血液病基因检测临床意义

1、关于血液病基因检测的临床意义第一张，PPT共七十一页，创作于2022年6月 PH染色体t(9;22)(q34;q11),BCR/ABL阳性 的慢性髓系白血病（CML） 慢性中性粒细胞白血病（CNL） 慢性嗜酸粒细胞白血病/高嗜酸粒细胞综征 （CEL/HES） 真性红细胞增多症（PV） 慢性原发性骨髓纤维化（伴髓外造血） （CIMF） 原发性血小板增多症（ET） 不能分类骨髓增生性疾病 七 类骨髓增生性肿瘤（MPN）第二张，PPT共七十一页，创作于2022年6月骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤 （MDS/MPN） 是一种克隆性造血干细胞疾病，特点表现为MDS与MPD交叠，有多种“有效”造血及病态造血

2、存在。 慢性粒-单核细胞白血病（CMML） 不典型慢性髓系白血病（aCML） 幼年型粒-单核细胞白血病（JMML） 不能分类的MDS/MPD 四 类第三张，PPT共七十一页，创作于2022年6月骨髓增生异常综合征（MDS） MDS也是克隆性疾病，以无效造血为其特征引起血细胞减少，骨髓及血象一至多系细胞病态造血。第四张，PPT共七十一页，创作于2022年6月MDS亚型分类 亚型 外周血象 骨髓象 1.难治性贫血 贫血；未见或罕见 仅红系增生异常， （ RA） 原始细胞 原始细胞 5%， 环形铁粒幼细胞15% 2. 难治性贫血伴贫血；未见或罕见 仅红系增生异常， 环形铁粒幼细胞原始细胞 原始细胞

3、5%， （） 环形铁粒幼细胞15% 3.难治性血细胞减少 血细胞减少（二系或 二系或多系细胞增生异常 伴多系增生异常 全系）；未见Auer小体； 10%；原始细胞 5%， （RCMD） 未见或罕见 原始细胞 ； 未见Auer小体； 单核细胞1109/L 环形铁粒幼细胞15% 4.难治性血细胞减少 血细胞减少（二系或 二系或多系细胞增生异常伴多系增生异常和 全系）；未见Auer小体； 10%；原始细胞 5%，环形铁粒幼细胞 单核细胞1109/L 未见Auer小体； （RCMD-RS） 环形铁粒幼细胞15% 第五张，PPT共七十一页，创作于2022年6月 亚型 外周血象 骨髓象5.难治性贫血伴 血

4、细胞减少， 一系或多系细胞增生异常；原始细胞增多1型 原始细胞5% 原始细胞5%9%；（RAEB-1） 未见Auer小体； 未见Auer小体；单核细胞1109/L6.难治性贫血伴 血细胞减少， 一系或多系细胞增生异常；原始细胞增多2型 原始细胞5%19% 原始细胞10%19%；（RAEB-2） Auer小体（）； Auer小体（）；单核细胞1109/L7.未归类的MDS 血细胞减少， 单一髓系细胞增生异常；（MDS-U） 未见或罕见原始细胞； 原始细胞5% ； 未见Auer小体； 未见Auer小体；8.5q-综合征 贫血； 少叶核巨核细胞正常或增多；del（5q） 血小板计数正常或增高； 原始

5、细胞5% ； 原始细胞5%； 细胞遗传学检测仅见 del（5q）异常； 未见Auer小体；第六张，PPT共七十一页，创作于2022年6月 AML是髓系原始细胞克隆性增生疾病，WHO分型将AML分为： 1. 伴有特殊染色体的AML 2.伴有病态造血的AML 3.治疗相关的AML和MDS 4.不伴特殊细胞遗传易位的AML 四亚型。 急性髓细胞白血病（AML）第七张，PPT共七十一页，创作于2022年6月1伴有特殊细胞遗传易位的AML （1）伴有t(8;21)(q22;q22)AML, AML1（CBF）/ETO的AML （2）伴有inv(16)(p13;q22)或 t(16;16)(p13;q22

