大黄对幼鼠肝内胆汁淤积的治疗作用

1、大黄对幼鼠肝内胆汁淤积的治疗作用【关键词】大黄；胆汁淤积；动物模型；治疗作用Therapeutieffetfrhubarbnintrahepatihlestasisininfantrats【Abstrat】AI:Texplrethetherapeutieffetfrhubarbnintrahepatihlestasisininfantrats.ETHDS:90SDinfantratsererandlydividedint5grups:treatentgrupfrhubarb,untreatedgrup,treatentntrlgrup1fUDA(UrsdexyhliAid,UDA),treat

2、entntrlgrup2fUDAanddeltasne,andblankntrlgrupnttreatedithNaphthylisthiyanate(ANIT)ranythertreatent.JaundiedelfintrahepatihlestasisasestablishedininfantratsbyANIT.Atthetiefthe2nd,3rd,and4theek,thenentratinsfseruTB,DB,ALT,ALPandTBAereassessedbyautatibiheialanalyzer.Thehistpathlgialhangesflivererebserve

3、drespetivelybylightirspeandeletrnirspe.RESULTS:ThenentratinsfseruTBandDBereinreasedintheuntreatedgrupasparediththeblankntrlgrup,andthereeresignifiantdifferenesinthenentratinsfseruALT,ALPandTBAbeteentheuntreatedgrupandtheblankntrlgrupP0.05asell,hihdenstratedthattheanialdelfhepatijaundieithhlestasisas

4、suessfullyestablished.ThenentratinsfseruDB,TB,ALP,ALTandTBAeresignifiantlylerinthetreatentgrupfrhubarbasparediththeuntreatedgrup(P0.05).eanhile,bettereffetsfrelievingthejaundieanddereasingtheALPandTBAlevelsuldbebservedinrhubarbtreatentgrupasparediththeUDAgruprtreatentgrupfbinedusefUDAanddeltasne.nly

5、ildhistpathlgialhangeinliveruldbeseeninrhubarbtreatentgrupbylightirspereletrnirspeasparediththeratsinthergrups.NLUSIN:RhubarbrearkablyreduesthenentratinsfseruTB,DB,ALT,ALPandTBA,relievesthetxiityfbileaidandinhibitsthehepatiinjuryrfibrsis.【Keyrds】rhubarb;hlestasis;anialdel;therapeutieffets【摘要】目的：讨论中药

6、大黄对幼鼠肝内胆汁淤积的治疗作用.方法：SD幼鼠90只随机分成大黄治疗组、未治疗组、UDA组熊去氧胆酸,UDA、UDAD组(熊去氧胆酸结合强的松)、空白对照组；用萘异硫氰酸酯ANIT灌胃建立幼鼠胆汁淤积性黄疸模型，检测在不同时间段血清TB,DB,ALT,ALP和TBA浓度；制作肝组织标本，进展光镜、电镜组织病理学观察.结果：未治疗组与空白对照组比拟，TB和DB均有数十倍的增高.同时未治疗组血清ALT,ALP,TBA浓度与空白对照组比拟也有显著性差异P0.05，说明成功构建幼鼠胆汁淤积性黄疸模型.大黄治疗组的血清TB,DB,ALT,ALP及TBA值明显低于未治疗组P0.05，与治疗对照组比拟，中

7、药大黄在退黄、降低ALP,TBA方面优于UDA和UDA+强的松；光镜、电镜下大黄治疗组与未治疗组、治疗对照组比拟，肝组织病理改变细微.结论：大黄能明显降低血清中TB,DB,ALT,ALP及TBA浓度，显著降低胆汁酸的毒性作用，抑制肝纤维化.【关键词】大黄；胆汁淤积；动物模型；治疗作用0引言肝内胆汁淤积的治疗目前尚缺乏有效方法，尤其在婴幼儿1-2.利胆药熊去氧胆酸和中药大黄近年来日益受到广阔学者的重视3.大黄为传统常用中药，有多种药用价值，单味大黄广泛用于各科疾病的治疗，尤其是临床肝胆疾病的治疗，但多数为初步的临床疗效观察，缺乏对其作用机制的深化讨论，而且将大黄用于幼龄鼠进展疗效观察及作用机制的

8、讨论，国内少有报道.我们讨论大黄对幼鼠肝内胆汁淤积的治疗效果，为大黄治疗肝内胆汁淤积提供理论根据.1材料和方法11材料安康SpragueDaley(SD)大鼠90只第三军医大学大坪医院实验动物中心提供，雌雄各半，2周龄由母鼠哺乳至3k龄分窝，体质量2228g.日立7600生化自动检测仪；日本岛津公司紫外分光光度计UV1700；萘异硫氰酸酯ANITSiga公司熊去氧胆酸胶囊250g/粒德国福克大药厂消费；丙二醛(DA)测定试剂盒、总抗氧化才能(TA)试剂盒、一氧化氮(N)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供.2周龄幼鼠相当于人婴幼儿期90只随机分为空白对照组、未治疗组、大黄治疗组、UDA组、UDA

