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文档简介
1、5.3选修三荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量。其原理是:在PCR反应体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针,当Taq酶催化子链延伸至探针处,会水解探针,使荧光监测系统接受到荧光信号,即每扩增一次,就有一个荧光分子生成。相关叙述错误的是引物与探针均具特异性,与模板结合时遵循碱基互补配对原则Taq酶可以催化子链沿着3-5方向延伸,需dNTP作为原料反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关若用cDNA作模板,上述技术也可检测某基因的转录水平下列实验中相关操作的叙述正确的是观察口腔上皮细胞临时装片时,需滴加蒸馏水以维持细胞正常形态制备植物根尖有丝分裂装片
2、的步骤为:解离-染色-清水漂洗-制片植物组织培养实验中需使用无菌水对消毒后的外植体进行多次漂洗用胰蛋白酶处理后的动物细胞需在生理盐水中进行传代培养小鼠Rictor基因的正常表达与精子的发生密切相关,敲除该基因的小鼠会出现无精症。研究人员利用流式细胞仪对正常鼠和敲除鼠睾丸生精小管中的细胞进行了DNA含量测定,结果如下图(精原细胞DNA含量为2C)。下列说法正确的是DNA含量为2C和1C的细胞分别对应精原细胞和精子与正常鼠相比,敲除鼠的初级精母细胞数量显著下降DNA含量由2C到4C的变化过程中会发生基因重组据图推测敲除鼠精子形成过程阻滞在减数第二次分裂期间(18分)水稻的雄性不育植株是野生型水稻的
3、隐性突变体(正常基因M突变为m)雄性不育植株不能产生可育花粉,但能产生正常雌配子。1)水稻的花为两性花,自花授粉并结种子。在杂交育种时,雄性不育植株的优点是无需进行,大大减轻了杂交操作的工作量。(2)我国科研人员将紧密连锁不发生交换的三个基因M、P和R(P是与花粉代谢有关的基因,R为红色荧光蛋白基因)与Ti质粒连接,构,通过法转入雄性不育水稻植株细胞中,获得转基因植株,如下图所示。雄性不育植株(基因型mm)转入M、P和R基因A转基因植株厂无荧光植株(占50%)0f红色荧光植株(占50%)(3)向雄性不育植株转入M基因的目的是让转基因植株。转基因植株自交后代中,雄性不育植株为荧光植株,由无荧光植
4、株和红色荧光植株的性状分离比为分析,P基因的功能是。4)雄性不育植株不能通过自交将雄性不育的特性传递给它的子代,而育种工作者构建出的转基因植株的特点是(5)以转基因植株自交产生的雄性不育植株作为母本,以其他水稻品种为父本进行杂交,获得杂交稻。转基因植株中的M、P和R基因不会随着这种杂交稻的花粉扩散,这是由于转基因植,因此保证了雄性不育植株和杂交稻不含M、P和R基因。(除注明外,每空2分,共18分)(1)去雄(2)重组DNA农杆菌转化(3)雄配子可育无1:1使带有P基因的花粉败育(4)自交后既产生雄性不育植株,用于育种,也可产生转基因植株用于保持该品系(5)紧密连锁的M、P和R基因不会发生交换(
5、即M、R基因不会出现在没有P基因的花粉中)(1分);而且含有P基因的花粉是失活的(1分)(16分)浮萍是简单的单子叶水生漂浮植物,被广泛应用于除草剂的筛选、水环境污染的修复;浮萍的淀粉和蛋白含量高而被开发为生物质能和优质蛋白生产的优势原料。本研究拟通过在浮萍中过表达大豆液泡膜抗盐基因来增强浮萍的抗盐性,以期获得能够应用于盐碱水域生长,并净化污水的浮萍株系。(1)在浮萍的生长繁殖过程中,除自身分泌的激素调节外,还可以通过添加,以提高淀粉和蛋白质的含量。(2)通过分析农杆菌转GUS基因的效率,筛选能进行高效的转化的菌种。GUS组织化学染色是将外植体浸没于GUS染液中染色。GUS瞬时表达率=(有相应
6、级别GUS基因瞬时表达的外植体数/外植体总数)X100%。使用不同农杆菌对抗性浮萍愈伤组织的GUS瞬时表达率检测结果如下图,通过检测结果显示,因此浮萍遗传转化确定选用农杆菌EHA105。EHAL05GV3101C58C1农杆菌菌种(3)本实验使用添加不同浓度乙酰丁香酮的菌液侵染浮萍,据下图实验结果发现随,侵染效率。乙酰丁香酮浓度为100pmol/L时,浮萍的侵染效率比乙酰丁香酮浓度为200pmol/L时高出了%。0.4050100150200乙欣丁香朗浓度(pM)4)在农杆菌介导的遗传转化过程中,防止农杆菌过度生长是转基因成败的重要环节。植物材料和农杆菌共培养结束后,转化组织需要脱菌培养,需要
7、用抑菌类抗生素抑制农杆菌的生长,以防止农杆菌过度生长对转化组织产生毒害作用。因此选择合适的抑菌抗生素和浓度很关键oOD600指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。600吸光值正比于溶液中的吸光物质的浓度,通常用于细菌细胞密度(OD600)测量。由下图可知,对农杆600菌EHA105都有很好的抑制效果;其最佳浓度都选用300mg/L的原因是。哝度(mg/)(5)浮萍已被成功用于植物生物反应器方面的开发和生产。植物生物反应器是指利用植物或整株植株,大量生产具有重要功能的蛋白质,如抗体、疫苗或次生代谢产物等。与动物细胞和微生物发酵相比,具有明显的优势,如植物细胞具有,能够脱分化和再分化。(16分)(1)植物生长调节剂(2分);(2)农杆菌EHA105的侵染效率要高于GV3101和C58C1(2分);(3)乙酰丁香酮浓度的升高(
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