6、), CBF/MYH11的骨髓嗜酸粒细胞增多的AML （3）伴有t(15;17)(q22;q11-12),PML/RAR 及变异的急性早幼粒细胞白血病（APL） （4）伴有11q23(MLL)异常增生的AML 第八张，PPT共七十一页，创作于2022年6月2伴有多系血细胞增生异常的 急性髓细胞白血病 （1）由MDS或MDS/MPD转化而成 （2）发病前无MDS病史第九张，PPT共七十一页，创作于2022年6月 3治疗相关的AML和MDS（1）与烷化剂相关（2）与拓扑异构酶抑制剂相关 （一些可以是淋巴系） （3）其他第十张，PPT共七十一页，创作于2022年6月 4不伴特殊细胞遗传易位的AML

7、（1）未分化AML （2）未成熟AML （3）成熟AML （4）急性粒-单核细胞白血病 （5）急性单核细胞白血病 （6）急性红白血病 （7）急性巨核细胞白血病 （8）急性嗜碱细胞白血病 （9）伴骨髓纤维化的急性全髓增生 （10）髓细胞肉瘤第十一张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第十二张，PPT共七十一页，创作于2022年6月淋系肿瘤： B系肿瘤和T/NK细胞系肿瘤 又可分为两大类型： 前体淋巴细胞肿瘤（淋系白血病） 外周或成熟淋巴细胞肿瘤（淋巴瘤） 前者指淋巴细胞分化的早期阶段起源的肿瘤 后者是分化成熟阶段来源的肿瘤第十三张，PPT共七十一页，创作于2022年6月B细胞系肿瘤 前体B细

8、胞肿瘤 前体B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤（B-ALL/LBL） 成熟（周围）B细胞肿瘤 B-慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（B-CLL/SLL） B-细胞幼淋巴性细胞白血病（B-PLL） 淋巴浆细胞淋巴瘤（LPL） Burkitt淋巴瘤（BL） 多毛细胞白血病（HCL） 浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤（PCM/PCL） 脾边缘区B细胞淋巴瘤，绒毛状淋巴细胞（SMZL） 结外边缘区B细胞淋巴瘤，MALT型（MALT-MZL） 结型边缘区B细胞淋巴瘤，单核细胞样B细胞（MZL） 滤泡性淋巴瘤（FL） 套细胞淋巴瘤（MCL） 弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）第十四张，PPT共七十一页，创作于2022

9、年6月T细胞和NK细胞系肿瘤前体T细胞肿瘤 前体T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病（T-LBL/ALL）成熟（周围）T细胞肿瘤 T-细胞幼淋巴细胞白血病（T-PLL） T-大颗粒淋巴细胞白血病（T-LGL） 侵袭性NK细胞白血病（ANKCL） 成人T细胞淋巴瘤/白血病（ATCL/L） 结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型（NK/TCL） 肠病型T细胞/淋巴瘤（ITCL） 肝脾T细胞淋巴瘤 皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤 蕈样真菌病/Sezary综合征（MF/SS） 间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）第十五张，PPT共七十一页，创作于2022年6月霍奇金淋巴瘤（霍奇金病）结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（NLPHL） 经

10、典型霍奇金淋巴瘤 结节硬化型霍奇金淋巴瘤，1和2级（NSHL） 富于淋巴细胞经典霍奇金淋巴瘤 混合细胞型霍奇金淋巴瘤（MCHL） 淋巴细胞消减型霍奇金淋巴瘤（LDHL）第十六张，PPT共七十一页，创作于2022年6月白 血 病 基 因 检 测第十七张，PPT共七十一页，创作于2022年6月 基因突变是指由于DNA分子中发生碱基对的_而引起的_的改变。增添替换缺失（D）（d1）（d2）（d3）增添、缺失或替换基因结构基因突变一定会导致生物性状的改变吗?第十八张，PPT共七十一页，创作于2022年6月mRNA:G A A甲 乙 丙 丁DNA碱基对替换，不一定引起蛋白质结构的改变。结论:碱基对替换一

