植物生理实验四

1、实验四、过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）1过氧化氢酶（CAT）普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。2过氧化氢酶活性的测定方法： 氧电极法 比色法 化学发光法 滴定法3过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。 5H2O22KMnO44H2SO45O22K

2、HSO48H2O2MnSO4 一、实验原理4（一）材料： 新鲜植物叶片（二）仪器设备： 1. 研钵；2. 试管；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴锅；5. 容量瓶/量筒。二、材料、仪器设备及试剂5（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液:KMnO43.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；64. 0.1mol/L H2O2 ：市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸

3、性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L 草酸：称取H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。7（一）酶液提取：取植物叶片1g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至20ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至20ml容量瓶/量筒中，用同一缓冲液定容，000rpm离心1min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。三、实验步骤8（二）取2个试管（一个测定，另一个对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml（100加热2分钟），再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30恒温水浴中保温15min，立即加入10%H2S

4、O4 2.5ml。用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。9样品对照酶液2.5ml酶液2.5ml（ 100加热2分钟）2.5ml 0.1mol/L H2O22.5ml 0.1mol/L H2O230恒温水浴中保温15min30恒温水浴中保温15min10%H2SO4 2.5ml10%H2SO4 2.5ml0.1mol/L KMnO4（Bml）0.1mol/L KMnO4 （Aml）101.酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2mg数表示： 过氧化氢酶活性（H2O2mg/g/min） （AB）VT/(WVS1.7t) 式中：A对照KMnO4滴定ml数；B酶反应后KMnO4滴定ml数；VT提取酶液总量（ml）；VS反应时所用酶液量（ml）；W样品鲜重（g）；t反应时间（min）； 1.