GB∕T 16551-2020 猪瘟诊断技术

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T16551—2020

代替

GB/T16551—2008

猪瘟诊断技术

Diagnostictechniquesforclassicalswinefever

2020-12-14发布2020-12-14实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T16551—2020

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

缩略语

3……………………1

临床症状与病理变化

4……………………2

临床症状

4.1……………2

病理变化

4.2……………2

结果判定

4.3……………2

样本的采集保存运输和处理

5、、…………2

器材

5.1…………………2

试剂

5.2…………………2

样品采集

5.3……………3

保存与运输

5.4…………………………3

样本处理

5.5……………3

实验室病原学诊断方法

6…………………3

免疫荧光抗体试验

6.1(FAT)…………3

免疫过氧化物酶试验

6.2(IPT)…………4

猪瘟病毒分离与鉴定

6.3………………5

猪瘟病毒检测方法

6.4RT-nPCR……………………6

猪瘟病毒实时荧光检测方法

6.5RT-PCR……………6

实验室抗体检测方法

7……………………6

猪瘟病毒中和试验

7.1…………………6

猪瘟病毒阻断抗体检测方法

7.2ELISA………………9

猪瘟抗体间接检测方法

7.3ELISA……………………9

猪瘟病毒化学发光抗体检测方法

7.4…………………9

综合判定

8…………………10

附录规范性附录试剂配制

A()…………11

附录规范性附录猪瘟病毒测定

B()TCID50…………14

附录规范性附录校准品的制备

C()……………………15

Ⅰ

GB/T16551—2020

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准代替猪瘟诊断技术与相比主要技术变化如下

GB/T16551—2008《》。GB16551—2008,:

修改了范围见第章年版的第章

———“”(1,20081);

增加了规范性引用文件见第章

———“”(2);

增加了缩略语见第章

———“”(3);

修改了临床及病理学诊断部分并更名为临床症状与病理变化见第章年版的

———“”,“”(4,2008

第章

2);

增加了样本的采集保存运输和处理部分见第章

———“、、”(5);

修改了病原学诊断部分并更名为实验室病原学诊断方法见第章年版的第章

———“”,“”(6,20083);

删除了兔体交互免疫试验部分见年版的

———“”(20083.1);

修改了免疫酶染色试验和直接免疫荧光抗体试验部分更名为免疫荧光抗体试验

———“”“”,“

和免疫过氧化物酶试验见年版的

(FAT)”“(IPT)”(6.1、6.2,20083.2、3.4);

修改了病毒分离与鉴定试验部分更名为猪瘟病毒分离与鉴定见年版的

———“”,“”(6.3,20083.3);

删除了猪瘟病毒反转录聚合酶链式反应见年版的

———“(RT-PCR)”(20083.5);

增加了猪瘟病毒检测方法和猪瘟病毒实时荧光检测方法见

———“RT-nPCR”“RT-PCR”(6.4、6.5);

修改了血清学诊断部分并更名为实验室抗体检测方法见第章年版的第章

———“”,“”(7,20084);

修改了荧光抗体病毒中和试验部分并更名为猪瘟病毒中和试验见年版的

———“”,“”(7.1,2008

4.1);

删除了猪瘟单抗酶联免疫吸附试验见年版的

———“”(20084.2);

增加了猪瘟病毒阻断抗体检测方法猪瘟抗体间接检测方法和猪瘟病毒

———“ELISA”“ELISA”“

化学发光抗体检测方法见

”(7.2、7.3、7.4)。

本标准由中华人民共和国农业农村部提出

。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中国兽医药品监察所

:。

本标准主要起草人王琴赵启祖徐璐王在时张乾义夏应菊范学政邹兴启朱元源李翠

:、、、、、、、、、、

丘惠深赵耘徐嫄

、、。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为

:

———GB/T16551—2008。

Ⅲ

GB/T16551—2020

引言

猪瘟是由猪瘟病毒感染猪引起的

(Classicalswinefever,CSF)(Classicalswinefevervirus,CSFV)

一种高度接触性致死性传染性疾病可造成巨大的经济损失和社会影响被世界动物卫生组织

,。(OIE)