11、定会导致蛋白质结构的改变吗?氨基酸:天冬氨酸天冬氨酸谷氨酸缬氨酸G A UG A CG U A第十九张，PPT共七十一页，创作于2022年6月1、二战时，美国在日本的广岛、长崎投下两颗原子弹，导致白血病患者出生率增加。 2、苏丹红进入人体可产生致癌作用。3、乙肝病毒使肝细胞进一步变异，肝细胞不凋亡，而且不断地再生，就形成了肝癌。 内因：DNA复制时自身也偶尔发生错误物理因素化学因素生物因素基因突变原因：第二十张，PPT共七十一页，创作于2022年6月基因突变的特点 大多数基因突变对生物体是有害的，只有少数是有利的，有些既无害也无益。多数有害第二十一张，PPT共七十一页，创作于2022年6月结果

12、：增殖过度，分化阻断，凋亡受抑第二十二张，PPT共七十一页，创作于2022年6月白血病的分子检测Southern blotNorthern blotWestern blotFISHPCR测序芯片第二十三张，PPT共七十一页，创作于2022年6月白血病的分子检测PCR方法优点 快速 灵敏 特异PCR方法缺点 假阳性 假阴性！第二十四张，PPT共七十一页，创作于2022年6月白血病的分子检测PCR：仅适用于染色体断裂点丛集于相对小的范围内（2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。 RT-PCR：可用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。 巢式RT-PCR：可显著提高反应的特异性，增加扩增效率。

13、RQ-PCR：可定量扩增产物。第二十五张，PPT共七十一页，创作于2022年6月白血病分子检测的临床应用白血病的分子生物学检查对白血病诊断分型及预后判断有以下几方面意义： 补充MIC检查的不足 发现新的亚型 监测白血病的微小残留病灶（MRD） 为研究白血病的发病机制打下基础 第二十六张，PPT共七十一页，创作于2022年6月白血病分子检测的临床应用 PCR方法检测MRD常用的分子标志 第二十七张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第二十八张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第二十九张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第三十张，PPT共七十一页，创作于2022年6月AML1-ET

14、Ot(8;21)(q22;q22) 68%原发性AML，在M2中的阳性率为2040%，在M2b中阳性率为90% 少见于M4和M1，极少见于MDS和骨髓增生综合症 AML1-ETO+白血病细胞有一定程度的分化能力，能分化至较成熟的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，且对化疗反应较敏感 AML1-ETO+患者对大剂量阿糖胞苷治疗效果好，具有较高的缓解率，无病生存期长，预后较其他AML亚型（M3除外）好 第三十一张，PPT共七十一页，创作于2022年6月AML1-ETO对初发患者进行t(8;21)和AML1-ETO融合基因的检测对其预后判断及治疗方案的制定相当重要 AML1-ETO定性结果不能用于评价患者M

15、RD情况 RQ-PCR能实时反映体内AML1-ETO水平。连续定量AML1-ETO转录本水平可判定有高复发风险的患者，以便及早治疗干预以防血液学复发 第三十二张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第三十三张，PPT共七十一页，创作于2022年6月PML-RARt(15;17)(q22;q21) ，98%M3患者阳性继t(15;17)之后，又先后发现4种M3特异的累及RAR的变异性染色体易位：t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)，dup(17)(q21.3;q23)， t(11;17)(q23;q21) 分别产生NPM-RAR，NuMA-RAR和PLZF-RA

16、R， STAT5b-RAR融合基因临床上，具有PLZF-RAR或STAT5b-RAR融合基因患者对ATRA治疗不敏感，其余三种染色体易位患者经ATRA治疗可获完全缓解 第三十四张，PPT共七十一页，创作于2022年6月PML-RARAPL累及的RAR基因及其伙伴基因结构示意图 第三十五张，PPT共七十一页，创作于2022年6月PML-RAR由于PML基因断裂点不同，产生3种不同的PML-RAR异构体 约55%的M3患者为L型，40%为S型，5%为V型，且每位患者只表达一种PML-RAR融合蛋白形态学上S型白血病细胞常为低分化的并且这些患者可见继发细胞遗传学异常，V型APL患者的白血病细胞体外对

