试验四植物抗逆性的测定

1、实验植物抗逆性的测定（电导仪法）一实验目的进一步理解和认识逆境胁迫对植物细胞膜透性的影响，了解电导法在植物逆境生理与抗性育种研究中的应用范围。二、实验原理在正常生长状况下，植物细胞膜保持着良好的选择透性，而当植物组织受到逆境（例如干旱、低温、高温、盐渍等）伤害时，由于膜脂过氧化、膜蛋白变性及膜脂流动性改变，造成膜相变和膜结构破坏，使得细胞膜透性增大， 从而使细胞内的电解质外渗， 以致植物细胞浸提液的电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，胁迫强度越大，伤害越重，外渗越多，电导率的增加也越大。同时也与植物抗逆性的强弱有关，抗性越强，伤害越轻，外渗越少，电导率的增加也越小。所以，通过测定外

2、渗液电导率的变化，就可以反映出细胞膜的伤害程度和所测材料抗逆性的大小。三、材料、仪器和试剂.材料：各种植物叶片（如丁香、小麦等）.仪器设备：电导仪；天平；恒温箱；真空干燥器；抽气机；恒温水浴锅；烧杯；剪刀或打孔器；吸水纸；纱布等。.试剂：去离子水四、实验步骤.容器的洗涤：电导法对水和容器的洁净度要求严格，所用容器必须彻底清洗，再用去离子水冲净，倒置于洁净滤纸上备用。.试验材料的处理：选取正常生长的小麦或其他植物相同部位叶片若干，剪下后，先用纱布拭净，分成2份，将其中一份放置50c左右的恒温多f中处理 30min,进行逆境胁迫处理。另一份放置在室温下作对照。.测定步骤（1）将处理组叶片与对照组叶

3、片用去离子水冲洗2次，再用洁净滤纸吸净表面水分，各称取2g,然后剪成长约1cm小段放入小烧杯中（大小以够容电极为度），并用玻璃棒压住，在杯中准确加入蒸储水 20ml,浸没叶片。 将其放入真空干燥器中，用抽气机抽气78min以抽出细胞间隙中的空气；重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶片下沉。（注：材料为阔叶时，最好使用打孔器取材）（2）将抽过气的小烧杯取出，放在实验桌上静置 20min,然后用玻棒轻轻搅动叶片，在2025c恒温下，用电导仪分别测定处理组和对照组得电导值为Ti和Ci。（3）测过电导率之后，再放入100c沸水浴中15min,以杀死植物组织，取出待其冷却至25 C时测其煮沸电导率，

4、分别为T2和C2。五、实验结果伤害率（）计算式为:Lt=工 100%丁2Lck= & 100%C2式中 Lt处理叶片的伤害率；Lck 对照叶片的伤害率。在电导率测定中一般应用去离子水,若制备困难可用普通蒸储水代替，但需要设一空白（蒸储水作空白），测定样品时同时测定空白电导值，计算时各电导值需减去相应的空白电导值。六、思考题 ,测定电导率时为何反复清洗仪器和样品实验植物组织水势的测定（小液流法）、实验目的验证植物组织水分移动方向由水势决定；掌握小液流测组织水势的方法。植物体内的生理生化活动与其水分状况密切相关，而植物组织的水势是表示植物水分状况的一个重要生理指标。目前，植物组织水势的测定主要有几

5、种方法：小液流法、折射仪法、压力室法、热电偶湿度计法等。压力室法较适于测定枝条或叶柄导管的水势。热电偶湿度计法较适宜测定柔软叶片的水势，且精确度高，可在一定范围内重复测定叶片的水势，是较好的水势测定方法。小液流法具有操作简便、反应灵敏、结果可靠、费用低廉诸多优点，因而 在我国目前的许多研究中，测定植物组织水势仍以小液流法为主要方法之一，同时该法也是校验其它方法的一个基准方法。二、实验原理将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中，当找到某一浓度的溶液与植物组织之间水分保持动态平衡时，这时可认为此植物组织的水势数值上等于该溶液的渗透势（溶质势）。因溶液的浓度是已知的，可以根据公式算出其渗透压取其负

6、值，即为溶液的渗透势（少推，代表植物的水势（ %） （water potential） o三、材料、仪器和试剂.材料：植物叶片或马铃薯块茎等。.仪器：试管、青霉素小瓶 9个；打孔器；镣子；移液管；烧杯；毛细滴管；刀片。2.试齐J： 1mol L-1CaCl2母液；甲烯蓝粉末。四、实验步骤1系列CaCl2溶液浓度配制（1）取干燥洁净试管 9个，贴上标签，编号，用 1mol L 1 CaCl2母液配成0.05、0.1、 10.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45mol L-侬度的 CaCl2溶椒，各管总量为 10ml,并塞上塞子（防止浓度改变），作为甲组。(2)另取干燥洁净的

7、小瓶 9个，贴上标签，编号，标明 0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.4、0.45mol LI浓度，分别从甲组取相应浓度 CaCl2溶1夜2.5ml盛于小瓶中，作 为乙组。2取样及测定(1)选取生长一致的叶片，用直径为0.5cm的打孔器钻取圆片，在玻璃皿内混匀，然后用镣子把圆片放进乙组小瓶中， 每瓶放1520片，(若采用植物块茎如马铃薯， 先用打孔器 钻取圆条，然后切成约1mm厚圆片，每瓶放5片)，放置30min左右，其间轻车5摇动3次， 以加速平衡。(2)到预定时间后，各小瓶加入微量甲烯蓝粉染色，摇匀，取毛细滴管，分别从乙组中取出溶液，插入甲组原相应浓度

8、CaCl2溶液的中部，轻轻挤出滴管内的溶液一滴，并小心地抽出滴管(注意勿搅动溶液)，注意观察小液滴升降动向。如果某一管中的小液滴悬浮不动，植物组织的水势等于该浓度溶液的水势，根据公式算出该溶液水势也即得出植物组织水势。若前一浓度溶液小液流下沉，而后一浓度溶液中上浮，则组织的水势值介于两浓度溶液水势 之间，可取平均值计算。五实验结果按下表记录实验结果。表1-1-1系列浓度CaCl2溶液的配置和实验结果记录1需配CaCl2溶液浓度1-1 mol L- CaCl2 溶小液流移动方向1、(mol L )液烝储水(ml)(上T、下J、一不动)(ml)(ml)0.050.59.50.101.09.00.151.58.50.202.08.00.252.57.50.303.07.00.353.56.50.404.06.00.454.55.5根据以下公式计算出植物组织的水势:公式中：加=少产iRTC （MPa）Ww一植物组织水势，单位：Mpa （兆帕）必一溶液的渗透势,单位：Mpa （兆帕） 1、C 一溶收浓度（mol L ）R 一气体常数（0.008314 L MPa mol 1 K 1）T 绝对温度（273 + t C ）i 一解离系数（CaCl2 =2