9、D组，共5组，每组各18只，于实验2，3，4k分别取6只幼鼠进展血清和肝组织的检测.12方法大黄治疗组、治疗对照组和未治疗组均给予20g/LANIT花生油溶液灌胃诱导肝损伤4，剂量60g/kg，隔日1次，连续用药4k.给予ANIT灌胃3次即6d后，UDA组、UDAD组和大黄治疗组全程另分别给予熊去氧胆酸UDA、UDA+强的松、大黄煎液灌胃，1次/d.UDA、强的松、大黄剂量按人与动物等效剂量折算公式5计算幼鼠用量(g/kg)=人用量21人转换因子/4.5大白鼠转换因子，得每日剂量分别为50g/kg，7.5g/kg和2.3g/kg.空白对照组为同期正常喂养大鼠.将UDA50g,强的松片剂7.5g

10、研磨成粉溶于30L生理盐水中，充分混匀，制成混悬液，小鼠按30L/g灌胃；取生大黄2.3g，洗净后放入30L沸水中，加盖密闭，浸泡20in，过滤，取上清，小鼠按30L/g灌胃.经以上措施处理2,3,4k后，所有被观察大鼠均以乙醚吸入麻醉后剪开右颈部暴露颈静脉，剪断颈静脉取血23L，静置2h后(2000r/in)离心，移液器别离血清.立即取肝脏左叶组织46小块，40g/L甲醛缓冲液室温下固定,24h后制备标本，用于光镜观察；25g/L戊二醛固定4冰箱保存，4h后制备标本，组织经酒精、丙酮逐级脱水，环氧树脂618#包埋，光镜下定位，制备60n的超薄切片，采用H600透射电镜观察.取血清0.5L立即

11、送检测TB,DB,ALT,ALP和TBA浓度.用日立7600生化自动检测仪检测，移液器将0.5L血清移入加样管中，系统自动取样分析，获取结果.常规石蜡包埋切片，HE染色，中性树脂封片，光镜检查.着重观察有无肝细胞变性坏死，肝纤维化，肝细胞及胆小管内有无胆汁淤积现象.在实验第4k，取各组动物的肝脏标本，经上述方法处理后送重庆医科大学电镜室超薄切片徕卡，枸橼酸铅及醋酸双氧铀染色，H600透射电镜观察.统计学处理：采用SAS8.0统计软件包对数据进展分析.计量资料用xs表示；组间比拟，由于方差不齐，将原始数据进展对数转换前方差齐同，再采用方差分析，两两比拟采用SNKq检验；P0.05为有统计学显著性

12、差异.A:肝细胞内胆色素颗粒;B:肝脏毛细胆管内胆汁淤积;:肝细胞混浊肿胀和气球样变性;D:汇管区明显纤维增生;E:大黄组肝细胞轻度变性，少数毛细胆管淤胆;F:大黄组汇管区少量纤维增生;G:UDA组肝细胞轻度变性，点状坏死;H:UDA+D组肝细胞灶性坏死.图1各组幼鼠肝脏的病理变化HE400略2结果光镜下，空白对照组：肝小叶构造完好，肝细胞形态正常.无变性坏死、炎症细胞浸润和纤维组织增生等改变.未治疗组：肝细胞内见胆色素沉积，毛细胆管内胆汁淤积图1A，B.可见肝细胞大量混浊肿胀、空泡变性，汇管区较多纤维组织增生图1，D.说明给实验大鼠口服ANIT后，成功构建肝内胆汁淤积性黄疸动物模型.大黄治疗

13、组：肝细胞轻度变性，无肝细胞坏死，少数毛细胆管内胆汁淤积，汇管区少量纤维组织增生图1E，F.说明大黄明显减轻了肝细胞的损伤，抑制肝纤维化.UDA组：少数毛细胆管内胆汁淤积，肝细胞点状坏死、轻度浊变和空泡变性图1G.UDAD组：肝细胞灶性坏死，少数毛细胆管内淤胆图1H.电镜下，空白对照组：肝细胞核大，染色质丰富，核仁明显，可见双核仁，胞质内细胞器丰富明晰，可见兴旺的粗面内质网和高尔基复合体，成杆状或椭圆形的线粒体超微构造正常，细胞基质电子密度均匀一致，糖原散在分布于细胞质中.未治疗组：肝细胞核不同程度溶解，异染色质边集，胞浆大片空化，有糖原堆积，脂滴增多，线粒体形态尚可，毛细胆管扩张，严密连接翻

