检测中心培训-硝基呋喃类药物的残留检测

1、检测中心培训（二）080115硝基呋喃类药物代谢物的残留检测LC/MS/MS1一 背景简介硝基呋喃类药物对大肠杆菌、沙门氏菌引起的消化道感染效果很好硝基呋喃类药物价格低廉2一 背景简介硝基呋喃类药物有致畸、致癌等副作用1997年欧盟禁用2002年美国、中国禁用2006年肯定列表把它列为禁用药3二 硝基呋喃类药物的性质硝基呋喃类药物在体内代谢很快，原形药物是无法检测的代谢产物可稳定存在数月，所以残留检测以代谢物作为指示该类药物残留的标识物4二 硝基呋喃类药物的性质呋喃唑酮分子量225.2其代谢产物是AOZ,分子量102.1其代谢产物的衍生物是2-NP-AOZ ,分子量2365二 硝基呋喃类药物的

2、性质呋喃它酮分子量342.3其代谢产物是AMOZ,分子量201.2其代谢产物的衍生物是2-NP-AOZ ,分子量335.26二 硝基呋喃类药物的性质呋喃妥因分子量238.2其代谢产物是AHD,分子量115.1其代谢产物的衍生物是2-NP-AHD ,分子量2497二 硝基呋喃类药物的性质呋喃西林分子量198.1其代谢产物是SEM,分子量75.1其代谢产物的衍生物是2-NP-SEM ,分子量2098三 残留检测的前处理洗涤水解、衍生化和提取净化9三 残留检测的前处理洗涤方案一：2g均质好的样品，15ml的甲醇-水（2+1），混匀1min，4000rmp离心，弃掉上清液。（GB/T20752-200

3、6)方案二：5g均质好的样品，10ml的甲醇-水（8+2），混匀0.5min，振荡5min，3800rmp离心5min，弃掉上清液，同样再依次用10ml甲醇，10ml乙醇，10ml乙醚洗涤（农大）方案三：1g组织，不用洗涤（SN/T 1627-2005)10三 残留检测的前处理水解和衍生化试剂方案一：加入20ml 0.2M盐酸，加入0.3ml的衍生化试剂（75mg 2-硝基苯甲醛溶于10ml二甲基亚砜，0.05M）（GB/T20752-2006)方案二：加入20ml 0.1M盐酸，加入0.2ml的衍生化试剂（0.1M） （农大）方案三：加入30ml 0.125M盐酸，加入1ml的衍生化试剂（1

4、00mg 2-硝基苯甲醛溶于12.5ml二甲基亚砜） （SN/T 1627-2005)11三 残留检测的前处理水解和衍生化的时间方案一：37避光振荡16h（GB/T20752-2006)方案二： 37避光振荡过夜（农大）方案三： 37避光振荡16h （SN/T 1627-2005)12三 残留检测的前处理水解和衍生化的时间方案一：37避光振荡16h（GB/T20752-2006)方案二： 37避光振荡过夜（农大）方案三： 37避光振荡16h （SN/T 1627-2005)13三 残留检测的前处理净化方案一：加入5ml 0.1M的磷酸氢二钾，并用1M氢氧化钠调pH到7.4，离心上清液过HLB柱

5、，5ml乙酸乙酯洗脱，40 吹干，定容到1ml（10ml乙腈+0.3ml，用水定容到100ml）（GB/T20752-2006)14三 残留检测的前处理净化方案二：加入4ml 0.1M的磷酸氢二钾，并用2.5M氢氧化钠调pH到7，加入10ml乙酸乙酯，混匀1min，3800rmp离心5min，吸取上清液，乙酸乙酯10ml重复提取1次，合并乙酸乙酯，45 吹干，定容到0.5ml（含10%乙腈的0.02%乙酸溶液），再加入5ml正己烷，振荡20次，3800离心3min，下层进样。（农大）15三 残留检测的前处理净化方案三：加入4ml 1M的氢氧化钠，并用1M盐酸和0.1M氢氧化钠调pH到7-7.5

6、，3000rmp离心10min，上清液倒入250ml的分液漏斗中，残渣用5ml水洗， 3000rmp离心10min，上清液也倒入250ml的分液漏斗中，加乙酸乙酯40ml，振摇1ml，静置3min，重复提取1次，合并乙酸乙酯，通过装无水硫酸钠的漏斗过滤至鸡心瓶中，50 旋蒸至3-5ml，再转移到试管中， 50 吹干，定容至1ml（0.1%乙酸：乙腈：甲醇 3：3：2） （SN/T 1627-2005)16四 色谱条件方案一：（GB/T20752-2006)色谱柱：Atlantis-C18，3.5um，1502.1ml或相当者柱温：35 进样量：40ul流动相：A:水（含0.3%乙酸）；B:乙腈

7、（含0.3%乙酸）梯度洗脱方式17四 色谱条件方案二：（农大)色谱柱：Symmetry-C18，5um，1502.1ml或相当者柱温：进样量：10ul流动相：A:水（含0.02%乙酸）；B:乙腈（含0.02%乙酸）梯度洗脱方式18四 色谱条件方案三：（SN/T 1627-2005)色谱柱：C18，5um，1502.1ml或相当者柱温：25 进样量：15ul流动相：A:水（含0.1%乙酸）；B:乙腈梯度洗脱方式19五 质谱条件方案一：（GB/T20752-2006)离子源：ESI+电喷雾的电压：5V辅助气：7L/min，480 聚焦电压：150V碰撞室出口电压：11V去簇电压：45V20五 质谱条件方案二：（农大)离子源参数离子源：ESI+毛细管电压：2.8KV萃取电压：3VRF透镜电压：0.6V离子源温度：80 锥孔气流：30L/小时雾化器流速： 440L/小时21五 质谱条件方案二：（农大)质量分离器参数低质量数分辨率LM1：13.0高质量数分辨率LM1：13.0离子能量1：1.0入口电压：1V出口电压：2V低质量数分辨率LM2：13.0高质量数分辨率LM2：13.0离子能量2：1.0V氩气示数：2.5e-3mbar22五 质谱条件方案三：（SN/T 1627-2005)离子源：ESI+雾化喷嘴压力：35psi干燥器流量：9L/