列为必须报告的疫病我国规定为一类动物疫病

,CSF。

猪包括野猪是本病唯一的自然宿主发病猪和带毒猪是本病的传染源不同年龄性别品种的猪均

,,、、

易感一年四季均可发生感染猪在发病前能通过分泌物和排泄物排毒并持续整个病程与感染猪直

,。,。

接接触是本病传播的主要方式病毒也可通过精液胚胎猪肉和泔水等方式间接传播人其他动物如

,、、,、

鼠类和昆虫器具等均可成为重要传播媒介

、。

是黄病毒科瘟病毒属的成员之一只有个血清型个基因型

CSFV(Flaviviridae)(Pestivirus),1,3,

个基因亚型不同基因型间有很好的抗原交叉反应近年来由于临床上出现了持续性感染

10,。,CSFV

所致的无典型临床症状和病理变化的慢性和隐性感染形式以及多种疫病混合感染的现象的临

,,CSF

床诊断和病理学诊断只能作为初步诊断的依据对病原的实验室检测是确定病毒感染的主要方

,CSF

法要求诊断技术和标准更加特异和敏感由于诊断的需求和诊断技术的发展已

,。,GB/T16551—2008

经不适应要求针对感染普遍存在病毒载量低病毒血症时间短等特点最适用于活体动物的检

。CSF、,

测样本首先是扁桃体其次为抗凝全血若为病死动物可采集扁桃体脾脏肾脏胰脏回肠回盲瓣

,;,、、、、、、

肠系膜淋巴结和颌下淋巴结等含毒量较高的脏器进行检测采用抗原免疫检测法免疫荧光抗

。CSFV[

体试验免疫过氧化物酶试验可检测

(Fluorescentantibodytest,FAT)/(Immunoperoxidasetest,IPT)]

感染组织和细胞中的病毒抗原用于确诊如果结果可疑或者样本不足可以通过核酸检测技术确认

,;,。

如果样本量大可采用猪瘟病毒实时荧光检测方法进行初筛阳性者采用猪瘟病毒

,RT-PCR,RT-nPCR

检测方法和序列测定进行确诊和基因分型上述都不能确诊的样本采用经典的分离技术确诊

;,CSFV,

分离的病毒可用于进一步研究上述三类方法均为推荐的方法

。OIE。

目前实施疫苗全面免疫是我国防控的重要手段抗体检测主要用于疫苗的

,CSFCSF,CSFVCSF

免疫效果评价而对于一些不实施免疫疫苗的国家和地区来说抗体检测可以作为未免疫猪

,CSF,CSF

瘟疫苗猪群感染的诊断依据而在我国方法已成为监测免疫后抗体保护水平评

CSF。,ELISACSFV、

价猪群免疫效果的最主要手段根据检测目的不同可选择不同的方法对于我国疫苗采取的全

,,。CSF

面免疫后而开展的大规模普查间接抗体检测方法能够更加真实地反映中和抗体水平为免疫

,ELISA,

程序制定和抗体水平监测提供可靠的数据支持阻断抗体检测方法因其特异性强可用于引种

;ELISA,

的种猪检测化学发光抗体检测方法是近年来发展起来的一种新的酶联免疫检测方法利用化学发光底

;,

物提高检测的灵敏度同时增加检测的线性范围本标准中的化学发光抗体检测方法中采用了

,。CSFV

抗体的校准品并在检测中绘制校准曲线可以使抗体检测结果相对定量另外采用该方法进

CSFV,,。,

行检测能够大大缩短检测时间适应于田间推广使用最终的抗体确认可采用金标准方法病毒中和

,,。“”

试验方法和两类方法均为推荐的方法也是国际

(Virusneutralizationtest,VNT)。ELISAVNTOIE,

贸易指定试验

。

本标准中涉及了种病原和种抗体的实验室检测方法均可用于病原和抗体的

5CSF4CSFV,CSF

定性检测使用者可根据自身的实验条件能力水平以及待检样本的实际情况选择合适的方法

。、。

本文件的发布机构提请注意声明符合本文件时可能涉及和与蛋白表达及纯化

,,7.27.3CSFVE2

相关的专利的使用

。

本文件的发布机构对于该专利的真实性有效性和范围无任何立场

、。

该专利持有人已向本文件的发布机构保证他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下

,,

Ⅳ

GB/T16551—2020

就专利授权许可进行谈判该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案相关信息可以通过以下

。。

联系方式获得

:

专利持有人姓名中国兽医药品监察所

:。

地址北京中关村南大街号

:8。

请注意除上述专利外本文件的某些内容仍可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专

,。

利的责任

。

Ⅴ

GB/T16551—2020

猪瘟诊断技术

1范围

本标准规定了猪瘟的临床症状与病理变化样本的采集保存运输和处理实验室病原学诊断方法

,、、,

以及实验室抗体检测方法等

。

本标准适用于猪家猪野猪的猪瘟诊断

(、)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注明日期的引用文件仅注日期的版本适用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

实验室生物安全通用要求

GB19489

猪瘟病毒实时荧光检测方法

GB/T27540RT-PCR

猪瘟病毒阻断抗体检测方法

GB/T34729—2017