新冠核酸检测实验室PCR管八联管滤芯吸头等耗材质检和储存程序

1、新冠核酸检测实验室 PCR 管（八联管） 滤芯吸头等耗材质检和储存程序1 目的保证耗材的使用质量，合理的配用及存放。2 适用范围核酸扩增荧光检测实验室常用耗材：离心管；PCR 管（八联管）；滤芯吸头；PCR 用采血管、采样管、采样拭子和一次性吸管等；无核酸水、PBS 等缓冲液。负责人购买和储存程序购买前订出计划并定出品名、质量规格报相关部门订货及购买。购买后，验收合格即领取。常用的消耗品定点、定量地摆在实验台抽屉里，并标明品名及数量。特殊的消耗品放在指定的地方。每周用量要有记录，并及时补充及领取所用去的数量。订购消耗品前，应准确查询数量。玻璃用品应放在指定位置，存放要小心，以免损坏。 5 质检

2、程序5.1辅料质检的基本原则5.11 外包装检查:外包装应完整无损无污，标识清楚，检査品名、品牌，货号，规格、生产日期，有效期、保存条件等信息。内包装检查:内包装物品应与外包装标识一致，检查是否有破损，泄漏，内容物是否齐全，是否有相应的使用说明书等。性能质检:检测试剂耗材是否与其性能一致，比如吸头的准确性和气密性等污染物质检:检试剂耗材是否被常规检测项目的待检物污染，这种污染可能是物品生产环节，也可能是运输或实验室的保存过程中被污染。抑制物质检:检试剂耗材中是否存在PCR 反应的抑制物，比如核酸酶。5.2 辅料质检的前提条件5.21 弱阳性质控:需要准备弱阳性质控，包括标准物质、第三方质控或弱

3、阳性样品用于进行性能质控和抑制物质控。5.22.阴性质控:需要准各确定阴性的样品或空白对照，用于进行污染物的质控。5.23 重复次数:符合统计学计算的最常用的两个数字是5 和 20，5 通常是能进行统计学分析的最少重复次数，20 通常用于计算 95的置信区间。我科选择重复次数5。5.3 常见辅料的质检辅料的质检应结合实际工作中可能用到的场景，并非越苛刻越好，需要每个实验室结合自身情况来设计和调整参数。我科按以下方式质检。离心管：渗漏密闭性:将 5 个离心管加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。离心密闭性:将 5 个离心管加入半量纯水，放入离心机，10000rpm

4、，30min，管盖未崩开未漏液为合格。热密闭性:将 5 个离心管加入半量纯水，盖好盖子称重后放入金属浴中，56，30min， 再进行称重，离心管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。冷密闭性:将 5 个离心管加入半量纯水，放入-20冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。污染物质检:将 5 个离心管分别加入半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1min 后静置 5min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR 无扩增为合格。抑制物质检:将 5 个离心管分别加入弱阳性质控物，室温静置 5min，然后进行提取 RNA 核酸，DNA 核酸，室温静置 5min，作为模板进行扩增，qPCR 扩增未

5、被抑制为合格。PCR 管（八联管）:渗漏密闭性:将 5 个 PCR 管（八联管）加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡 30min， 没有墨汁渗出为合格。离心密闭性:将 5 个 PCR 管（八联管）加入半量纯水，放入离心机，1000rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格热密闭性:将 5 个 PCR 管（八联管）加入半量纯水，盖好盖子称重后放入PCR 仪，设置一个常用的 PCR 程序，程序运行完毕后，再进行称重，PCR 管（八联管）未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。冷密闭性:将 5 个 PCR 管（八联管）加入半量纯水，放入 20冰箱，24h，离心管未变形， 管盖未崩开未漏液为

6、合格。污染物质检:将 5 个PCR 管（八联管）加入半量阴性纯水，盖好盖子涡旋 1min 后静置 5min， 作为模板进行扩增，qPCR 无扩增为合格。抑制物质检:将 5 个 PCR 管（八联管）分别加入弱阳性质控物，室温静置 5min，然后进行提取RNA 核酸，DNA 核酸，室温静置5min，作为模板进行扩増，qPCR 增未被抑制为合格。空白荧光通透性:对于 qPCR，需要考察 PCR 管（八联管）是否有非特异性光信号，将 5 个空 PCR 管（八联管），盖好盖子后放入PCR 仪，设置一个常用的PCR 程序，程序运行完毕后，qPCR 无扩增为合格。阳性荧光通透性:对于 qPCR，还需要考察

7、PCR 管（八联管）是否会抑制荧光的通透性， 将 5 个。含弱阳性样品和扩增试剂的PCR 管（八联管），与确认无荧光干扰的 PCR 管（八联管），盖好盖子后放入 PCR 仪一同扩増，设置一个常用的PCR 程序，程序运行完毕后， qPCR 扩增未被抑制为合格。滤芯吸头:测试吸头需使用经校准的移液器。准确性:将 5 个吸头分别吸取定量的纯水称重，重量与体积的关系按照1g/mL 换算气密性:取 5 个吸头，吸取最大量程的含有1甘油的墨水，观察有色液体不出现在滤塞之上，液面相同为合格。防气溶胶性能:取 5 个吸头，吸取阳性核酸，反复吹吸 10 次，换另一个新吸头在阴性纯水中反复吹吸 10 次，取阴性纯

8、水作为模板进行扩増，qPCR 无扩增为合格。污染物质检:取 5 个吸头，吸取阴性纯水反复吹吸 10 次，取阴性纯水作为模板进行扩增， qPCR 无扩增为合格。抑制物质检:取 5 个吸头，吸取弱阳性质控物反复吹吸 10 次，然后进行提取;吸取 RNA 核酸和DNA 核酸反复吹吸 10 次，作为模板进行扩增，qPCR 扩増未被抑制为合格。PCR 用采血管、采样管、采样拭子和一次性吸管等: 主要考察污染物和抑制物污染物质检:将 5 个耗材加入一定量阴性纯水，盖好盖子涡旋 1min 后静置 30min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR 无扩增为合格。抑制物质检:将 5 个耗材分别加入弱阳性质控物，室温静置30min，然后吸取质控物进行提取;作为模板进行扩增，qPCR 扩增未被抑制为合格。无核酸水、PBS 等缓冲液:PH 值:测量各缓冲液的PH 值。污染物质检:吸取缓冲液作为模板进行扩增，qPCR 无扩增为合格。抑制物