白细胞、血小板显微镜计数法

1、白细胞显微镜计数法原理取稀释酸溶液， 将血液稀释一定倍数并破坏红细胞， 滴入计数池， 计数一定范围内白细胞数，然后换算成每升血中白细胞数。试剂白细胞稀释液：冰乙酸，加蒸馏水至100ml ，再加 10g/l 亚甲蓝（或结晶紫）1 滴，可使白细胞略着色，用时便于区别红细胞稀释液。器材显微镜：普通生物显微镜。微量吸管：吸管上刻有10 和 20ul 两个刻度（误差+-1%） 。微量吸管由于生产厂家不同，质量也不相同，但不论哪家产品，在使用前均需经严格校正，且应做到每位患者 1 支。细胞计数板：计数板是用优质厚玻璃制成，每块计数板又分两个计数池。在计数池两侧各有一条支柱，与计数池高度差是。所以将一块平整

2、的血细胞计数盖片放在两条支柱上时，盖片底面与计数池之距离为。目前国内通用的是改良Neubauer 计数板。这类计数板中，每个计数池的边线长宽各为3mm， 并被精密地刻划成9 个大方格， 每个大方格长宽各为， 其面积为 1mm2o加盖玻片后的容积为ImitfX .其中四角上的大方格用单线划成16个中方格，作白细胞计数用；中央1 大方格则用双线划成25 个小中方格，每个小中方格又用单线划成 16 个小格，总计为400 个小格。大方格每边长的误差是+-1%；盖片与计数池面之距离误差为+-2%。白细胞盖片：这是特制的血细胞计数用盖片，要求表面光滑平整，两面平整度为以内，有一定重量，不被血细胞悬液浮起。

3、其厚度应为一，通常大小为24X20X。盖片是否平整，可用光波干涉现象进行鉴定。其方法是：将盖片擦净后，平整放在标准平面平晶上，用日光灯照射，观察在平面平晶上所见到的干涉条纹，判断其是否合格。盖片在使用前应当用干净、柔软的吸水纤维制品拭净，特别注意勿让手接触使其污染，否则充液时易产生气泡。操作取小试管（12X75mm 一支，加白细胞稀释液。采指血 20ul ，吸入稀释液中，混匀。用小滴管或点眼棒取少量混悬液，滴入计数池中，静止2 3min.用低倍镜计数四角大方格的白细胞。计数时应按一定顺序，对压线的白细胞应按数上不数下，数左不数右的原则计数。计算白细胞/L=四大方格白细胞数（ND /4X10X1

4、0 6X20=NX 5/100 X 10 9=N/20X 10 9/L式中： 1/4 标示平均一大方格中白细胞数。X10表示10大方格内白细胞数。x 10 6表示1升稀释液中白细胞数。x 20为稀释倍数。血小板显微镜计数原理利用能保护血小板的稀释液， 将血液稀释一定倍数， 滴入计数池， 计数一定范围内血小板数，即可换算成每升血中血小板数。稀释液草酸铵稀释液草酸铵EDTA-Na2蒸馏水加至配好后用数层滤纸过滤，清亮后使用。此液对红细胞破坏力较强， 血小板形态清楚。但只加草酸镂，不加 EDTAa,则易产生草酸钙结晶。许汝和式稀释液尿素（AR或GR柠檬酸钠甲醛溶液蒸馏水 加至混合后过滤即可备用。此稀

5、释液破坏红细胞完全，视野清晰，血小板清楚。但尿素易分解，可因室温升高和保存过久而失效。一般只能使用 10d ， 4 摄氏度冰箱中保存，可稍延长使用期。一次配量不宜过多。归纳血小板稀释液的成分包括抗凝剂，如柠檬酸盐、 EDTA 盐等；固定防腐剂，如甲醛等；溶血剂，如尿素、草酸铵等，以及等渗剂等。一种好的稀释液应具备： （ 1）能有效地防止血液凝固； （ 2）迅速固定血小板，防止其聚集和形态改变； （ 3 ）要求红细胞破坏完全；（ 4）组成简单，易保存，不生长细菌。操作取稀释液，采末梢血 20ul 加入稀释液中，混匀，静置10min 左右。混匀后取出少许滴入计数池，在温室中静置10 15min 。

6、在显微镜下（低倍或高倍）计数中央大方格中 5 个小中方格（与红细胞同）的血小板数。（四）5小中方格血小板数（N） X5X10X20X10 6=NX 10 9/L注意事项如血小板数过低，可计数 25个中方格中的血小板数，结果X200.凡影响红白细胞计数的技术因素都应注意。全部器材和稀释液应十分清洁。因为血小板形态不规则且细小，任何灰尘斑点都可给计数造成困难，甚至误认。刺入皮肤深度要适当（2 3mm） , 血液应自然流出，避免挤压。动作要快，以防止血小板聚集。如和血常规一起做，应先采血小板计数用血。因血小板易聚集，所以滴入计数池之前应充分混匀，但又不能用力过度，以防止破坏血小板。血小板在计数池中，完全下沉后方可计数。沉积时间短，结果偏低。但过长，计数池中稀释液容易蒸发，尤其是夏季。所以最好将计数板放入温室中。用尿素稀释液，一般应在 1h 内计数完毕，放置时间过长，计数结果偏低 .（六） 质量控制血小板计数质控较难，但应按操作规程，并认真参照注意事项，减少血小板聚集，破坏，排