示骨髓贮存的铁已用完，若患者血象已有小细胞低色素贫血，而骨髓涂片细胞内、外铁均正常甚至增多，则提示铁不能被利用。12. 病人准备标本要求：骨髓涂片13. 注意事项：13.1 所用玻片必须洁净,无铁粒污染.13.2 检查细胞外铁的骨髓片,必须有骨髓小粒存在,否则影响结果.13.3 酸性低铁氰化钾溶