17、ATRA的敏感度低 第三十六张，PPT共七十一页，创作于2022年6月PML-RARRT-PCR检测PML-RAR是敏感且特异的APL诊断方法，还能用于治疗后MRD监测。PML-RAR阳性提示的分子复发常早于临床复发3-6个月，为临床采取进一步治疗措施提供了保障 RQ-PCR能有效反映患者在发病、治疗、缓解、复发整个过程的白血病细胞负荷，在MRD监测中比RT-PCR具有更高价值 第三十七张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第三十八张，PPT共七十一页，创作于2022年6月FLT3基因突变Fms-related tyrosine kinase 3FLT3为III型受体酪氨酸激酶家族（还包括

18、c-FMS，PDGFR和c-KIT）成员之一，该类受体因在造血过程中造血细胞的增殖和存活中发挥重要调控作用据报道， FLT3-ITD和D835突变在AML中阳性率分别为24%(385/1585)和7%(30/429)，总阳性率超过30%，使其成为AML中最普遍发生突变的靶基因许多临床研究发现，FLT3突变还与临床预后密切相关，尤对60岁以下的AML患者，FLT3突变患者预后较差，且可独立于核型之外第三十九张，PPT共七十一页，创作于2022年6月CBF-MYH11inv(16)(p13;q22)及t(16;16)(p13;q22) 主要见于M4Eo，10%不伴异常嗜酸细胞M4，少见于M2CBF

19、-MYH11融合蛋白通过干扰核心结合因子（core binding factor,CBF）的转录激活作用而致病 具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检测率尤具临床意义 第四十张，PPT共七十一页，创作于2022年6月CBF-MYH11CBF-MYH11具有多种变异型，其中最常见的为A型，占80%RT-PCR检测CBF-MYH11进行MRD监测显示，大部分患者在完全缓解时PCR转阴，但仍有小部分长期存活者PCR仍为阳性最新研究采用RQ-PCR检测CBF-MYH11转录本水平来评价M4Eo患者MRD情况，预示复发 第四十一张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第四十二张，P

20、PT共七十一页，创作于2022年6月DEK-CANt(6;9)(p23;q34) 主要见于M2或M4，也见于M1，MDS-RAEB伴DEK-CAN的患者年龄一般较轻，且预后较差此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案 第四十三张，PPT共七十一页，创作于2022年6月WT-1基因高表达Wilms tumor 1是无特异分子异常的急性白血病患者理想的MRD检测指标伴此基因高表达者预后差，且表达程度与预后相关第四十四张，PPT共七十一页，创作于2022年6月BCR-ABLt(9;22)(q34;q11) 1530%成人ALL及35%儿童ALL 9号染色体的断裂点与CML相同，但22号染

21、色体断裂点具有异质性 此融合蛋白p190刺激细胞增殖的能力比p210要强。在转基因试验中观察到p190诱发的白血病具有起病早、发展快和恶性程度高的特点BCR-ABL+ALL患者预后差，5年存活率20%，因此这些患者在缓解后需进行骨髓移植治疗 第四十五张，PPT共七十一页，创作于2022年6月BCR-ABL对于自体或异体移植ALL患者，移植前后BCR-ABL的有无以及BCR-ABL的转录本类型与预后有关 第四十六张，PPT共七十一页，创作于2022年6月第四十七张，PPT共七十一页，创作于2022年6月E2A-PBX1t(1;19)(q23;p13) 56%儿童ALL和3%成人ALL 此类患者具

