Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1、标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程1.目的描述Waters高效液相色谱仪标准操作规程。2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程,QC主管负责监督本规程的实施。4.定义HPLCHighPerformanceLiquidChromatography,高效液相色谱仪。5.安全注意事项有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。6.规程WatersHPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱（柱温箱）紫外检测器控制及数据处理系统（Millennium32化学工作站）。HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序标题Waters高效液相色谱仪

2、标准操作规程对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开Millennium32化学工作站。泵与色谱工作站的连接：对于510泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在Remote状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按Menu键，待显示屏切换至Mode状态下，其状态是Loca，按Edit/Enter键，在Local的L前有闪动的光标显示，按人键，Local转换成Rem，再按Edit/Enter键，此命令已输入进去,最后按Stop/Run键，使泵处于Run状态这时泵和工作站的连接即告成功。泵的任何动作都可由工作站来控制。还应注意这一步工作在

3、每次开机时都要进行。对于Alliance2690系统：先打开Alliance2690主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入Millennium32化学工作站。对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经0.45卩m的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表）过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。应养成良好操作习惯：规范操作，树立保护HPLC整套系统的概念，尤其对于输液泵、色谱柱、检测器，在使用后应及时冲洗，以免污染而使其寿命缩短或损坏，尤其

4、如操作者使用了含盐的流动相，更应注意清洗的步骤：首先用脱过气的纯水在流速为lml/min左右冲洗3060分钟，再用含50%以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速冲洗2030分钟左右。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程如要卸下柱子，在经过上述冲洗过程之后，再经纯甲醇或乙腈以1ml/min的流速冲洗2030分钟，柱子卸下后应马上拧紧柱堵。流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式，启动泵时，应在2分钟之内由小流速慢慢增大到所需的流速，泵关闭时亦然（流速递减）。切忌流速的骤变。关闭顺序首先退出Millennium32化学工作站，再关闭系统的其他部分。Millennium32化学工作站Millenni

5、um32色谱管理系统是集数据采集、处理、HPLC系统的控制、结果的管理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系统的基本操作知识。Millennium32化学工作站的进入打开化学工作站，系统自动进入ProgramManager界面，双击Millennium肖像，这时进入Millennium界面，双击SessionManager图标，系统将自动初始化，以使工作站和HPLC整套系统进行联接。初始化后，按系统要求键入你的UserName和Password，这时你已进入该系统。Project的进入和建立Project的进入：在SessionManager窗口下，击Project肖像（或从View

6、中选择Projects）,在其中有已建好的Project，双击你所需的Project肖像，再进行你想做的工作。Project的建立从File中选择New，即显示NewProject的画面。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程在ProjectName中输入你的Project名称。在InitiallzeProject项目中选择Copy中的filterandfields或Methods。在FromProject中选择要拷贝的现存Project。选择Tablespacesize。选OK，存贮并退出。当Millennium软件在建立一个新的Project时，在屏幕上及时显示出完成建立新Projec

7、t的百分比。当达到100%时，在SessionManager画面即出现一个新的Project肖像。收集数据的一般过程使用Millennuium32收集数据的一般过程如下：在Project窗口内建立收集数据所需仪器的仪器方法；建立包括此仪器方法的方法组；使用此方法组收集数据。本部分包括：建立仪器方法，建立方法组，收集样品。建立/修改仪器方法从SessoinManager窗口，打开所需的Project。选择Method按钮，现存的方法的肖像即出现在屏幕上。从命令菜单中选择File，然后选择其中的NewInstrumentMethod，即出现SystemOpen对话框。在目录中选择收集数据需要使用的

8、色谱硬件系统的名称，如：System_1。按OK，这时InstrumentMethod窗口即显示出来。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程窗口的上部分是该系统的所有仪器的肖像。用鼠标器将需要设定仪器参数的仪器部件激活，然后在仪器肖像上双击两下，即出现InstrumentDialogBox画面。对各个部件设置操作条件，或通过输入新的参数来更改以前的参数。例如：定义泵参数，先双击SIM/PCM的肖像。填写泵参数，按OK。当所有参数设置完成后，按OK。即回到InstrumentMethod窗口。选File中的SaveAs存贮仪器方法文件，如有需要，起一文件名，按OK。选择File中的Exit，

