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文档简介
1、抗肿瘤药物药效学指导原则一、基本原则抗肿瘤药物分类细胞毒类药物(cytotoxic agent) :包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等;生物反应调节剂(biological response modifier) ;肿瘤耐药逆转剂(resistance reersal agent) ;肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer) ;肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor) ; TOC o 1-5 h z 分化诱导剂(differentiation inducing agent);生长因子抑制剂(growth f
2、actor inhibitor);反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide)。抗肿瘤药物药效学需研究内容包括体外抗肿瘤试验,体内抗肿瘤试验。评价药物的抗癌活性时,以体内试验结果为主,同时参考体外试验结果以做出正确的 结论。I 类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。二、体外抗肿瘤活性试验试验目的对候选化合物进行初步筛选;了解候选化合物的抗瘤谱;为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考,如剂量范围、肿瘤类别等。试验方法选用 10-15 株人癌细胞株,根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度,按常规细胞培养法进行培养;推荐使用四氮唑盐MTT 还原法、XTT 还原法、磺酰罗丹
3、明B(SR 染色法、或51Cr 释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。药物与细胞共培养时间一般为 48-72 小时,贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组,阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药,阴性对照为溶媒对照。评价标准以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线,然后采用Logit 法计算半数有效浓度(IC50 值或 EC50 值 )。体外试验至少重复一次。附注:评价药物抗癌活性的方法:MTT 还原法基本原理:是一种能接受氢MTT 转化成不溶(DMSO) 溶解甲四氮唑 MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-dipheny
4、l-tetrazolium bromide原子的染料。活细胞线粒体中与NADP 相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的性的蓝紫色的甲月替 (formazan) ,而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽月替后,在一定波长下用酶标仪测定光密度值,即可定量测出细胞的存活率。 TOC o 1-5 h z 操作步骤:选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞,用胰酶消化后,用含10小牛血清的RPMI l640培养基配成5000 个 ml 的细胞悬液,接种在 96 孔培养板中,每孔接种200l , 37 ,5CO2 培养 24 h 。实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基,对照组则换含等体积溶剂的培养基,每组设3 5 平行孔,37
5、,5 CO2 培养4 5 d。弃去上清液,每孔加入200 l 新鲜配制的含0.2 mg ml MTT 的无血清培养基37继续培养4 h 。小心弃上清,并加入200 l DMSO,用微型超声振荡器混匀后,在酶标仪上以试验波长为570 nm ,参比波长为450 nm 测定光密度值。结果评定:按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率:肿瘤细胞生长抑制率(1- OD 实验 /OD 对照 ) 100 以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图可得到剂量反应曲线,从中求出样品的半数杀伤浓度IC50 。合成化合物或植物提取纯品的IC50 10 g m1 或植物粗提物的IC5060 % 为无效;T/C % 60
6、%,并经统计学处理P0.05 为有效。小鼠肿瘤模型生长较慢小鼠肿瘤采用与裸鼠移植瘤同样的测量瘤径的评价方法。生长较快小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。试验结束后处死动物,称体重, 解剖剥离瘤块,称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1 克,或 20% 肿瘤重量小于400 毫克,表示肿瘤生长不良,试验作废。疗效评价公式:给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重肿瘤生长抑制率= 100%阴性对照组平均瘤重评价标准:肿瘤生长抑制率40% 为无效;肿瘤生长抑制率 40%,并经统计学处理P50%( 2 )细胞形态学观察:可在光学显微镜与电镜下观察候选化合物作用后细胞的形态学变化,对照组的早幼粒细胞应 90%-95%
7、 , 候选化合物组细胞分化,成熟粒细胞占比例越高,说明该化合物的分化效果越好。实体瘤细胞的分化诱导常用细胞株:人肝癌HepG2 、 SMMC7721试验方法及评价标准:主要测定细胞的甲胎蛋白(AFP) 、 白蛋白含量, -谷氨酸转移酶(-GT)、 酪氨酸转氨酶( TAT )活性及观察细胞形态。分化细胞AFP 含量、 TAT 和 -GT 活性明显降低,白蛋白含量增加,细胞胞质增加、核缩小。体内试验常用人癌细胞小鼠肾囊膜下移植试验、小鼠髓单核细胞白血病试验和人癌细胞裸小鼠移植瘤模型等。可选两种模型,根据肿瘤鼠生存时间、肿瘤的体积及形态变化,观察分化诱导效果。重复试验一次。肿瘤治疗增敏剂增敏剂主要是指放射治疗增敏剂,能增加临床上恶性肿瘤放射治疗或其它治疗的疗效及降低治疗后的复发率。体外试验分别选择对放射、化疗药物具有中、低度敏感的人肿瘤细胞株,采用MTT、 SRB 或细胞集落形成方法进行化合物的细胞毒性试验,以IC50 值作为评价指标。体内试验选用对射线及化
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