22、有高的白细胞计数，高的血清乳酸脱氢酶及中枢神经系统症状，预后差，平均无病生存期（DFS）仅6个月，3年DFS为20%，需给予这些患者强化治疗才能获得较好的预后核型和E2A-PBX1检测对此类患者的诊断和治疗方案的选择至关重要E2A-PBX1的预后价值需更多的临床研究证实 第四十八张，PPT共七十一页，创作于2022年6月TEL-AML1t(12;21)(p13;q22) 25%儿童ALL，是儿童ALL中最常见的分子异常 目前为止尚未在T-ALL，AML或NHL中发现t(12;21)，在婴儿白血病中极少报道，在成人白血病患者中频率很低（2%）此类患者发病年龄小（2岁10岁），WBC计数低（50

23、000/L），免疫表型为前B-ALL此类患者对治疗反应佳，完全缓解时间长，预后好 第四十九张，PPT共七十一页，创作于2022年6月TEL-AML1由于12p和21q末端在常规显带中很相似，因此常规细胞遗传学方法检出率仅0.05%，需应用FISH或RT-PCR方法提高检测阳性率TEL基因重排是独立预后因素，RT-PCR检测TEL-AML1融合基因能将低危险度与高危险度的ALL患者区分开来。因此早期检测TEL-AML1融合基因对临床预后，确定合适的治疗方案都有重要意义 第五十张，PPT共七十一页，创作于2022年6月MLL相关融合基因 累及MLL基因的分子异常见于5.2%AML，22%ALL和混

24、合性白血病及某些淋巴瘤，还可见于治疗相关白血病，尤接受topoisomerase II抑制剂治疗的患者 MLL基因涉及五十余种染色体易位，产生不同的融合蛋白，且每种融合蛋白都与特定的白血病表型相关。最常见的有： t(4;11)(q21;q23) MLL-AF4融合基因 ALL t(9;11)(p22;q23) MLL-AF9融合基因 AML t(11;19)(p13;q23) MLL-ENL融合基因 AML及ALL第五十一张，PPT共七十一页，创作于2022年6月MLL相关融合基因MLL相关融合蛋白的致病性还不清楚，推测其可能具有双重作用： 融合蛋白可能获得新的功能，促使细胞转化 MLL发生断

25、裂后，缺失锌指结构域的MLL不能与DNA结合，失去其转录活化功能，使受MLL调节的靶基因（HOX基因）表达异常，也影响造血细胞的发育 第五十二张，PPT共七十一页，创作于2022年6月MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)t(4;11)的发生率在不同年龄段是不同的，在婴儿ALL中最多见，为5070%，而在儿童和成人中较低，分别为2%和36%此类患者发病年龄低（通常90% CML患者BCR-ABL融合蛋白（p210）的酪氨酸蛋白激酶活性较正常ABL高，可能是BCR对ABL激酶活性调节区的作用所致由于5%CML患者为隐匿性Ph染色体，因此无Ph染色体CML患者还需使用更灵敏的分子检测手段如

26、FISH或RT-PCR检测BCR-ABL融合基因RT-PCR还能区分e1-a2和b2-a2/b3-a2二种BCR-ABL转录本，从而区分ALL患者与CML急淋变患者，进而分别对两种不同患者采用不同的治疗方案C M L第六十二张，PPT共七十一页，创作于2022年6月BCR-ABL巢式RT-PCR检测BCR-ABL融合基因用于CML移植患者移植后MRD监测。可在患者血液学复发前的624个月骨髓检测就呈阳性。 RQ-PCR还能动态观察患者治疗后BCR-ABL转录本水平变化情况，反映疗效。 第六十三张，PPT共七十一页，创作于2022年6月GATA2基因突变调控早期造血干细胞增殖分化的转录因子，维持造血干祖细胞的增殖和自我更新能力CML急变患者中新发现GATA2基因突变， 而CML慢性期、加速期，AML（M1-M7），MDS，ALL，CLL，淋巴瘤和骨髓瘤患者，以及正常对照均未发现该突变，可见GATA2基因突变仅与CML急变相关，是CML疾病进展过程中的获得性突变。总发生率为12.5%（5/40），且均造成CML急粒单变GATA2基因突变与CML患者疾病进展和预后的关系有待进一步阐明第六十四张，PPT