9、即回到Project窗口。新的仪器方法肖像即出现在此窗口下。建立方法组(MethodSet)仪器方法编好后，必须存于一方法组中，才能在QuickSetControl中调用。在Project窗口下选方法肖像。选File中的NewMethodSet，即显示出MethodSet对话框。在此画面的InstrumentMetho一栏，选择已确定的仪器方法。其他项目可空着不填。然后选File，SaveAs。输入方法组名后，按OK。选File，Exit。即退回到Project窗口。新设置的方法组肖像即出现在此窗口下。收集样品：完成以上各步骤后，即可收集样品。在Project窗口下选择QuickSetCont

10、rol肖像。出现SystemOpen对话框。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程选择建立仪器方法时确定的色谱硬件系统,按OK。Control窗口。即出现QuickSet在此窗口下的SampleLoadingTable中用鼠标器按第一行，这时Millennium软件会自动填充各项初始参数。通过输入新值可更改表中的各项参数，表中的瓶号（对于高效液相色谱仪的进样表，除另有规定外，按括号法安排进样顺序。即第一针为标准品1作为系统适用性共进6针，要求RSD不大于2%,随后为标准品2,进样次数为2针，然后为样品1到样品3，各进2针。样品3后为标准品1，依次类推,直到将所有样品都安排在进样表中）进样次

11、数,进样体积,运行时间等项目对自动进样器有控制作用。在MethodSetReport一列中选择在前面刚刚建立的方法组。在运行方式（mode）中选RunOnly。选择进样方式：菜单mode下选单个样品或样品组进样。将SampleLoadingTable中第一行点黑。击SetupInstrument钮，启动系统。系统启动后可击baselinemonitor图标，即可观察基线。待基线平稳后,击绿灯或样品盘肖像准备进样。出现Injectorwait提示信息,随即进样。在样品测试过程中,系统会在QuickSet窗口下显示瓶号和进样次数及运行时间。并可在此窗口下观察检测器的输出情况。屏幕上显示的检测器输出

12、是自动满量程方式（即自动按最大信号满格输出）。当收集完色谱数据后,选择File,Exit。退出QuickSet窗口。样品收集完成后，Millennuiun32会自动存贮收集的数据。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程建立数据处理的方法在Millennuium32中，完成不同的任务需编辑不同的方法，如仪器方法（收集数据），处理方法（定性定量分析），报告方法（打印实验报告）等。本部分包括：*重新调出色谱峰进行观察。*谱图积分及确定积分表中的参数。*输入组分表资料。*存贮数据处理方法。调阅色谱图进入在其中收集样品的Project，在此窗口下选Channel肖像。在ChannelViewTabl

13、e中选择欲进行色谱分析的文件行并使其变黑。在Tools下选择Review肖像，这时在ReviewData窗口下即显示出你调入的色谱图。选File，NewMethod。在NewMethod对话框中指定数据处理的类型，如LC，选OK。色谱图的积分选View，IntegrationTable。在屏幕下部即出现IntegrationEventTable。在PeakWidth，MinimumArea，MinimumHeight方框中输入适宜的数值。按Integration按钮，观察积分情况，并适当进行积分参数的调整。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程输入组分资料选View，ComponentTa

14、ble。即可见到空的组分表。选Options，FillTableFromResult，即可自动填充积分完毕的色谱图的组分表。也可用手动方式修改表中的参数。按Calibration/Quantitate后，选View，ResultTable。即可看到积分的结果。存贮数据处理方法在ReviewData窗口下，选File，SaveMethod。在ProcessingMethodSaveAs对话框的窗口下输入数据处理方法名称。按OK，贮存ProcessingMethod。在组分表的上方可看到新的ProcessingMethod的名称。选File，Exit。即可退出ReviewData窗口，回到Proj