14、开.变性坏死及线粒体肿胀明显，肝细胞内可见髓样构造.血窦内可见成纤维样细胞及少量胶原纤维，少量纤维细胞呈现局灶性坏死(图2A，B，).UDA组：少数肝细胞核异染色质边集，肝细胞间隙扩大，髓样构造增多，少数线粒体轻度内室肿胀，溶酶体增多(图2D).UDAD组：肝细胞胞质空化，糖原增多，线粒体内室肿胀，少数肝细胞核异染色质边集，毛细胆管轻度扩张，微绒毛变短(图2E).大黄组：大多数肝细胞超微构造根本正常，仅有少数肝细胞胞质呈局灶性溶解，其毛胆管构造明晰，无明显扩张(图2F).各组大鼠血清TB,DB,ALT,ALP,TBA浓度有差异(表1,2).3讨论中药大黄已被广泛应用于临床肝胆疾病的治疗.A:未

15、治组幼鼠肝内毛细胆管扩张，严密连接翻开25000;B:未治组肝细胞核溶解，异染色质边集，胞质大片空化，有糖原堆积，脂滴增多;:未治组肝纤维化明显;D:UDA组少数肝细胞核异染色质边集，线粒体轻度肿胀;E:UDA+D组肝细胞胞质空化，糖原增多，线粒体肿胀，少数肝细胞核异染色质边集;F:大黄组肝细胞根本正常，毛细胆管无明显扩张.图2各组幼鼠肝脏的超微构造变化TE8000略表1大鼠血清TB，DB和TBA测定结果略aP0.05vs未治疗.表2血清中ALT，ALP测定结果略aP0.05vs未治疗.为深化讨论中药大黄对肝内胆汁淤积的治疗作用，建立肝内胆汁淤积性黄疸动物模型成为深化研究本课题的关键.实验证明

16、，异硫氰酸萘酯ANIT能诱发大鼠肝脏损害，引起血液中胆红素和丙氨酸转氨酶急剧升高，胆汁流量减少，炎性细胞增加以及肝细胞坏死等相似于人类肝内胆汁淤积的病理改变6.从本实验中未治疗组的检测结果说明，由ANIT引起的高胆血症，以结合胆红素为主，符合胆汁淤积性黄疸特征，同时说明本组所建立的肝内胆汁淤积性黄疸模型是成功的.血清总胆红素TB，碱性磷酸酶ALP，丙氨酸氨基转移酶ALT，总胆汁酸TBA是胆汁淤积的4项常规指标7.我们将这4项指标作为判断胆汁淤积程度的指标，同时也作为衡量胆汁淤积药物疗效的指标.本实验结果显示：大黄、UDA和UDA+强的松对胆汁淤积均有效，大黄在退黄、降低血清胆红素、降低ALP和

17、TBA方面疗效优于UDA和UDA+强的松，而在降低ALT方面无优势；UDA+强的松退黄、降低ALT的作用稍强于UDA.肝组织学检查结果示：光镜下，大黄治疗减轻了肝细胞的损伤和胆汁淤积，抑制了肝纤维化.电镜下，大黄治疗减轻了肝细胞的损伤和胆汁淤积，同时减轻了线粒体的损伤.胆汁淤积属中医“黄疸范畴，病机系湿热瘀毒郁阻血分，阻滞百脉，逼迫胆液外溢，浸渍肌肤所致.大黄系通腑祛瘀的主要药物，具有通腑解毒、活血化瘀、攻逐湿浊、通便泻下等作用，不仅利肝胆湿热，还清泻血分之瘀热，并具降气、利尿、降黄疸、抗菌、抗毒等诸多成效.本实验说明UDA对胆汁淤积是有效的，但由于缺乏合适婴儿的剂型，限制了它在儿科的应用.熊

18、去氧胆酸UDA是鹅去氧胆酸的7表异构物，较鹅去氧胆酸及其他胆酸更具亲水性.由于其外表活性弱，因此分裂、溶解膜质的倾向很弱，能稳定被疏水性胆酸结合的肝细胞膜，拮抗其细胞毒作用7.肾上腺皮质激素对胆汁淤积有一定利胆退黄作用，但长期使用副作用多，多数学者认为认为激素对淤胆型肝炎并无突出的效果,目前的中医治疗对淤胆型肝炎有更好的效果,且没有激素的副作用.本研究说明尽管加用激素后在降低TB，ALT方面疗效优于单用UDA组，但是从病理改变看加用强的松后病情有加重的趋势，故胆汁淤积时是否加用激素治疗有待进一步讨论.【参考文献】1ThieR,pitzG,BluHE,etal.hlestatiliverdiseaseJ.TherUsh,2022,61(8):521-527.2NgVL,BalistreriF.TreatentptinsfrhrnihlestasisininfanyandhildhdJ.urrTreatptinsGastrenterl,2022,8(5):419-430.3刘莉，梅其炳，李保莉，等.唐古