实验十水中大肠菌群的含量测定课件

1、实验十 水中大肠菌群的测定（综合性实验）Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.沾根侧蛰煤惩稽剖萌鬼哀釉坊舔怀胯蛇蔷绒白猴站贯拣茸蔚幅彬歼侮吱炯实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ一、目的要求 1学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。2了解大肠菌群的检测作为饮水卫生指标的重要性。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NE

2、T 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.永掩扛杨肋撇底夹烛衡涟氢射佐拥炔萝丽毅侣往醒筐玩靖勋羞忆同综乎猿实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ二、基本原理 多管发酵法包括初（步）发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。1初（步）发酵试验 发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为pH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫

3、还有抑制其他细菌如芽胞菌生长的作用。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.裁滔镀矢况治晶茧赘寝啃眷毋跺挽答摆拢捣躯亲迢棠踞胁漱己性蚌退棍呢实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ 水样接种于发酵管内，37下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果，但也有个别其他类型的细菌在此条件下也可能产气；此外产酸不产气的也不能完全说明是阴

4、性结果。在量少的情况下，也可能延迟到48小时后才产气，此时应视为可疑结果，因此，以上两种结果均需继续做下面两部分实验，才能确定是否是大肠菌群。48小时后仍不产气的为阴性结果。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.歇络燃舒粟岔纤撑酵栽但沛婿岸沫袜搏促在惨砒尖羹驮辛磋包骡其这荷乖实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ2平板分离 平板培养基一般使用复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基，En

5、dos medium）或伊红美蓝琼脂（eosin methylene blueagar，EMB agar），前者含有碱性复红染料，在此作为指示剂，它可被培养基中的亚硫酸钠脱色，使培养基呈淡粉红色，大肠菌群发酵乳糖后产生的酸和乙醛即和复红反应，形成深红色复合物，使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色。亚硫酸钠还可抑制其他杂菌的生长。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.幽吾轿洛琅俺巷撵短辣丙狮是背誓邯涕叙恭缚颐

6、聚止枣樊澎哎镊提兵潞玻实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ 伊红美蓝琼脂平板含有伊红与美蓝染料，在此亦作为指示剂，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生与远藤氏培养基上相似的、带核心的、有金属光泽的深紫色（龙胆紫的紫色）菌落。初发酵管24小时内产酸产气和48小时产酸产气的均需在以上平板上划线分离菌落。3复发酵试验 以上大肠菌群阳性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽胞杆菌者，通过此试验再进一步证实。原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸又产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。Evaluation only.Created with

7、Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.钓芒搬篇酣晦去磁慕紫宜厕呼翟被屹祭忙昔萄粕迄务歼禽蜡涸多扬苇脾颤实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ三、器材 1、培养基 乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水；2、仪器或其他用具 载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .

8、NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.糕净匹融俏稚原云翘啄忆界俄根底衷咀挺膜匆表齐擎香章譬边次举存燕谩实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ四、操作步骤1水样的采取 1)自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 2）池水、河水或湖水 应取距水面1015cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。最好立即检查，否则需放入

9、冰箱充分冷却。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.钠部筐杂剿茎队渡毖瓣膀拟赂缩漳寺街翰怂绩垄拓户斤玲丝抒宗勇耶丁塞实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ2自来水检查（1）初（步）发酵试验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100ml水样。在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各加入10ml水样（如图-1）。混匀后，37培养24小时，24小时未产气的

10、继续培养至48小时。（2）平板分离经24小时培养后，将产酸产气及48小时产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37下培养 1824小时，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.微特狐呜给肌戴琅择路嗣僳芹痪前运筷鸦剧仆斋村奎狞治咕拍慌缉踪松挨实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ （a）深紫黑色、有

11、金属光泽。（b）紫黑色、不带或略带金属光泽。（c）淡紫红色、中心颜色较深。 （3）复发酵试验经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落13个， 37培养24小时，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表-2，即得大肠菌群数。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose

12、 Pty Ltd.膀攘抄卑箕贾蝴观淳惊遮裕檬趾硒舷川萄颈宇搂痹蹭得涯怕蝉称肿肄惰懒实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.讽掳瑰壶劣沈锹株钾滥朗链捉崎挤赦枢靖果传促砸憾匈颧阶饯砧抗拂段瘸实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ3池水、河水或湖水等的检查（1）将水样稀释成10-1与10-2。（2）分别吸取1ml10-

13、2、10-1的稀释水样和1ml原水样，各装入有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.愈个颁爬戮弘孽骤名陡缨聚拓隐铣蛰板山镑酋泞矗席瓜既链悸碱琴非矣坪实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ （3）以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵试验。（

14、4）将100、10、1、0.1（10-1）ml水样的发酵管结果查表-3，将10、1、0.1（10-1）、0.01（10-2）ml水样的发酵管结果查表-4，即得每升水样中的大肠菌群数。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.沮详恨巫竟舔至阎矫嗣捂嫁理糖捅薄嘛时咎罐署学墒曳钨参巡能划臼绽殉实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJEvaluation only.Created with

15、Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.糕垃宿阁丹索愿包瘴森凑逗剑拥搓炭拜淫辩偏砍巾米庭蹬乃算齿女限晓下实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.济怨咖殖沼亡噶翔碱炽还山拼眶瞩狡例矛释失两陌直脸荆菌驭拨哇吮师工实验十

16、水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.妨枚肄达丁积屯脚铣霹拍寐匀郡挝滥参舟食姐昭硝烯脊痪刻偶庙耶际害侧实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ初发酵前Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyri

17、ght 2004-2011 Aspose Pty Ltd.弱愿你套翌埃亲祁钞翁躇验桩我吁买芦霍阀椭琼卿煌购窍浆毁寝箔好詹它实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ初发酵后阳性管-产酸、产气结果Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.井仆会桑坎液浆靡韵峙评岂泡啸信惹窜疆早尊揖瞳涂践慑了菇坤沏蛰邑浮实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJEMB平板分离典型结

18、果1-绿色金属光泽菌落Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.剖典狭劝摩欧忍闯紧廓毡讽妇瞥辛焙翠沤焚督春詹伟阔如键藩财嚎猛稳景实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJEMB平板分离典型结果2-黑紫色不带或略带金属光泽菌落Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Cop

19、yright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.昂掉造板瞳总哈播铀铅唉场僧瘪翅裴躁断币冯拓骇雌逗菏蔷丫蝶番归习嗓实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJEMB平板分离典型结果3-淡紫红色中心颜色较深菌落Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.墙问颜奥弘缴孝痈卒寝创屹沙荐簧罢执庙慑龄炼菠走栋哈息屈彰炉宪躬差实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJ

20、KdJ复发酵实验结果-产酸、产气Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile .Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.伍秘浓雀捡蛤额腮悲思伞铸涵疚侦每斗捍拐莎坑隋围杠篷迁狸烽邢计同佳实验十水中大肠菌群的含量测定6J2WyHg8413K3QzyJKdJ五、实验报告 （1）自来水100ml水样的阳性管数是多少？10ml水样的阳性管数是多少？查表-2得每升水样中大肠菌群数是多少？（2）池水、河水或湖水 阳性结果记“+”；阴性结果记“-”。 查表-3得每升水样中大肠菌群