15、ect窗口。6.3.5重新观察色谱结果进入你所需的Project窗口。击ResultView肖像。在ResultViewTable中选择你想观察的色谱数据。击Review肖像，你所选择的第一个色谱数据的谱图将在ReviewData窗口下，其结果将显示在ResultTable中的第一行。按NextCh/Inj的方框即可看到下一针进样的有关资料。选File，Exit。即可回到Project窗口。报告方法的编辑及试验报告的打印标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程启动报告出版系统进入“PROJECT”窗口。在Views下按一下方法肖像。选择File，NewReportMethod。这时即可编辑新

16、的报告方法。在报告排版窗口中，右边为一张模拟的白纸，左上方的列表为排版时可放置在右边纸上的项目。如图谱，积分表，样品信息，仪器方法等，左下方为报告头标和脚标（如土。选择Individual为每个结果有一个报告，选SummaryofResultSetsAll方式为打一个集中的报告。按0K。设计报告格式按一下ChromatogramGroups肖像。在ChromatogramGroups列表中选择Auto-scaledChromatogram。并在报告页面上按一下，用鼠标器将此图形放在画面合适的位置上。用鼠标器将箭头放在画面的边缘，当箭头变成双箭头时将图形放大或缩小。选择Format，Landsc

17、ape。可将图谱垂直放置。按一下MethodGroup肖像，从MethodGroup的列表中选择InstrumentMethod，并在报告页面上的合适处按一下。这时InstrumentMethod方框将出现在报告页面上。按一下TableGroups肖像，在TableGroups，并在报告格式上的合适位置上按一下。选择Format，PageSize。可改变报告尺寸的大小。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程选择Customize,Header。即出现Header窗口。在此窗口下选择Generalinformation肖像。在GeneralinformationField列表中按一下Date

18、。这时在FieldName的方框中即出现Date方框。可用鼠标器将此方框移动到合适的位置。可用文字，箭头，方框等工具在Header窗口下增加你感兴趣的内容。选File，Save。输入Header的名称（如：My_Header，按OK，返回到Header窗口。选File，Exit。即回到ReportPublisher窗口。在Customize，Footer。即出现Footer窗口。按一下Generalinformation肖像，在GeneralinformationField列表中按一下PageNumber的方框。将此方框放在报告页面的注脚位置上。选File，Save。输入Footer的名称（如

19、：My_Footer），按OK，返回到Footer窗口。选File，Exit。回到ReportPublish窗口。在Footer列表中选刚编好的脚标。存储报告方法选File，Save。输入此报告的方法名（如：My_Report），按OK,返回到ReportPublisher窗口。选File，Exit。即回到PROJECT窗口。在此窗口下即可看到My_Report报告方法的肖像。标题Waters高效液相色谱仪标准操作规程报告格式预览：报告格式设计好后，在打印之前，可在此预先看到打印效果，如需修改可随时切换到报告出版窗口，边看边修改，直到满意为止。在PROJECT窗口下，选Result肖像，即出现

20、ResultViewTable表。在此表上选择需要报告的结果文件，使其变黑。按一下Preview肖像,即出现ReportMethodSelection窗口。从目录上选择刚才已建立好的报告方法，按OK。这时即出现刚才所选结果的报告。在上画面上按NextPage或PrevPage即可看到报告的下一页或上一页。按方法编辑肖像即可对当前方法进行编辑。按打印肖像，即可将此报告打印出来。选择File，Exit。即可退出报告画面，回到“PROJECT”窗口。批量进样结果的处理及打印报告当已有确定的处理方法后，可用此方法处理数据。在ChannelViewTable表中选择你要的样品行并将其按黑。在Tools下击ProcessandReport肖像。这时即出现ProcessandReportOptions对话框。在处理方法一栏中选择UseSpecifiedProsessingmethod并指定处理方法，把Print选择框的叉扇掉。按OK。这