猪病实验室常规诊断技术衣原体病弓形虫间接血凝（IHA）试验操作方法

1、十一、衣原体病间接血凝（IHA）试验操作方法衣原体属的三个种都存在共同的属特异性抗原。衣原体病间接血凝试验，则是用已知的属抗原检测人、畜、禽血清或分泌物中的抗体。具有特异、敏感、简便、快速之优点。 （一）试剂盒内容 包括衣原体属抗原致敏绵羊红细胞、阳性和阴性对照血清。 （二）试验方法1 将生理盐水滴于V型反应板也孔中，每孔50微升。 2 取被检样品（血清或分泌物）50微升于第1孔中，与生理盐水混匀后吸50微升加于第2孔，依次作对倍稀释至所要求的稀释度。 3 每孔加抗原25微升，作定性检查时只需加两孔。人血清只加1：4和1：8两孔。阴道分泌物只加1：2和1：46。孔哺乳动物血清只加1：32和1：

2、64两孔，禽类血清只加1：8和1：18两孔。如作定量试验则可根据实际需要自行决定。试验：设阳性血清+抗原、阴性血清+抗原、生理盐水+抗原各1孔。 （三）结果判定1判定标准“+”红细胞全部凝集，形成一层均匀的膜，布满整个孔底 “+”红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者稍小 “+”红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状 “+”红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点 “”红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑 “-”红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点 “+”经上的凝集判为阳性凝集 2对照试验出现如下结果试验方可成立，否则应重试，阳性血清+抗原呈“+”；阴性血清+抗原呈“”，抗原+生理

3、盐水呈“”。 3被检样品判定标准： 人群血清效价1：8（+）者判为阳性；效价1：2者判为阴性；介于二者之间判为可疑。人群阴道分泌效价1：2（+）者判为阳性；效价1：2（+）者判为阴性。 哺乳动物血清效价1：64（+）者判为阳性；效价1：16（+）者判为阴性；介于二者之间判为可疑。 禽类血清效价1：16（+）者判为阳性；效价1：4（+）者判为阴性；介于二者之间判为可疑。 注被检样品采集及处理方法： 1. 血清：按常规方法采血及分离血清，要求无腐败。2. 阴道分泌物：用灭菌棉拭子插入阴道3厘米，蘸取分泌物，浸入1毫升生理盐水中，挤压后取液体，经20000转/分钟离心5分钟，取上清液作待检样品。(邱

4、昌庆)十二、弓形体间接血凝集试验（IHA）操作方法本细试验系用弓形体间接红细胞凝集试验冻干抗原（IHA抗原），检测人和动物血清中弓形体（虫）抗体的方法。检测在96（128）孔110V型有机玻璃（聚苯乙烯）微型反应板上进行。（一）操作方法1将IHA抗原按瓶签所标毫升数用灭菌蒸镏水稀释摇匀，1 5002 000转/分钟离心510分钟，弃上清液，加等量稀释液摇匀，置4左右24小时后使用。稀释后诊断液，10天内效价不变。2被检血清（以下称样品）的采取 采欲测弓形虫抗体的人或动物血液22.5毫升，大约能分离1毫升左右血清（应无血球）。3加稀释液 每孔加0.075毫升，如果没有取液器（移液器），可以把磨钝

5、（齐）了的12号针头接在盐水接头（针头接嘴）上，后装一橡皮乳头，组成移液管，将移液管竖直加三滴，每一滴约0.025毫升（每毫升约40滴，下同）。定性检查时，每个样品加4孔，定量检查加8孔，一块反应板上定性能检20个样品，定量能检10个样品。每块板上不论检测几个样品，均应设阳、阴性血清对照，对照均加8孔。4加样品、阳、阴性对照血清 第一孔加相应血清0.025毫升。5稀释 定性检查时，稀释至第3孔，定量和对照至第8孔，为稀释液对照至第7孔。定性的第4孔，定量和对照的第8孔，为稀释液对照；按常规用取液器稀释，如无取液器，可用0.025毫升的稀释棒稀释。将稀释棒放入第1孔内，用左手掌、右手背夹住稀释棒

6、，左右往复搓动，使棒旋转30次以上，然后将棒夹紧、夹平提起，移入相应的第2孔内，如法依次往下稀释，至应稀释的最后一孔，将棒取出。棒上带走0.025毫升液体。每个孔内的液体仍为0.075毫升，移棒时切莫使棒相互接触，旋转时不要让棒上下捣，否则容易产生气泡。各孔的稀释度分别为孔号12345678稀释度（1：）41664265或稀释液对照1024409616384稀释液对 照 6加诊断液（IHA抗原） 将诊断液摇匀，每孔加0.025毫升。用移液管加，每孔一滴，加完后将反应板置微型振荡器上振荡12分钟，直至诊断液中的血球分布均匀、从振荡器上取下反应板，盖上一块与反应板大小相近的玻璃片或干净的纸，以防灰尘落入，置2237下23小时后观察结果。结果判定 在阳性对照血清滴度不低于1：1 024（第5孔），阴性对照血清除第1孔允许存在前滞现象（+）外